《雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》 (報(bào)批稿)

ICS65.020.20

CCSB39

32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DBXX/TXXXX—XXXX

雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

CodeofpracticeforspawnfactoryproductionofAgaricusbisporus

（報(bào)批稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DBXX/TXXXX—XXXX

I

DBXX/TXXXX—XXXX

雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)的技術(shù)要求、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制與檢驗(yàn)和標(biāo)簽、標(biāo)志、包

裝、運(yùn)輸及貯存的要求。

本文件適用于雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB191包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志

GB/T12728食用菌術(shù)語

GB19171雙孢蘑菇菌種

GB50072冷庫設(shè)計(jì)規(guī)范

GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求

3術(shù)語和定義

GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

批次spawnbatch

同一來源、同一品種、同一培養(yǎng)基配方、同一天接種、同一培養(yǎng)條件和質(zhì)量基本一致的符合規(guī)定數(shù)

量的菌種。每批次數(shù)量母種≥50支試管（或培養(yǎng)皿）、原種≥50瓶（袋，0.5kg計(jì)）、栽培種≥2000

袋（0.5kg計(jì)）。

4技術(shù)要求

菌種廠條件

4.1.1廠區(qū)選址

地勢高燥，通風(fēng)良好，排水暢通，交通便利。1000m之內(nèi)無規(guī)模養(yǎng)殖的禽畜舍、垃圾和糞便堆積場，

無污水、廢氣、廢渣、煙塵和粉塵污染源，500m內(nèi)無食用菌栽培場、集貿(mào)市場。

4.1.2廠房布局

1

DBXX/TXXXX—XXXX

4.1.2.1總體要求

廠區(qū)應(yīng)設(shè)置攤曬場、原材料庫、配料分裝室(場)、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、檢驗(yàn)室、冷

藏庫等。應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。

4.1.2.2攤曬場

地面平整，光照充足，空曠寬敞，相互隔離，遠(yuǎn)離火源。

4.1.2.3原材料庫

要防雨防潮，防蟲、防鼠、防火、防雜菌污染。

4.1.2.4配料分裝室（場）

水電方便，空間充足。用于拌料機(jī)、裝袋機(jī)等大型機(jī)具作業(yè)。

4.1.2.5滅菌室

水電安裝合理，操作安全，應(yīng)用高溫高壓自動化控制滅菌柜，滅菌柜進(jìn)、出口分離。

4.1.2.6冷卻室

配套安裝新風(fēng)輸送系統(tǒng)，冷卻室與外界隔絕，具備空氣萬級凈化度，潔凈、無塵、制冷散熱。應(yīng)符

合GB50073的規(guī)定。

4.1.2.7接種室

配套安裝新風(fēng)輸送系統(tǒng)，新風(fēng)口處新風(fēng)長期開通，保持室內(nèi)風(fēng)壓高于室外。接種平臺上層流罩下空

氣凈化程度應(yīng)達(dá)百級，內(nèi)壁和地面光滑，易于清洗和消毒。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。

4.1.2.8培養(yǎng)室

配套新風(fēng)輸送系統(tǒng)，空氣凈化程度達(dá)萬級，溫度自動控制；內(nèi)壁和房屋頂部光滑，便于清洗和消毒；

墻壁厚度適當(dāng)。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。

4.1.2.9檢驗(yàn)室

配套新風(fēng)輸送系統(tǒng)。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。

4.1.2.10冷藏庫

應(yīng)符合GB50072的要求。

培養(yǎng)容器

4.2.1使用原則

每批次菌種的容器規(guī)格保持一致。

4.2.2母種培養(yǎng)容器

使用20mm×200mm規(guī)格玻璃試管，或直徑9cm培養(yǎng)皿。棉塞要使用梳棉或化纖棉，也可用硅膠塞

代替棉塞，不可使用脫脂棉。

2

DBXX/TXXXX—XXXX

4.2.3原種培養(yǎng)容器

使用耐126℃高溫、不影響觀察菌絲生長情況的帶蓋塑料瓶或玻璃瓶，或耐126℃高溫、具孔徑0.2

μm～0.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋。

4.2.4栽培種培養(yǎng)容器

使用尺寸≥18cm×34cm，耐126℃高溫的聚丙烯塑料折角袋，或耐126℃高溫、具0.5μm～1.5

μm孔徑透氣膜的聚丙烯塑料袋。

培養(yǎng)基原料

4.3.1化學(xué)試劑類

化學(xué)試劑類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，應(yīng)使用化學(xué)純或以上級別的試劑。

4.3.2生物制劑和天然材料類

生物制劑如酵母粉和蛋白胨，天然材料如棉籽殼、麥麩等，原料應(yīng)新鮮、無霉變、潔凈、干燥。

人員要求

生產(chǎn)技術(shù)人員、檢驗(yàn)人員應(yīng)取得菌種生產(chǎn)檢驗(yàn)所需相應(yīng)資質(zhì)。

5生產(chǎn)工藝

工藝流程

5.1.1母種生產(chǎn)工藝流程

培養(yǎng)基配制→高壓滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→冷貯。

5.1.2原種、栽培種生產(chǎn)工藝流程

培養(yǎng)基配制→浸泡→蒸煮→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→裝箱→冷貯→冷鏈運(yùn)輸。

培養(yǎng)基配方

配方見附錄A。

裝料

5.3.1原種培養(yǎng)基裝料

宜用850mL耐高溫塑料瓶、玻璃瓶，裝料500g后，擦洗瓶口旋緊瓶蓋；或18cm×40cm，具孔徑

0.2μm～0.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料1000g，料裝好后折下袋口與并排的菌袋靠緊。

5.3.2栽培種培養(yǎng)基裝料

宜用18cm×34cm聚丙烯塑料折角袋，裝料1000g后，套上蓋子；或40cm×60cm，具孔徑0.5μm～

1.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料2500g，裝料后折下袋口與并排菌袋靠緊。

滅菌

3

DBXX/TXXXX—XXXX

應(yīng)在培養(yǎng)基配制完成后4h內(nèi)進(jìn)行滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌條件：0.11MPa～0.12MPa，溫度121℃，

50min。原種培養(yǎng)基、栽培種培養(yǎng)基滅菌條件0.14MPa～0.15MPa，2.5h，121℃。裝料容量較大時(shí)，

滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長。

冷卻

滅菌完畢并降溫后，將料拖出滅菌柜。待接種的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋），經(jīng)冷卻到25℃

±1℃，及時(shí)接種。

接種

5.6.1接種準(zhǔn)備

接種前15h內(nèi)，將接種室室內(nèi)空間和地面進(jìn)行消毒，接種2h前開啟室內(nèi)循環(huán)風(fēng)凈化空氣。接種人

員在準(zhǔn)備室穿上防護(hù)工作服，經(jīng)過風(fēng)淋門進(jìn)入接種室。

5.6.2接種方法

在無菌室內(nèi)百級空氣凈化工作臺上按無菌操作程序接種。用塑料蓋子的菌種，開蓋接種時(shí)間不超過

5s。用無菌透氣膜的聚丙烯塑料袋接種，原種接入一塊約1.5cm×1.5cm母種，栽培種播入約50g菌

種，及時(shí)將袋口用封口機(jī)封閉，并將袋內(nèi)菌種與培養(yǎng)料搖勻，整理好菌袋豎立于周轉(zhuǎn)筐中。每一筐培養(yǎng)

容器應(yīng)接同一菌株，接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽。

5.6.3接種后處理

接種后，要及時(shí)清理，掃除廢物，應(yīng)用吸塵器吸除灰塵，并擦洗消毒傳送帶和地面。

培養(yǎng)

不同菌株應(yīng)分區(qū)分室培養(yǎng)。培養(yǎng)室使用前1d～2d，進(jìn)行清潔消毒并開啟新風(fēng)系統(tǒng)。在發(fā)菌12d

內(nèi)室內(nèi)溫度控制24℃±1℃，發(fā)菌13d～30d溫度控制21℃±1℃，發(fā)菌30d至菌絲長滿溫度控制

19℃±1℃。保持空氣相對濕度60%，二氧化碳濃度5000ppm，黑暗培養(yǎng)。

入庫

當(dāng)菌絲長滿時(shí)，應(yīng)及時(shí)整架移入冷庫貯存。

6質(zhì)量控制與檢驗(yàn)

品種與種源質(zhì)量檢驗(yàn)

6.1.1品種

從具相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種，且種性清楚。不使用來歷不明、種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未

經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)的菌種。

6.1.2種源質(zhì)量檢驗(yàn)

母種生產(chǎn)單位每年在種源進(jìn)入擴(kuò)大生產(chǎn)程序之前，應(yīng)進(jìn)行菌種質(zhì)量和種性檢驗(yàn)，包括純度、活力、

菌絲長勢一致性、菌絲生長速度、菌落外觀等，做出菇試驗(yàn)，驗(yàn)證種性。種源出菇試驗(yàn)方法及種源質(zhì)量

應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。

4

DBXX/TXXXX—XXXX

擴(kuò)繁移植

1支母種擴(kuò)大繁殖不應(yīng)超過20支母種，擴(kuò)繁代數(shù)不應(yīng)超過5代。1支母種移植擴(kuò)大原種不應(yīng)超過6瓶

（袋）；1瓶（袋）原種移植擴(kuò)大栽培種不應(yīng)超過50瓶（袋）。

滅菌效果檢驗(yàn)

母種培養(yǎng)基隨機(jī)抽取3%～5%的試管，直接置于28℃恒溫培養(yǎng)；原種和栽培種培養(yǎng)基按每次滅菌的

數(shù)量隨機(jī)抽取1%作為樣品，挑取其中的基質(zhì)顆粒經(jīng)無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基中，于28℃恒溫培養(yǎng)。48

h后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。

培養(yǎng)質(zhì)量要求

各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求詳見附錄B，應(yīng)符合GB19171的規(guī)定。

記錄

生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)有詳細(xì)記錄，建立菌種可追溯制度，保存記錄至此批菌種栽培出菇采收結(jié)束。

留樣

各級菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號2支（瓶、袋），母種于4℃±1℃貯存；原種

和栽培種于5℃±1℃貯存，貯存至少120d。

7標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸及貯存

標(biāo)簽、標(biāo)志

出售的菌種應(yīng)貼標(biāo)簽，注明品種名稱、菌種級別、接種日期、生產(chǎn)單位、地址電話等。外包裝上

應(yīng)有防曬、防潮、防倒立、防高溫、防雨、防重壓等標(biāo)志，標(biāo)志應(yīng)符合GB191規(guī)定。

包裝

母種的外包裝用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙盒，原種和裁培種的外包裝使用有足夠強(qiáng)度的紙箱。盒（箱）

內(nèi)除菌種外的空隙用輕質(zhì)材料填滿塞牢。

運(yùn)輸

各級菌種運(yùn)輸時(shí)不得與有毒有害物品混裝混運(yùn)。運(yùn)輸中應(yīng)做好防曬、防潮、防雨、防凍、防高溫及

防止雜菌污染等措施，當(dāng)氣溫高于20℃時(shí)應(yīng)使用冷鏈運(yùn)送。

貯存

應(yīng)在干燥、低溫、無陽光直射、無污染的冰箱或冷庫中貯存。母種置于4℃±1℃冰箱、原種和栽

培種置于5℃±1℃的冷庫內(nèi)貯存，母種貯存期不超過90d，原種貯存期不超過40d，栽培種貯存期不

超過90d。

5

DBXX/TXXXX—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

雙孢蘑菇各級菌種的常用培養(yǎng)基配方

A.1母種培養(yǎng)基

使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)或綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA），加上3%發(fā)酵草料水

煮液，pH值6.5～7.0。

A.2原種培養(yǎng)基

A.2.1小米棉籽殼培養(yǎng)基

小米20%～40%，棉籽殼發(fā)酵料55%～75%，生石灰2%，碳酸鈣3%，含水量55%～60%，pH值8～9。

A.2.2棉籽殼麥麩培養(yǎng)基

棉籽殼和麥麩發(fā)酵料98%，石灰2%，含水量50%～55%，pH值8～9。培養(yǎng)料裝瓶填料要松緊適度，瓶

中間打一小孔。

A.3栽培種培養(yǎng)基

A.3.1小麥棉籽殼

紅皮小麥86%，棉籽殼發(fā)酵料10%，生石灰1%，碳酸鈣3%，經(jīng)浸泡后小麥含水量43%，浸泡后的小麥

經(jīng)100℃蒸煮，蒸煮后小麥含水量45%，棉籽殼發(fā)酵料含水量52%，pH值8～9。

A.3.2小米棉籽殼

小米35%，棉籽殼發(fā)酵料60%，生石灰2%，碳酸鈣3%，含水量46%～50%，pH值8～9。

6

DBXX/TXXXX—XXXX

B

B

附錄B

（資料性）

雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求

菌種菌絲菌落或培養(yǎng)基培養(yǎng)物鏡檢氣味培養(yǎng)周期

菌絲體潔白或米白、

濃密、羽毛狀或葉脈菌落邊緣整齊，無膏狀、鏡檢菌絲粗壯，無雜有雙孢蘑菇菌種特適溫（24℃±1℃）下，

母種狀，菌絲體表面均勻、蠟狀細(xì)菌或酵母菌菌落菌菌絲及孢子，無蟲有的香味，無酸、臭、15d～20d長滿試管（或培

平整、無角變，無菌及霉菌菌落。及蟲卵。霉等異味。養(yǎng)皿）。

絲分泌物。

菌絲體潔白濃密、生

長旺健，培養(yǎng)物表面

菌絲粗壯、無雜菌菌有雙孢蘑菇菌種特適溫（24℃±1℃）下菌

菌絲體生長均勻，無培養(yǎng)物表面無分泌物，

原種絲和孢子、無蟲及蟲有的香味，無酸、臭、絲長滿瓶不超過45