關(guān)于豬藍耳病的六大疑問

問題一為什么藍耳病在許多場，經(jīng)常是免疫或不免疫都有發(fā)病很嚴(yán)重，帶來很大損失？我想不光是藍耳病，在我國豬病都有一個共性問題，就是診斷的問題。很多豬場發(fā)病在臨床現(xiàn)場一看就診斷，或?qū)嶒炇乙粰z出藍耳病毒就診斷為藍耳病了。這里要強調(diào)的是：藍耳病毒的檢出≠藍耳病的存在。病是一個因病原造成臨床影響的過程，而病原可以是潛伏在體內(nèi)，呈持續(xù)帶毒狀態(tài)，未見得一定有臨床問題。另一方面，藍耳病現(xiàn)在大部分用活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的時間內(nèi)都是可檢出的，所以檢出的病毒如果不做鑒別檢驗，可能會造成臨床上的誤診。問題二臨床上很多豬群檢出藍耳病毒已經(jīng)是常態(tài)，那么如何判斷這個豬場因為藍耳病毒的存在造成了疫情呢？

第一，在最近沒有免疫的情況下，使用雙份血清的評價方式。

即豬場一直在持續(xù)監(jiān)測的狀態(tài)下，當(dāng)感到臨床不穩(wěn)定時采血檢測，和原來監(jiān)測時的檢測結(jié)果對比。如果不穩(wěn)定時血清PRRSV抗體值突然升高，一下子有較大的變化，可以考慮是藍耳病毒帶來的影響。

第二，在一個場疫情的早期，對早期有代表性的發(fā)病豬及時剖檢、采樣送實驗室進行檢測診斷。

如果不是在疫情早期采樣，或者已經(jīng)采用了各種方法治療一段時間后再去做檢測，可能得出的診斷結(jié)論就會是多種病原混合感染，而不是這次疫情的病原?？赡墁F(xiàn)實中多數(shù)情況是，這個發(fā)病群等到檢測結(jié)果出來了再去采取措施控制已經(jīng)來不及了。其實可以在發(fā)病初期在采樣檢測同時根據(jù)臨床判斷采取控制措施。這樣等診斷結(jié)果出來了，就算之前的判斷錯誤，也可以證實本次發(fā)病的原因是什么，對今后的疫情防控也是有指導(dǎo)意義的。問題三藍耳病檢測采樣的靶組織和靶器官應(yīng)該是哪些呢？

對藍耳病來說血樣是很好的靶樣品，另外我們應(yīng)該對發(fā)病過程中臨床上有代表性的豬只進行剖檢，采取病毒檢出率高的靶組織（藍耳病毒除了血液，扁桃體和肺是最重要的靶器官外，在肺門淋巴結(jié)和下頜淋巴結(jié)也可以檢出）。

作為藍耳病毒，其最重要的靶組織就是扁桃體和肺臟，血液作為最容易采集的樣品，在藍耳病的檢出中意義也是非常大的。血液中病毒檢出時間較早，一般感染后3天左右就能從血液中檢出，同時持續(xù)的時間也非常長，可以達到2-3個月，所以作為活體檢測，血是最好的。作為死亡剖檢動物來說，扁桃體和肺臟是最重要的靶器官。問題四關(guān)于藍耳病如何做鑒別診斷，耳朵發(fā)藍就一定是藍耳病嗎？在實驗室檢測上如何區(qū)分高藍和經(jīng)典毒株？并不是耳朵發(fā)藍一定是藍耳病，末梢循環(huán)障礙時耳朵都會發(fā)藍。藍耳病有一個典型的癥狀，就是眼結(jié)膜炎，開始可能是漿液性的，后面可能會發(fā)展成粘液性的。高致病性藍耳病時20-40%的豬有神經(jīng)癥狀，因為藍耳病毒在后期會進入到腦組織中，造成一些神經(jīng)癥狀，可以看到運動障礙、抽搐、后軀麻痹等。扁桃體出血、潰瘍，肺組織實變。在敗血癥時可看到脾臟腫大淤血、梗死灶，但是這種腫大與豬瘟以及一些細菌性疾病時我們看到的脾腫是有區(qū)別的，除非后續(xù)繼發(fā)細菌感染，單一病毒造成的損傷是不太容易看到那種脾臟極度腫大的。臨床上近年來在PRRSV鑒別檢驗這塊要做的工作很多。我們檢測藍耳病毒所用的PCR方法可能是各種各樣的，有些可能直奔高致病藍耳病毒的檢測去了，有些可能檢測的是經(jīng)典藍耳。事實上，在所有的病原檢測方法里，沒有所謂針對經(jīng)典藍耳病毒的，只有藍耳病毒通用的RT-PCR。因為藍耳病毒通用檢測方法是針對藍耳病毒最保守的片段設(shè)計的引物，而引物不同靈敏度也不同，作為藍耳病毒的檢測方法來說，使用最保守片段引物是最靈敏的，我們用的通檢RT-PCR就是這樣的方法。比如使用通檢的RT-PCR方法檢出十個樣品里面有八個陽性，而用檢變異株RT-PCR方法（引物），十個里面檢出六個原來陽性較強的樣品。不是說漏掉的那兩個弱陽性就是經(jīng)典株，是因為兩種方法的靈敏度不同造成那兩個弱陽性樣本就沒有被檢出，假如送去測序它們有可能都是變異株。所以說使用通檢RT-PCR方法只能告訴你檢出來是藍耳病毒陽性，而不能確定是哪個毒株。而接下來再用檢變異株的RT-PCR方法檢顯示一部分陽性一部分陰性，是因為后一種方法靈敏度比通檢的方法低，原來強陽性的現(xiàn)在檢出是陽，弱陽性的檢出就是陰了，而不能說那一部分變?yōu)殛幮缘木褪墙?jīng)典株。有些場檢出藍耳既有高致病的也有經(jīng)典的，有可能是因為檢測方法靈敏度不同造成的對檢測結(jié)果的理解誤區(qū)。在通檢陽性的結(jié)果下，需要再做鑒別檢驗才能告訴你這個毒株是什么類型。問題五藍耳病與臨床癥狀相似的疾病如何做鑒別診斷？

對臨床癥狀相似或相同的病做鑒別診斷，這點非常重要。有些場在臨床診斷上，把其他疾病引發(fā)的癥狀歸結(jié)到藍耳病上。比如2012年在偽狂犬流行毒株造成的豬偽狂犬爆發(fā)場，發(fā)病豬肉眼看到與高致病性藍耳病相似的肺實變，但是做成組織切片就發(fā)現(xiàn)，情況大相徑庭。病豬肺臟在組織學(xué)上看到的是壞死灶，這是偽狂犬的典型病變，因為偽狂犬病就是以灶性壞死為組織學(xué)特點。但是藍耳病毒主要在肺泡2型細胞和巨噬細胞增殖，肺組織除了間質(zhì)性肺炎沒有其他變化。之后在肺免疫組化染色中檢出的是偽狂犬病毒而沒有藍耳病毒。這些臨床表現(xiàn)相似的疾病在組織學(xué)中可以清晰的做區(qū)分。問題六現(xiàn)在在藍耳病毒的檢測中還需要區(qū)別野毒和疫苗毒，那么豬場如何去區(qū)分是野毒感染還是疫苗毒，以及如何評價打苗以后的結(jié)果？怎么去做檢測？

實際上藍耳病毒的抗體檢測方法有很多，但是對現(xiàn)在大規(guī)模樣品檢測來說，ELISA是一個相對方便能夠在臨床上推廣應(yīng)用的方法。ELISA方法有很多商品化試劑盒，在國內(nèi)用的最多的是兩類。一類是N蛋白包被的試劑盒，一類是糖蛋白包被的試劑盒。那么這兩類試劑盒的蛋白包被是一個什么關(guān)系呢？與病毒免疫原性相關(guān)性更好的是膜上的糖蛋白，而病毒感染首先激發(fā)的是跟核酸相關(guān)的N蛋白。

那么在臨床下什么情況下該選什么蛋白包被的試劑盒呢？N蛋白激發(fā)抗體產(chǎn)生時間很早，如果是一個沒有感染過藍耳病的地區(qū)或場，一定是用N蛋白來做防控預(yù)警。還有就是做雙份抗體的檢測，一旦出現(xiàn)N蛋白抗體在沒有免疫的情況下出現(xiàn)一個跳升，一定和藍耳病毒感染發(fā)病相關(guān)性很大。

而作為疫苗的免疫效果的，則與糖蛋白相關(guān)性大，N蛋白產(chǎn)生的抗體只代表是不是有感染，與中和抗體及攻毒保護結(jié)果相關(guān)性不大。N蛋白抗體出現(xiàn)早，但是持續(xù)時間相對短，且與免疫保護相關(guān)