藥物分析課件

雜環(huán)類藥物的分析

AnalyticalofHeterocyclicdrugs2024/5/13本章簡(jiǎn)介雜環(huán)化合物：碳環(huán)中夾雜有非碳原子的環(huán)狀有機(jī)化合物，其中非碳原子稱為雜原子，一般為O、S、N等。在化學(xué)合成藥中，已成為現(xiàn)代藥物中應(yīng)用最多、最廣的一大類。本章介紹五類：吡啶類：異煙肼、尼克剎米和硝苯地平喹啉類：硫酸奎寧、奎尼丁、鹽酸環(huán)丙沙星等托烷類：硫酸阿托品、氫溴酸東莨菪堿等吩噻嗪類：氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜和鹽酸硫利達(dá)嗪等苯并二氮雜卓類：地西泮、奧沙西泮和氯氮卓等2024/5/13第一節(jié)吡啶類藥物結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì) 含有N原子的六元單環(huán)，例如：異煙肼、尼克剎米和硝苯地平2024/5/13主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)

弱堿性：吡啶環(huán)N原子為堿性原子，吡啶環(huán)pKb為8.8（水中）尼克剎米：除了吡啶環(huán)上的N原子外，吡啶環(huán)β位被酰氨基取代，遇堿水解釋放二乙胺。Chp2005鑒別：取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)色。

2024/5/13主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)還原性：異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取代，有較強(qiáng)的還原性，可被不同的氧化劑氧化，也可與某些含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。異煙肼與硝酸銀－銀鏡反應(yīng)Chp2005：取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

2024/5/13縮合反應(yīng)Chp2005異煙肼鑒別：取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1ml，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶；濾過(guò)，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，依法測(cè)定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)為228～231℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。2024/5/13異煙肼的其他鑒別反應(yīng)與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀與1,2-萘醌-4-磺酸在堿性介質(zhì)中，可縮合呈紅色。紅色2024/5/13主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)吡啶環(huán)的特性：吡啶環(huán)開(kāi)環(huán) 戊烯二醛反應(yīng)（k?ning反應(yīng)） 適用于α、α’位無(wú)取代的異煙肼、尼克剎米Chp2005尼克剎米鑒別反應(yīng)：取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2.5％苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。2024/5/13主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)吡啶環(huán)的特性： 二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）：在無(wú)水的條件下，吡啶及其衍生物與3,4-二硝基氯苯混合共熱或加熱至熔融，冷卻后，加醇制氫氧化鉀溶液將殘?jiān)芙猓芤撼首霞t色。 異煙肼－氧化成羧基；尼克剎米－水解成羧基2024/5/13吡啶環(huán)的鑒別反應(yīng)形成沉淀的反應(yīng)可與重金屬鹽類或苦味酸形成沉淀

尼克剎米的鑒別：取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3滴，即生成草綠色沉淀。 異煙肼、尼克剎米可與氯化汞形成白色沉淀。2024/5/13分解產(chǎn)物的鑒別反應(yīng)異煙肼、尼克剎米等與無(wú)水碳酸鈉或氫氧化鈣共熱，可發(fā)生脫羧降解，并有吡啶臭味逸出。2024/5/13紫外吸收光譜鑒別芳雜環(huán)在紫外光區(qū)有特征吸收藥物溶劑λmax(nm)λmax(nm)異煙肼HCl(0.01mol/L)265－約420水266234378尼克剎米HCl(0.01mol/L)263－285NaOH(0.01mol/L)255－840260－860硝苯地平無(wú)水乙醇333－1402024/5/13有關(guān)物質(zhì)檢查一、異煙肼中肼的檢查 異煙肼不穩(wěn)定，游離肼即可能在原料中引入，又可能在貯藏過(guò)程中降解－誘變劑和致癌物質(zhì)1、TLC 檢查方法：取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相當(dāng)于游離肼50μg）的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl與對(duì)照溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）上，以異丙醇－丙醇(3:2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15分鐘后檢視。在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。 －－限度：0.02%。2024/5/13一、異煙肼中肼的檢查2、比濁法

JP(14)采用樣品中加水楊酸的乙醇溶液觀察渾濁的方法－專屬性差3、差示分光光度法

原理： 肼－對(duì)-二甲氨基苯甲醛→黃色縮合物（對(duì)-二甲氨基苯甲醛連氮）465nm波長(zhǎng)有最大吸收 異煙肼－對(duì)-二甲氨基苯甲醛→縮合物（對(duì)-二甲氨基芐叉） 465nm波長(zhǎng)無(wú)吸收 加入3%丙酮，可使得黃色縮合物（對(duì)-二甲氨基苯甲醛連氮）變?yōu)闊o(wú)色的二甲基甲酮連氮，繼而作為參比，用于測(cè)定△A456nm，并以對(duì)照品比較法計(jì)算游離肼的含量。 －－專屬、準(zhǔn)確、靈敏，最低檢測(cè)限可達(dá)0.1μg/ml。有關(guān)物質(zhì)檢查2024/5/13有關(guān)物質(zhì)檢查二、尼克剎米中有關(guān)物質(zhì)的檢查TLC無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品－高低濃度對(duì)比法 檢查方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇分別稀釋成每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作為對(duì)照溶液(1)和(2)。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿－丙醇(75:25)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液(2)的主斑點(diǎn)比較，不得更深；如有1點(diǎn)超過(guò)時(shí)，應(yīng)不深于對(duì)照溶液(1)的主斑點(diǎn)。2024/5/13有關(guān)物質(zhì)檢查三、硝苯地平中的有關(guān)物質(zhì)檢查遇光不穩(wěn)定－光化學(xué)歧化作用HPLC法檢查(A)(B)2024/5/13HPLC法檢查硝苯地平中的有關(guān)物質(zhì)檢查避光操作。取本品，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml中含1mg和0.2mg的溶液，作為供試品溶液Ⅰ和Ⅱ。取硝苯地平有關(guān)雜質(zhì)對(duì)照品A和B各10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液Ⅰ。分別精密量取供試品溶液Ⅱ和對(duì)照品溶液Ⅰ各1ml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液Ⅱ。照高效液相色譜法（附錄ⅤD）試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(3:2)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。取對(duì)照品溶液Ⅱ20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使雜質(zhì)A和B成分色譜峰的峰高為滿量程的20％；雜質(zhì)A和B之間，雜質(zhì)B與硝苯地平之間的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。取供試品溶液Ⅰ和對(duì)照品溶液Ⅱ各20μl，分別注入液相色譜儀。記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液Ⅰ如出現(xiàn)與對(duì)照品溶液Ⅱ中雜質(zhì)A和B相對(duì)應(yīng)的峰，其峰面積不得大于對(duì)照品溶液Ⅱ中雜質(zhì)A和B的面積；如出現(xiàn)除雜質(zhì)A和B以外的其他雜質(zhì)峰，其峰面積不得大于對(duì)照品溶液Ⅱ中硝苯地平的峰面積；各雜質(zhì)總量不得大于0.5％。供試品溶液Ⅰ中小于對(duì)照品溶液Ⅱ中硝苯地平峰面積的10％以下的雜質(zhì)峰忽略不計(jì)。2024/5/13第二節(jié)喹啉類藥物 硫酸奎寧硫酸奎寧丁鹽酸環(huán)丙沙星(quininesulfate)(quinidinesulfate)(ciprofloxacinhydrochloride)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。2024/5/13主要化學(xué)性質(zhì)堿性：喹啉環(huán)上的N原子具有堿性，與強(qiáng)酸成鹽環(huán)丙沙星：鹽酸；奎寧、奎尼?。憾幔蛩幔ㄠ藟A含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)）奎寧(左旋體)：pKb1為5.07pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶于 氯仿－無(wú)水乙醇(2:1)奎尼丁(右旋體)：pKb1為5.4 pKb2為10，易溶于沸水或乙醇。旋光性：硫酸奎寧(左旋體)，比旋度為-237°至-244°

硫酸奎寧丁(右旋體)，比旋度為+275°至+290°

鹽酸環(huán)丙沙星，無(wú)旋光性熒光特性：硫酸奎寧和硫酸奎寧丁在稀硫酸中顯藍(lán)色熒 光，鹽酸環(huán)丙沙星無(wú)熒光。2024/5/13鑒別試驗(yàn)一、綠奎寧反應(yīng)（Thalleioquin）

用于奎寧和奎尼丁的鑒別硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的反應(yīng)機(jī)理如圖取其水溶液加溴試液2～3滴和氨試液1ml，即顯翠綠色；加酸至中性顯藍(lán)色；酸性則呈紫紅色；翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。鑒別方法：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml，即顯翠綠色。2024/5/13鑒別試驗(yàn)二、光譜特征紫外吸收光譜－鹽酸環(huán)丙沙星：取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄ⅣA)測(cè)定，在277nm與315nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。熒光光譜－硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。

2024/5/13鑒別試驗(yàn)三、無(wú)機(jī)酸鹽硫酸奎寧、硫酸奎尼丁→硫酸根－氯化鋇＝白色沉淀鹽酸環(huán)丙沙星→鹽酸根－硝酸銀＝白色沉淀2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查一、硫酸奎寧中的特殊雜質(zhì)檢查酸度

取本品0.2g，加水20ml溶解后，測(cè)定pH值應(yīng)為5.7～6.6。氯仿－乙醇不溶物

取本品2g，加氯仿－無(wú)水乙醇(2:1)的混合液15ml，在50℃加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過(guò)，濾渣用上述混合液分5次洗滌，每次10ml，在105℃干燥至恒重，遺留殘?jiān)坏眠^(guò)2mg。

其他金雞納堿（TLC）

取本品，加稀乙醇制成每1ml含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加稀乙醇稀釋制成每1ml中含50μg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－丙酮－二乙胺(5:4:1.25)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，微熱使展開(kāi)劑揮散，噴以碘鉑酸鉀試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。

2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查二、鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查酸度 取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，測(cè)定pH值應(yīng)為3.0～4.5。溶液的澄清度和顏色 取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清；如顯色，與黃色或黃綠色4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液(附錄ⅨA)比較，不得更深。

有關(guān)物質(zhì)（HPLC）

ODS色譜柱；以0.05mol/L枸櫞酸溶液-乙腈(82:18)用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。理論板數(shù)按鹽酸環(huán)丙沙星峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，鹽酸環(huán)丙沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。測(cè)定法取本品適量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度和記錄儀衰減，使主成分的峰高為記錄儀滿量程的2～4倍，記錄時(shí)間應(yīng)為主成分峰保留時(shí)間的2倍。按面積歸一化法計(jì)算，雜質(zhì)總量不得過(guò)1.5％。2024/5/13第三節(jié)托烷類藥物硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿(atropine)(scopolaminehydrochloride)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：大多數(shù)為莨菪烷衍生的氨基醇與不同的有機(jī)酸縮合成酯的生物堿，常見(jiàn)的有顛茄生物堿和古柯生物堿。2024/5/13化學(xué)性質(zhì)水解性（酯水解生成醇和酸）

阿托品莨菪醇莨菪酸2024/5/13化學(xué)性質(zhì)堿性

阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強(qiáng)的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.35旋光性 氫溴酸東莨菪堿含有不對(duì)稱碳原子，左旋體比旋度為-24°至-27° 阿托品雖然含有不對(duì)稱碳原子，但外消旋化，無(wú)旋光性2024/5/13鑒別試驗(yàn)托烷生物堿一般鑒別試驗(yàn)鑒別方法：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)爬?，加乙?～3滴，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。2024/5/13鑒別試驗(yàn)氧化反應(yīng) 水解生成的莨菪酸，在硫酸和重鉻酸鉀在加熱條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。2024/5/13鑒別試驗(yàn)沉淀反應(yīng)堿性－生物堿沉淀劑生成沉淀例：阿托品：氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿：氯化汞醇→白色復(fù)鹽沉淀2024/5/13鑒別試驗(yàn)硫酸鹽與溴化物反應(yīng)硫酸阿托品：水溶液加氯化鋇生成白色沉淀，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解；加醋酸鉛試液也生成白色沉淀，在醋酸銨或氫氧化鈉試液中溶解。氫溴酸東莨菪堿：水溶液加硝酸銀試液，生成淡黃色凝乳沉淀，能在氨試液中微溶，但在硝酸中幾乎不溶；滴加氯試液，溴即游離，加氯仿振搖，氯仿層顯黃色或紅棕色。2024/5/13氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查來(lái)源：茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提?。ㄎ覈?guó)，白曼陀羅的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴酸鹽）制法：洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品2024/5/13氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查酸度

取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法測(cè)定（附錄ⅥH），pH值應(yīng)為4.0～5.5。－強(qiáng)酸弱堿其他生物堿 取本品0.10g，加水2ml溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2～3滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。－阿撲阿托品、顛茄堿易氧化物

取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。－阿撲阿托品、其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)2024/5/13第四節(jié)吩噻嗪類藥物R’:-H、-Cl、-CF3、 -COCH3、-SCH2CH3R:具有2～3碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物典型藥物：鹽酸氯丙嗪、鹽酸異丙嗪、奮乃靜、鹽酸氟奮乃靜、癸氟奮乃靜、鹽酸三氟拉嗪和鹽酸硫利達(dá)嗪等吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：2024/5/13主要的化學(xué)性質(zhì)紫外吸收光譜特性

硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)的π系統(tǒng)，紫外區(qū)三個(gè)吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強(qiáng)多在254nm附近，根據(jù)2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 當(dāng)母核的二價(jià)硫被氧化為砜或亞砜，則呈現(xiàn)四個(gè)峰值。紅外吸收光譜特性 由于取代基R和R’的不同，具有不同的紅外光譜，已被藥典用于不同品種的鑒別。2024/5/13主要的化學(xué)性質(zhì)易氧化呈色

硫氮雜蒽母核中的二價(jià)硫易氧化，不同的氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過(guò)氧化氫等，母核易被氧化成亞砜、砜等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色，可用于鑒別。金屬離子絡(luò)合呈色

未氧化的硫可與金屬鈀離子形成配位化合物，而氧化產(chǎn)物亞砜、砜則不能，可用于鑒別和含有測(cè)定，具有專屬性。2024/5/13鑒別試驗(yàn)紫外吸收光譜鑒別藥物溶劑濃度(μg/ml)λmax

(nm)A鹽酸氯丙嗪鹽酸(9→1000)52540.46915306－－鹽酸異丙嗪鹽酸(0.1mol/L)6249－883~937奮乃靜無(wú)水乙醇72580.65－癸氟奮乃靜乙醇10260－－鹽酸氟奮乃靜鹽酸(9→1000)10255－553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸(1→20)10256－630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315－－2024/5/13鑒別試驗(yàn)氧化顯色反應(yīng)藥物硫酸硝酸過(guò)氧化氫鹽酸氯丙嗪－顯紅色，漸變?yōu)榈S色－鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色－奮乃靜－－顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫?zé)岷笞兂杉t褐色－－鹽酸三氟拉嗪－生成微帶紅色的白色沉淀；放置后，紅色變深，加熱后變黃色－鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色－－2024/5/13鑒別試驗(yàn)與鈀離子絡(luò)合顯色

鑒別方法：取本品約50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化鈀溶液3ml，既有沉淀生成，并顯紅色，再加過(guò)量的氯化鈀溶液，顏色變深。2024/5/13鑒別試驗(yàn)分解產(chǎn)物反應(yīng)（如癸氟奮乃靜等含氟有機(jī)藥物） 鑒別方法：取本品15～20mg，加碳酸鈉與碳酸鉀各約0.1g，混勻，在600℃熾灼15～20分鐘，放冷，加水2ml使溶解，加鹽酸溶液(1→2)酸化，濾過(guò)，濾液加茜素鋯試液0.5ml，應(yīng)顯黃色。

2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查合成工藝2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查鹽酸異丙嗪雜質(zhì)來(lái)源使得最終合成產(chǎn)物變?yōu)椋捍水悩?gòu)體在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。另外，異丙嗪不太穩(wěn)定，易氧化，貯藏過(guò)程可能分解，2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查檢查方法:(TLC)

取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加二氯甲烷稀釋成每1ml中含0.15mg和0.05mg的溶液，作為對(duì)照溶液(1)和(2)。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以己烷－丙酮－二乙胺(8.5:1:0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)；其雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照溶液(2)的主斑點(diǎn)比較，不得更深；如有一點(diǎn)超過(guò)，應(yīng)不深于對(duì)照溶液(1)的主斑點(diǎn)。

注：避光操作；溶液臨用新配。2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查鹽酸硫利達(dá)嗪中的有關(guān)物質(zhì)檢查

對(duì)光不穩(wěn)定，無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品，TLC高低濃度對(duì)比法

檢查方法：取本品，加氯仿制成每1ml中約含10mg的溶液，作為供試品溶液;精密量取適量，加氯仿稀釋成每1ml中約含50μg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法(附錄ＶＢ)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－異丙醇－濃氨溶液(74:25:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，先用碘化鉍鉀試液－冰醋酸－水(10:20:70)的混合液噴霧，然后噴以過(guò)氧化氫試液，立即覆蓋同樣大小的潔凈玻璃板，檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照溶液所顯的主斑點(diǎn)比較，不得更深。（避光操作）2024/5/13第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物

地西泮阿普唑侖奧沙西泮氯氮卓(diazepam)(alprozolam)(oxazepam)(chlordiazepoxide)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：含氮雜原子、六元和七元環(huán)雙環(huán)并合而成，其中1,4-苯并二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的抗焦慮、抗驚厥藥。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑侖、氯氮卓、阿普唑侖、三唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均為地西泮的衍生物。2024/5/13化學(xué)性質(zhì)堿性： 非水溶液滴定法測(cè)定含量水解： 在強(qiáng)酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鑒別和含有測(cè)定2024/5/13鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別1、沉淀反應(yīng) 氯氮卓稀鹽酸溶液 阿普唑侖稀鹽酸溶液 鹽酸氟西泮水溶液 氯硝西泮稀鹽酸溶液碘化鉍鉀試液橙紅色沉淀放置后顏色變深2、水解后呈芳伯胺反應(yīng)氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。2024/5/13鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別3、硫酸－熒光反應(yīng)： 苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色藍(lán)綠色

4、分解產(chǎn)物的反應(yīng)有機(jī)氯化合物，氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。2024/5/13鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別5、氯化銅焰色反應(yīng) 分子結(jié)構(gòu)含有氯元素，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出氯化銅的綠色火焰。2024/5/13鑒別試驗(yàn)二、紫外特征吸收藥物溶劑濃度(μg/ml)λmax

(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366－氯氮卓鹽酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸(9→1000)12264－鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奧沙西泮乙醇10229，315±2(較弱)IR：地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮2024/5/13鑒別試驗(yàn)三、薄層色譜法 硅膠G薄層板，苯－丙酮(3:2)為展開(kāi)劑，稀硫酸噴霧，105℃干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn)：藥物Rf值斑點(diǎn)顏色*單一點(diǎn)樣混合點(diǎn)樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無(wú)色黃色(m)黃色(m)氯氮卓0.340.34無(wú)色藍(lán)紫色(s)藍(lán)紫色(w)艾司唑侖0.220.20無(wú)色灰紫色(m)藍(lán)紫色(m)硝西泮0.720.72黃色紫色(w)紫色(w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍(lán)色(s)亮灰藍(lán)色(s)*s,m,w分別表示熒光的強(qiáng)、中、弱2024/5/13鑒別試驗(yàn)酸水解產(chǎn)物的薄層色譜法

苯并二氮雜卓類經(jīng)酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但專屬性差，不同的藥物可能水解產(chǎn)生相同的二苯甲酮衍生物（三唑侖、阿普唑侖等經(jīng)水解后不產(chǎn)生二苯甲酮衍生物，可以區(qū)別）。2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查TLC是本類藥物較為常用的檢查方法

例：地西泮 檢查方法：取本品，加丙酮制成每1ml中含100mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加丙酮稀釋成每1ml中含0.3mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254

薄層板上，以醋酸乙酯－己烷(1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查HPLC法在雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用也逐漸增加

例：氯氮卓（USP24、BP2000采用薄層色譜法）

HPLC檢查法：

色譜條件：色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：甲醇－磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉調(diào)pH6.0；流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。 結(jié)果：靈敏度高，可檢測(cè)未知結(jié)構(gòu)的痕量雜質(zhì)。2024/5/13特殊雜質(zhì)檢查HPLC法用于地西泮降解產(chǎn)物的檢查

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－水(70:30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按地西泮峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

檢查方法：取本品，加甲醇分別制成每1ml中含1mg的供試品溶液和每1ml中含5μg的對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，取對(duì)照溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的10％；再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10μl分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍，供試品溶液的色譜圖中主成分峰之后如顯示雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液主成分峰的峰面積。2024/5/13第六節(jié)含量測(cè)定非水溶液滴定法鈰量法比色法紫外分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法2024/5/13非水溶液滴定法原理一般方法

冰醋酸作為溶劑，若滴定氫鹵酸鹽，則加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白試驗(yàn)校正。問(wèn)題討論適用范圍：Kb＜10-8的有機(jī)堿鹽酸根影響：高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸滴定劑穩(wěn)定性：溫度、貯藏條件都有影響終點(diǎn)指示方法：結(jié)晶紫指示劑，電位法2024/5/13非水溶液滴定法應(yīng)用實(shí)例游離弱堿性藥物：地西泮、尼克剎米或氯氮卓，基于氮原子的弱堿性可以結(jié)晶紫為指示劑，非水溶液直接滴定，終點(diǎn)顏色綠色～藍(lán)綠色～藍(lán)色不等。氫鹵酸鹽類藥物：加入過(guò)量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難電離的鹵化汞，再用高氯酸滴定，可用結(jié)晶紫、橙黃Ⅳ作為指示劑，或用電位法指示終點(diǎn)。硫酸鹽類藥物：硫酸為二元酸，但在非水介質(zhì)中只顯示一元酸解離為HSO4-2024/5/13硫酸奎寧的非水滴定3H+H+2024/5/13硫酸奎寧的非水滴定2024/5/13非水溶液滴定法應(yīng)用實(shí)例硝酸鹽的滴定：由于硝酸的氧化性破壞指示劑變色，用電位法指示終點(diǎn)磷酸鹽與有機(jī)酸鹽：直接滴定2024/5/13鈰量法原理：氧化－還原適用范圍：硝苯地平－鄰二氮菲指示劑(還原型)紅色(氧化型)淺藍(lán)色C12H8N2溶于亞鐵鹽溶液吩噻嗪類藥物－自身顏色的變化+++Freeradical紅色自由基Bivalentcation二價(jià)陽(yáng)離子，無(wú)色2024/5/13比色法一、酸性染料比色法原理：在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中，堿性藥物(B)可與氫離子結(jié)合成(BH+)，而一些酸性染料可解離為(In-)，兩者定量結(jié)合成有色絡(luò)合物(BH+In-)離子對(duì)，可被有機(jī)溶劑定量提取，在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收，即可算出堿性藥物的含量。2024/5/13例：硫酸阿托品片的含量測(cè)定

對(duì)照品溶液的制備精密稱取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過(guò)，收集續(xù)濾液，即得。

測(cè)定方法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液〔取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液6.0ml使溶解，再加水稀釋至100ml，搖勻，必要時(shí)濾過(guò)〕2.0ml，振搖提取2min后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附錄ⅣB），在420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得供試量中含有(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的重量。

2024/5/13比色法一、酸性染料比色法影響因素水性最佳