農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程ZLSOP002400農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行日期起草審核批準(zhǔn)部門質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名鄭亞敏白靜史修強(qiáng)簽名日期分發(fā)部門質(zhì)量管理部目的：建立農(nóng)藥殘留量測定法的操作規(guī)程，以規(guī)范操作過程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。適用范圍：飲片中的農(nóng)藥殘留量測定責(zé)任人：質(zhì)量管理部主任，檢驗(yàn)員內(nèi)容：一、有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定簡述有機(jī)氯類農(nóng)藥是農(nóng)藥史中使用量最大，使用歷史最長的一類農(nóng)藥，其中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，脂溶性強(qiáng)，殘效期長（可達(dá)30~50年之久），易在脂肪組織中蓄積，造成慢性中毒，嚴(yán)重危及人類健康。本法通過提取、凈化和富集等步驟制備供試品溶液，采用氣相色譜法，電子捕獲檢測器測定。儀器與用具氣相色譜儀，帶有63Ni—ECD電子捕獲器，載氣為高純氮（純度＞99.9999%）,必須安裝脫氧管。超聲儀。離心機(jī)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。色譜柱：SE-54或DB-1701彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25um）具塞刻度離心管（10m］），刻度濃縮瓶，具塞錐形瓶（100ml），移液管等。3、試藥與試液丙酮、石油醚（60~90℃）和二氧甲烷均為分析純，且全部經(jīng)過全玻璃整流裝置重蒸餾，經(jīng)氣象色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求。（或使用進(jìn)口的農(nóng)殘級的試劑）無水硫酸鈉和氯化鈉均為分析純，硫酸為優(yōu)級純。農(nóng)藥對照品：六六六（BHC）［包括a-BHC、B-BHC、Y-BHC、6-BHC四種異構(gòu)體］，滴滴涕（DDT）［包括PP'-DDE,PP'-DDD,OP'-DDT和PP'-DDT四種異構(gòu)體］及五氯硝基苯（PCNB），由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供標(biāo)示含量（濃度）的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，也可以采用國際認(rèn)可的用藥標(biāo)準(zhǔn)品自行配置。4、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)SE-54色譜柱：進(jìn)樣口溫度：230℃，檢測溫度：300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫；初始溫度100℃，每分鐘10℃升至220℃，再以每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。DB-1701色譜柱：進(jìn)樣口溫度：220℃，檢測器溫度：300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始溫度140℃，保持1分鐘，每分鐘10℃升至210℃，再以每分鐘20℃升至260℃，保持4分鐘。按上述條件操作，理論板數(shù)以a—BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1X106,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5.5、操作方法對照品儲備液的制備精密稱取六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）及五氧硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對照品適量，用石油醚（60?90℃）分別制成每1ml約含4?5ug的溶液，即得?；旌蠈φ掌穬湟旱闹苽渚芰咳∩鲜龈鲗φ掌穬湟?.5ml,置10ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀釋至刻度，搖勻，即得?；旌蠈φ掌啡芤旱闹苽渚芰咳∩鲜龌旌蠈φ掌穬湟?用石油醚（60~90℃）制成每1L分別含0ug、1ug、5ug、10ug、50ug、100ug、250ug的溶液,即得。供試品溶液的制備藥材或飲片取供試品于60℃干燥4小時(shí)，粉碎成細(xì)粉，取約2g,精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml,稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g,精密加二氯甲烷30ml,稱定重量，超聲處理15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置（使分層），將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml,于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60~90℃）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈,用石油醚（60~90℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚（60?90℃）精密稀釋至5ml,小心加入硫酸1ml,振搖1分鐘，離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中，接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，40℃下（或用氮?dú)猓⑷芤簼饪s至適量，精密稀釋至1ml，即得。制劑取供試品，研成細(xì)粉（蜜丸切碎，液體直接量?。?，精密稱取適量（相當(dāng)于原藥材2g），以下按上述供試品溶液制備法制備，即得供試品溶液。測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)的混合對照品溶液各1ul，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。6注意事項(xiàng)本實(shí)驗(yàn)所用器皿應(yīng)嚴(yán)格清洗（不能殘存鹵離子）供試品溶液制備時(shí)，有機(jī)相減壓濃縮務(wù)必至近干，避免待測成分損失。為防止假陽性結(jié)果，可選擇不同極性的色譜柱進(jìn)行驗(yàn)證，有條件的可采用氣質(zhì)聯(lián)用予以確認(rèn)如樣品中有其他成分的干擾，可適當(dāng)?shù)母淖兩V條件，但需要進(jìn)行空白驗(yàn)證。二、有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量測定法1、簡述很多有機(jī)磷類農(nóng)藥具有毒性，其殘留嚴(yán)重危及人體健康。中國藥典（2010版一部）收載了有機(jī)磷類農(nóng)藥（對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷）的測定方法本法通過提取、凈化和富集等步驟制備供試品溶液，采用氣相色譜法，氮磷檢測器測定2儀器與用具氣象色譜儀，帶有氮磷檢測器（NPD），載氣為高純氮（純度＞99.9999%）。超聲儀旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀多功能真空樣品處理器、活性炭小柱（120~400目，石墨碳填料0.25g，內(nèi)徑0.9cm）氮吹儀色譜柱：DB—17MS或HP—5彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.25mmX0.25um）或類似極性的毛細(xì)管柱塞錐形瓶、250ml平底燒瓶、棕色量瓶、移液管等3、試藥與試液無水硫酸鈉為分析純乙酸乙酯、正己烷（農(nóng)殘級或分析純試劑經(jīng)過全玻璃蒸餾裝置重蒸餾，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求）。農(nóng)藥對照品硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷，由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心及農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所提供，其純度大于99%；也可以使用國際認(rèn)可的、純度要求等符合規(guī)定的進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)進(jìn)樣口溫度220℃，檢測器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序溫度：初始120℃，每分鐘10℃升至200℃，每分鐘5℃升至240℃，保持2分鐘，每分鐘20℃升至270℃，保持0.5分鐘，理論板數(shù)按敵敵畏峰計(jì)算應(yīng)不低于6000，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。5操作方法對照品儲備液的制備精密稱取硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對照品適量，用乙酸乙酯分別制成每1ml含100ug的溶液，即得?；旌蠈φ掌穬湟旱闹苽渚芰咳∩鲜龈鲗φ掌穬湟?ml，置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得?；旌蠈φ掌啡芤旱闹苽渚芰咳∩鲜龌旌蠈φ掌穬湟?，用乙酸乙酯制成每1ml分別含0.1ug、0.5ug、1ug、2ug、5ug的溶液，即得。供試品溶液的制備藥材取供試品粉末（過二號篩）約5g，精密稱定，加無水硫酸鈉5g，加入乙酸乙酯50?100ml，冰浴超聲處理3分鐘，放置，取上層濾液，藥渣加乙酸乙酯30?50ml，冰浴超聲處理2分鐘，放置，濾過，合并兩次濾液，用少量的乙酸乙酯洗滌濾紙及殘?jiān)?，與上述濾液合并。取濾液與40℃下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取1ml，置活性炭小柱（120?400目，0.25g，內(nèi)徑0.9cm，用乙酸乙酯5ml預(yù)洗）上，置多功能真空樣品處理器上，用正己烷一乙酸乙酯（1：1）的混合溶液5ml洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。同法制備空白樣品。測定法按上述色譜條件操作，分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)濃度的混合對照品溶液各1ul分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量。6、注意事項(xiàng)所用玻璃儀器不能用含磷洗滌劑洗滌，應(yīng)用洗液浸泡洗滌，使用前用丙酮蕩洗并揮干溶劑。乙酸乙酯提取液減壓濃縮時(shí)，水浴溫度不能高于40℃，且減壓濃縮務(wù)必至近干，避免待測成分損失。為防止假陽性結(jié)果，可選擇不同極性的色譜柱進(jìn)行驗(yàn)證，有條件的可采用氣質(zhì)聯(lián)用予以確認(rèn)。本項(xiàng)方法的加樣回收率應(yīng)為70%—110%。如由于具體實(shí)驗(yàn)要求對本操作規(guī)程的色譜條件及操作步驟進(jìn)行了修改，應(yīng)在原始記錄上予以記錄.三、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定法1、簡述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥與DDT同屬軸突毒劑，其引起的中毒征象十分相似。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的毒理作用迅速，比DDT復(fù)雜，嚴(yán)重危及人體健康。中國藥典2010年版一部收載了擬除蟲菊酯類農(nóng)藥（氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯）殘留量的測定方法。本法通過提取、凈化和富集等步驟制備供試品溶液，采用氣相色譜法，電子捕獲檢測器測定。2、儀器與用具氣象色譜儀，帶有63Ni—ECD電子捕獲器。載氣為高純氮（純度＞99.9999%）。，必須安裝脫氧管。超聲儀離心機(jī)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀色譜柱SE—54或DB—5彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25um）具塞錐形瓶、圓底燒瓶、量瓶、移液管等。3、試藥與試液3.1、丙酮、石油醚（60~90℃）和乙醚均為分析純，且全部經(jīng)過玻璃蒸餾裝置重蒸餾，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求（也可使用進(jìn)口的農(nóng)殘級的試劑）。3.2、無水硫酸鈉氧化鋁（80—100目）微晶纖維素為分析純3.3、弗羅里硅土3.4、農(nóng)藥對照品：氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯對照品（由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供），純度大于98%。4、色譜條件與系統(tǒng)實(shí)用性試驗(yàn)進(jìn)樣口溫度220℃，檢測器溫度300℃，分流進(jìn)樣或不分流進(jìn)樣。分流比：20：1：5：1.程序溫度：初始160℃，保持1分鐘，每分鐘10℃升至278℃，保持0.5分鐘，每分鐘1℃升至290℃，保持5分鐘，理論板數(shù)按敵敵畏峰計(jì)算應(yīng)不低于1X105,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。注：操作中可根據(jù)樣品實(shí)際情況，選擇1分鐘后分流進(jìn)樣，初始50℃（低于溶劑沸點(diǎn)10℃），以每分鐘30℃升至160℃，保持1分鐘，以每分鐘10℃升至178℃保持0.5分鐘，再以每分鐘1℃升至290℃，保持5分鐘。5、操作方法對照品儲備液的制備精密稱取氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯對照品適量，用石油醚（60?90℃）分別制成每1ml含20?25ug的溶液，即得?；旌蠈φ掌穬湟旱闹苽渚芰咳∩鲜龈鲗φ掌啡芤簝湟?ml，置10ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀釋至刻度，搖勻，即得。混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品儲備液，用石油醚（60?90℃）制成每1L分別含0ug、4ug.8ug.40ug200ug的溶液，即得。供試品溶液的制備藥材取供試品與60℃干燥4小時(shí)，粉碎成細(xì)粉（過五號篩），取約1?2g,精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加石油醚（60?90℃）一丙酮（4：1）混合溶液30ml,超聲處理15分鐘，濾過，藥渣再重復(fù)上述操作2次后，合并濾液，濾液加入適量的無水硫酸鈉脫水后，置100ml圓底燒瓶中，與40?45℃減壓濃縮至近干，用少量的石油醚（60~90℃）反復(fù)操作至丙酮除凈，殘?jiān)眠m量的石油醚（60?90℃）溶解，置玻璃層析柱［混合小柱（內(nèi)徑1?1.5cm的玻璃柱），從下至上依次是無水硫酸鈉2g、弗羅里硅土4g、微晶纖維素1g、氧化鋁（100目）1g和無水硫酸鈉2g,用加石油醚（60?90℃）一丙酮（4：1）混合溶液20ml預(yù)洗］上，用加石油醚（60?90℃）一丙酮（4：1）混合溶液90ml洗脫，收集洗脫液，于40?45℃減壓濃縮至近干，再用石油醚（60?90℃）3?4ml重復(fù)操作至乙醚除凈，殘?jiān)檬兔眩?0?90℃）溶解