高效液相色法

高效液相色法主講人：陶程2高效液相色譜儀概述一高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)二高效液相色譜儀使用三高效液相色譜儀數(shù)據(jù)分析四3以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜（LC）實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）一離心與離心機(jī)的概念4HPLC的特點(diǎn)高壓壓力可達(dá)150～300kg/m2高效柱效高，在一根柱中同時(shí)分離成分可達(dá)100種高靈敏度紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg高速流速為0.1～10.0mL/min一離心與離心機(jī)的概念5通常15-30min一個(gè)樣，某些樣品5min可完成速度快可選擇固定相和流動(dòng)相達(dá)到最佳分離效果分辨率高用一根色譜柱可分離不同的化合物反復(fù)使用紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg靈敏度高樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞容易回收與經(jīng)典LC相比HPLC的優(yōu)點(diǎn)6HPLC的適用范圍適合分析高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定、離子型的樣品應(yīng)用范圍廣泛，適用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、生命科學(xué)、食品工業(yè)、農(nóng)業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域在已知的化合物中能用液相色譜分析的可占70～80%7一二高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)812345高壓輸液系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)（數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)）工作站進(jìn)樣系統(tǒng)

檢測(cè)系統(tǒng)工作流程9

高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)貯液器、過(guò)濾器、高壓輸液泵、梯度淋洗裝置主要部件：工作系統(tǒng)10進(jìn)樣系統(tǒng)流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置色譜柱系統(tǒng)柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長(zhǎng)5～40cm檢測(cè)器系統(tǒng)紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、光電二極管陣列檢測(cè)器色譜工作站可同時(shí)采集一到兩個(gè)獨(dú)立檢測(cè)器信號(hào)工作系統(tǒng)11操作步驟沖洗柱子沖洗管路關(guān)主機(jī)關(guān)電腦關(guān)電源準(zhǔn)備

清洗、關(guān)機(jī)開(kāi)機(jī)、進(jìn)樣流動(dòng)相標(biāo)液樣液柱子選擇儀器檢查開(kāi)電腦、主機(jī)、工作站、參數(shù)設(shè)置，方法建立、進(jìn)樣三高效液相色譜儀使用12譜圖判斷對(duì)照與樣品的主成分保留時(shí)間應(yīng)大致一致保留時(shí)間0.95＜T＜1.05拖尾因子兩次譜圖的峰面積應(yīng)相差不超過(guò)1%重復(fù)性一般應(yīng)≥1.5分離度應(yīng)≥規(guī)定的理論塔板數(shù)目理論塔板數(shù)四高效液相色譜儀數(shù)據(jù)分析131、定性方法

利用已知標(biāo)準(zhǔn)品定性利用檢測(cè)器的選擇性定性利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描