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第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程1教學(xué)ppt一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆1.概念與操作流程2教學(xué)ppt2.條件(1)無(wú)菌、無(wú)毒:_________________________無(wú)菌處理,添加__________,定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。(2)營(yíng)養(yǎng):除正常的有機(jī)和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)外,加入____________。(3)適宜的溫度和pH:溫度為_(kāi)_________(哺乳動(dòng)物),pH為_(kāi)___________。(4)氣體環(huán)境:含_____的空氣加______的混合氣體。3.應(yīng)用生物制品的生產(chǎn)、檢測(cè)__________、醫(yī)學(xué)研究。對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具抗生素動(dòng)物血清37℃左右7.2~7.495%5%CO2有毒物質(zhì)3教學(xué)ppt【點(diǎn)撥】(1)胰蛋白酶作用對(duì)象主要是細(xì)胞間質(zhì),以得到單個(gè)的細(xì)胞。另外不能用胃蛋白酶替代的原因主要是胃蛋白酶的最適pH與細(xì)胞培養(yǎng)液的pH相差太大。(2)細(xì)胞培養(yǎng)液中添加動(dòng)物血清的目的是彌補(bǔ)缺少的營(yíng)養(yǎng),因?yàn)閷?duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)有完全搞清楚,用血清來(lái)模擬體內(nèi)的細(xì)胞生活環(huán)境。4教學(xué)ppt4.細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆(1)克隆:指遺傳上完全相同的分子、細(xì)胞或來(lái)自同一祖先的_________的_________群體。(2)體細(xì)胞克?。簩⒐w體細(xì)胞的________與受體去核卵細(xì)胞的________進(jìn)行人工組合,借助于卵細(xì)胞的發(fā)育能力,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進(jìn)而形成個(gè)體的技術(shù)。其關(guān)鍵是______________。(3)細(xì)胞核移植:利用__________技術(shù)等將某種動(dòng)物細(xì)胞的_________移入同種或異種動(dòng)物的去除細(xì)胞核的成熟_________內(nèi)的技術(shù)。生物個(gè)體無(wú)性繁殖細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核移植技術(shù)顯微操作胞核細(xì)卵細(xì)胞5教學(xué)ppt(4)克隆動(dòng)物過(guò)程:(5)克隆技術(shù)的意義:在克服動(dòng)物______雜交繁殖障礙、創(chuàng)造_______等方面具有重要的科學(xué)意義和潛在的__________。體細(xì)胞融合的細(xì)胞種間新物種經(jīng)濟(jì)價(jià)值6教學(xué)ppt二、細(xì)胞融合和單克隆抗體1.細(xì)胞融合(1)含義:在一定的條件下將_____或_____細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。a._________:如電場(chǎng)法(2)融合方法b.化學(xué)法:如__________法c.生物法:如___________法(3)應(yīng)用:制備____________。物理法聚乙二醇仙臺(tái)病毒單克隆抗體2個(gè)多個(gè)7教學(xué)ppt2.單克隆抗體技術(shù)(1)制備過(guò)程:脾臟雜交瘤細(xì)胞同種細(xì)胞雜交細(xì)胞單克隆8教學(xué)ppt(2)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):________強(qiáng),純度高,_______高,產(chǎn)量大,容易標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)等。(3)單克隆抗體的應(yīng)用:①用于治療腫瘤;②治療免疫系統(tǒng)紊亂引起的疾??;③用于器官移植。特異性靈敏度9教學(xué)ppt【點(diǎn)撥】(1)植物細(xì)胞融合獲得的雜種細(xì)胞可形成雜種植株,而動(dòng)物細(xì)胞融合獲得的雜交細(xì)胞不會(huì)發(fā)育成個(gè)體。(2)制備單克隆抗體時(shí),需進(jìn)行兩次篩選,第一次是為了選出雜交瘤細(xì)胞,第二次是為了獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。10教學(xué)ppt植物組織培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植的比較植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)核移植過(guò)程外植體?愈傷組織根、芽或胚狀體試管苗脫分化再分化動(dòng)物組織塊細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)(細(xì)胞貼壁生長(zhǎng))胰蛋白酶處理,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)?傳代培養(yǎng)?少數(shù)細(xì)胞獲得不死性(癌細(xì)胞)剪碎、胰蛋白酶處理放入培養(yǎng)瓶接觸抑制10~50代供體受體體細(xì)胞核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞早期胚胎個(gè)體導(dǎo)入去核胚胎移植11教學(xué)ppt植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)核移植結(jié)果關(guān)鍵環(huán)節(jié)與外植體完全相同的個(gè)體相同分化程度的細(xì)胞群與供體基本相同的個(gè)體細(xì)胞的脫分化、再分化、分化細(xì)胞分化、細(xì)胞癌變核融合、細(xì)胞分化12教學(xué)ppt【高考警示鐘】1.植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程都存在細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程,但植物細(xì)胞可以先分裂再分化,而動(dòng)物細(xì)胞不分化只分裂。2.區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關(guān)鍵是是否分瓶培養(yǎng)。貼壁生長(zhǎng)到一定程度需要用胰蛋白酶處理,然后再分瓶培養(yǎng),原代培養(yǎng)結(jié)束,開(kāi)始了傳代培養(yǎng)。3.植物組織培養(yǎng)成的植株與提供外植體的植株完全相同,而動(dòng)物細(xì)胞核移植形成的個(gè)體與供體大部分性狀相同,也有部分性狀與受體相同。13教學(xué)ppt【典例訓(xùn)練1】(2012·靖江模擬)人的血清白蛋白(HAS)在臨床上需求量很大,通常從血液中提取。但由于艾滋病病毒等的威脅與日俱增,使人們對(duì)血液制品的使用顧慮重重。如果應(yīng)用現(xiàn)代生物科學(xué)技術(shù),將人的血清白蛋白基因?qū)肽膛<?xì)胞中,那么利用牛的乳汁生產(chǎn)血清白蛋白就會(huì)安全、高效地滿足人類需求。如圖是利用奶牛乳汁生產(chǎn)人類血清白蛋白的圖解,根據(jù)圖示回答:14教學(xué)ppt(1)以上過(guò)程涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)中,屬于細(xì)胞工程的有____________________________________________________。(2)在基因工程中,我們稱①為目的基因,請(qǐng)舉出獲取目的基因的主要方法:__________________________________________(至少答兩種)。在①進(jìn)入③之前要構(gòu)建基因表達(dá)載體,這是基因工程的核心,除目的基因外,基因表達(dá)載體還必須含有______________________,將①導(dǎo)入③的常用方法是_________。15教學(xué)ppt(3)圖中②一般經(jīng)過(guò)________________處理可以得到③,從③到④的過(guò)程中一般利用未受精的卵母細(xì)胞去核后作為受體細(xì)胞,對(duì)卵母細(xì)胞的去核處理一般選擇在_________________________期進(jìn)行。(4)用④細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)育成胚胎時(shí),一般不超過(guò)_______代,原因是_______________________________________________,此培養(yǎng)過(guò)程與植物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基有何不同?_____________________________________________________。16教學(xué)ppt【解題指南】1.考查實(shí)質(zhì):動(dòng)物細(xì)胞核移植過(guò)程、基因工程操作過(guò)程。2.解題關(guān)鍵:(1)明確①→③過(guò)程是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,④的形成過(guò)程為核移植;(2)明確細(xì)胞培養(yǎng)在10代以內(nèi),細(xì)胞核型不會(huì)發(fā)生變化。17教學(xué)ppt【解析】(1)圖中形成④的過(guò)程為核移植,由重組細(xì)胞發(fā)育成⑤的過(guò)程需經(jīng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。(2)獲取目的基因的方法主要有PCR擴(kuò)增技術(shù)、人工合成法和從基因文庫(kù)中提取法,獲取的目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。(3)動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞常用胰蛋白酶處理,對(duì)卵母細(xì)胞的去核處理一般選擇在MⅡ時(shí)期。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),一般不超過(guò)10代,超過(guò)10代后細(xì)胞的核型可能會(huì)發(fā)生變化。18教學(xué)ppt答案:(1)核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(2)基因文庫(kù)中提取、PCR技術(shù)擴(kuò)增、人工化學(xué)合成(兩種即可)復(fù)制區(qū)、復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因顯微注射法(3)胰蛋白酶MⅡ(或減數(shù)第二次分裂中)(4)10 10代以內(nèi)的細(xì)胞,細(xì)胞核型不發(fā)生變化此培養(yǎng)基中加入動(dòng)物血清、血漿等19教學(xué)ppt【變式備選】(2012·淮安模擬)某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時(shí),列表比較了動(dòng)植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容,你認(rèn)為有幾處錯(cuò)誤()A.0 B.1 C.2 D.3植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和融合單克隆抗體的制備等特殊處理酶解法去除細(xì)胞壁胃蛋白酶處理制細(xì)胞懸浮液融合方法物理方法、化學(xué)方法、生物方法物理方法、化學(xué)方法、生物方法典型應(yīng)用無(wú)病毒植物的培育、人工種子、種子植物雜交等單克隆抗體的制備等培養(yǎng)基
區(qū)別所用的糖必須為纖維素所用的糖為葡萄糖且動(dòng)物血清不可缺少20教學(xué)ppt【解析】選D。動(dòng)物的組織塊剪碎后只能用胰蛋白酶處理,而不能用胃蛋白酶處理;植物的原生質(zhì)體的促融方法可用物理法或化學(xué)法,而不用生物法;植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中所用的糖是蔗糖,有時(shí)也加葡萄糖和果糖。21教學(xué)ppt動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性過(guò)程細(xì)胞A、B
原生質(zhì)體A、B
融合的原生質(zhì)體雜種細(xì)胞雜種植株細(xì)胞A、B雜交細(xì)胞多個(gè)相同
雜交細(xì)胞去壁融合植物組織培養(yǎng)有絲分裂融合22教學(xué)ppt植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合相關(guān)酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶融合方法物理法:電場(chǎng)誘導(dǎo)法;化學(xué)法:聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞意義克服了遠(yuǎn)源雜交的不親和性,獲得雜種植株突破了有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)源雜交成為可能23教學(xué)ppt2.單克隆抗體制備的關(guān)鍵環(huán)節(jié)(1)取相應(yīng)B淋巴細(xì)胞前必須先注射相應(yīng)抗原,否則不能獲得單克隆抗體。(2)細(xì)胞融合后需經(jīng)二次篩選:第一次:在特定的選擇性培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)和融合的具有同種核的細(xì)胞(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞)都會(huì)死亡,只有融合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)才能生長(zhǎng)。這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖,又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。24教學(xué)ppt第二次:經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞(很多種雜交瘤細(xì)胞),需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)篩選后才可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。25教學(xué)ppt【高考警示鐘】1.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合中酶的作用對(duì)象不同,纖維素酶和果膠酶作用于細(xì)胞壁,而胰蛋白酶等作用于細(xì)胞間質(zhì)。2.滅活的病毒保持了其抗原性,但毒性消失。3.植物雜交細(xì)胞在激素誘導(dǎo)下能表達(dá)出全能性,但動(dòng)物雜交細(xì)胞的全能性不能表達(dá)。26教學(xué)ppt【典例訓(xùn)練2】有性生殖的生物產(chǎn)生后代需進(jìn)行受精作用,植物體細(xì)胞雜交要進(jìn)行原生質(zhì)體的融合,單克隆抗體的制備需進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞融合,可見(jiàn)細(xì)胞的融合技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。下列為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程,據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題:27教學(xué)ppt(1)若a、b分別是基因型為Hhrr、hhRr兩個(gè)煙草品種的花粉,且這兩對(duì)基因分別位于兩對(duì)同源染色體上。由于受一對(duì)隱性純合基因(rr或hh)的作用,在光照強(qiáng)度大于800lx時(shí)都不能生長(zhǎng)。要想從融合細(xì)胞的培養(yǎng)液中分離出基因型為HhRr的雜種細(xì)胞,較為簡(jiǎn)便的篩選方法是______________________________。(2)若a、b表示兩種植物體細(xì)胞,則由d細(xì)胞形成雜種植株的原理是_________________________,這種育種方法的優(yōu)點(diǎn)是________________________________________。28教學(xué)ppt(3)若a、b分別為骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞,則d細(xì)胞特點(diǎn)是_______________________。由d細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較,具有_________________________的特點(diǎn)。生產(chǎn)上一般不能通過(guò)直接培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞的方法生產(chǎn)單克隆抗體的主要原因是____________________________。(4)下列各圖表示單克隆抗體制備過(guò)程的各階段圖解,請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過(guò)程的順序連接起來(lái):______________________________。29教學(xué)ppt30教學(xué)ppt【解題指南】1.考查實(shí)質(zhì):植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體的制備。2.解題關(guān)鍵:(1)hr是a、b產(chǎn)生配子中相同的配子,另外兩種配子分別是Hr、hR。(2)兩個(gè)不同的細(xì)胞形成的雜種細(xì)胞發(fā)育成植株。(3)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)、B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)與融合后的細(xì)胞具備的特點(diǎn)之間的關(guān)系。(4)單克隆抗體產(chǎn)生的過(guò)程由細(xì)胞融合和雜交細(xì)胞的培養(yǎng)兩部分組成。31教學(xué)ppt【解析】(1)a的花粉基因型為Hr和hr,b的花粉基因型為hR和hr,只有HhRr的基因組合方式?jīng)]有隱性純合基因,所以雜種細(xì)胞HhRr能在光照強(qiáng)度大于800lx時(shí)生長(zhǎng)。(2)植物體細(xì)胞雜交形成植株,是植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn),克服了自然條件下物種之間的生殖隔離。(3)在單克隆抗體產(chǎn)生過(guò)程中細(xì)胞d是雜交瘤細(xì)胞,具備了融合前兩種細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn),能無(wú)限增殖且產(chǎn)生特定抗體。而且反復(fù)篩選的細(xì)胞d產(chǎn)生的抗體品質(zhì)優(yōu)良。B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特定抗體,但不能無(wú)限增殖,無(wú)法得到大量的抗體。32教學(xué)ppt(4)只能注射特定抗原后才能得到特定的B淋巴細(xì)胞,再與骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)篩選后可體內(nèi)培養(yǎng)也可體外培養(yǎng)以得到大量單克隆抗體。33教學(xué)ppt答案:(1)給予大于800lx的光照(2)植物細(xì)胞的全能性克服了遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙(3)既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生特定抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一B淋巴細(xì)胞不能無(wú)限增殖(4)
34教學(xué)ppt【互動(dòng)探究】(1)若a、b表示兩種植物體細(xì)胞,則融合前需進(jìn)行什么操作?提示:利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。分析:細(xì)胞融合是利用細(xì)胞膜的流動(dòng)性,細(xì)胞壁如果存在無(wú)法進(jìn)行融合。(2)植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體產(chǎn)生過(guò)程中,a、b融合的方法相同嗎?提示:植物細(xì)胞可用物理法如電場(chǎng)誘導(dǎo)等,化學(xué)法如用PEG誘導(dǎo);動(dòng)物細(xì)胞除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)。35教學(xué)ppt1.(2012·佛山模擬)下列不屬于細(xì)胞工程基本技術(shù)的是()A.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) B.細(xì)胞融合技術(shù)C.細(xì)胞核移植技術(shù) D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)【解析】選D。D項(xiàng)屬于基因工程。細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的方法,通過(guò)某種工程學(xué)手段,在細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上,按照人們的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì),從而獲得新型生物或特種細(xì)胞產(chǎn)品或產(chǎn)物的一門綜合性科學(xué)技術(shù)。36教學(xué)ppt2.用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng),下列敘述正確的是()A.都需用CO2培養(yǎng)箱B.都需用液體培養(yǎng)基C.都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行D.都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性【解析】選C。植物細(xì)胞培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基,不需用CO2培養(yǎng)箱;植物細(xì)胞培養(yǎng)可得到完整的植物個(gè)體,體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的是動(dòng)物細(xì)胞或代謝產(chǎn)物,未體現(xiàn)細(xì)胞的全能性;植物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)均需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
37教學(xué)ppt3.(2012·江蘇聯(lián)考)如圖是科學(xué)家新研發(fā)的制備單克隆抗體的過(guò)程,相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()38教學(xué)pptA.該過(guò)程涉及基因工程和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)B.經(jīng)酶A處理后的Ⅰ與質(zhì)粒具有相同的黏性末端C.若供體DNA提供了prG基因(無(wú)限增殖調(diào)控基因),則該過(guò)程中的Ⅱ是已免疫的B細(xì)胞D.通過(guò)檢測(cè)和篩選得到的Ⅲ既能無(wú)限增殖又能分泌特異性抗體【解析】選A。該過(guò)程涉及基因工程,但沒(méi)有涉及動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。39教學(xué)ppt4.我國(guó)科學(xué)家在山東萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院培養(yǎng)出了克隆牛“康康”和“雙雙”,其過(guò)程如圖所示:40教學(xué)ppt下列敘述中正確的是(多選)()A.該過(guò)程利用了動(dòng)物細(xì)胞核的全能性B.A母牛和B母牛與“康康”“雙雙”之間不存在真正意義上的親子代關(guān)系C.該過(guò)程體現(xiàn)的方法為拯救瀕危動(dòng)物提供了一種新思路D.“康康”、“雙雙”之間若進(jìn)行器官移植,則會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)41教學(xué)ppt【解析】選A、B、C。細(xì)胞核移植技術(shù)產(chǎn)生動(dòng)物個(gè)體的原理是利用動(dòng)物細(xì)胞核的全能性;因?yàn)锳、B母牛并沒(méi)有將遺傳物質(zhì)傳遞給“康康”、“雙雙”,故從遺傳學(xué)角度來(lái)說(shuō),它們之間并沒(méi)親子代關(guān)系;細(xì)胞核移植(克隆)技術(shù)的應(yīng)用之一是拯救瀕危物種,擴(kuò)大其種群數(shù)量;“康康”、“雙雙”的核遺傳物質(zhì)并沒(méi)有差別,若進(jìn)行器官移植不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。42教學(xué)ppt5.(2009·江蘇高考)動(dòng)物器官的體外培養(yǎng)技術(shù)對(duì)于研究器官的生理、病理過(guò)程及其機(jī)制意義重大。如圖是一個(gè)新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。43教學(xué)ppt(1)肝臟切成小薄片,這有利于肝臟細(xì)胞______________。(2)氣室中充入5%CO2氣體的主要作用是_______________。(3)培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細(xì)菌生長(zhǎng),但要注意選擇抗生素的________________,以保證抗生素對(duì)肝臟無(wú)害。(4)有機(jī)物X有毒性,可誘發(fā)染色體斷裂。利用上圖所示裝置和提供的下列材料用具,探究肝臟小塊對(duì)有機(jī)物X是否具有解毒作用。44教學(xué)ppt材料用具:肝臟小塊,外周血淋巴細(xì)胞,淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液,
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