臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)紅細(xì)胞檢查

第二章紅細(xì)胞檢查

第一節(jié)概要

本節(jié)要點(diǎn)：

(1)紅細(xì)胞生理

(2)血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)、成分、合成和代謝

難點(diǎn)：

1.血紅蛋白檢測原理。

2.紅細(xì)胞異常形態(tài)的臨床意義。

(一)紅細(xì)胞生理

紅細(xì)胞是血液中數(shù)量最多的有形成分，起源于骨髓造血干細(xì)胞，在紅細(xì)胞生成素作用下，經(jīng)紅系祖細(xì)

胞階段，分化為原紅細(xì)胞，經(jīng)數(shù)次有絲分裂發(fā)育為早幼、中幼和晚幼紅細(xì)胞。晚幼紅細(xì)胞通過脫核成為網(wǎng)

織紅細(xì)胞，這一過程在骨髓中進(jìn)行，約需72h。網(wǎng)織紅細(xì)胞經(jīng)約48h成完全成熟的紅細(xì)胞，釋放入血液，

平均壽命約120d,衰老紅細(xì)胞主要在脾破壞，分解為鐵、珠蛋白和膽紅素。

一方面，紅細(xì)胞衰老過程中細(xì)胞內(nèi)酶活性減低、膜生理功能所需能量減少、膜脂質(zhì)成分發(fā)生變化，使

紅細(xì)胞膜變形性減低、脆性增加，使紅細(xì)胞容易被脾臟“阻滯”而吞噬、破壞；另一方面，衰老紅細(xì)胞膜

表面所帶負(fù)電荷減少、紅細(xì)胞間排斥效應(yīng)減低、易于聚集、體積增大，使紅細(xì)胞容易被脾臟“阻滯”而吞

噬、破壞。

紅細(xì)胞生理功能是通過胞內(nèi)的血紅蛋白來實(shí)現(xiàn)的。紅細(xì)胞有交換和攜帶氣體的功能。紅細(xì)胞經(jīng)過肺部

時(shí)，肺泡中氧氣經(jīng)肺泡壁、毛細(xì)血管壁進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，與紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白結(jié)合，隨血液被帶到各組織；

同時(shí)，將組織代謝產(chǎn)生的二氧化碳與血紅蛋白結(jié)合，經(jīng)血流帶回肺部，經(jīng)肺泡排出體外。如此往復(fù)，使全

身組織能及時(shí)、充分地得到代謝所需的氧氣，并排出體內(nèi)多余的二氧化碳。

(二)血紅蛋白

血紅蛋白(Hb或HGB)分子是一種微紅色的膠體物質(zhì)，相對分子質(zhì)量為64458,是一種呼吸載體，每克

血紅蛋白可攜帶L34ml氧，成人約含600g血紅蛋白，可攜約800ml氧。研究發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞內(nèi)充滿小顆粒,

最小直徑約6.5nm,相當(dāng)于1個(gè)血紅蛋白分子，顆粒分布：近紅細(xì)胞膜處最多，細(xì)胞中央最少，與紅細(xì)胞有

生理性中央淡染區(qū)現(xiàn)象完全一致。

1.血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)及成分

血紅蛋白分子是有核紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)形成的一種含色素蛋白質(zhì)。色素部分為亞鐵血紅素，蛋白

質(zhì)部分為珠蛋白。亞鐵血紅素由原嚇咻、鐵組成，受6-氨基-丫酮戊酸合成酶、血紅素和的調(diào)節(jié)。Fe"

位于嚇咻環(huán)中心，有6個(gè)配位鍵，4個(gè)配位鍵與原口卜咻分子的4個(gè)氮原子相連，第5個(gè)配位鍵與珠蛋白肽鏈

F肽段咪喋基相連，第6配位鍵為空位，能可逆地與氧結(jié)合，完成運(yùn)氧功能。

珠蛋白肽鏈分為a、B兩類：①a類鏈包括：a、&(zeta)和6(theta)鏈；②B類鏈包括：B、

8、丫和￡(epsilon)鏈。a鏈由141個(gè)氨基酸組成，B鏈由146個(gè)氨基酸組成。每個(gè)Hb分子由2條

a類肽鏈和2條B類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有1個(gè)亞鐵血紅素。在正常情況下，99%Hb的鐵原子呈

F/狀態(tài)，稱為還原Hb,1%呈Fe"狀態(tài)，稱為高鐵血紅蛋白，只有Fe制犬態(tài)的Hb才能與氧結(jié)合，稱為氧合血

紅蛋白。

2.血紅蛋白的合成

血紅蛋白的合成受激素的調(diào)節(jié)，一類是紅細(xì)胞生成素，可促進(jìn)6-氨基-丫酮戊酸生成和鐵的利用，從

而促進(jìn)血紅素、Hb的合成；二類是雄激素，睪酮在肝臟內(nèi)由5-B還原酶轉(zhuǎn)變?yōu)?-B氫睪酮，能促進(jìn)8-

氨基-Y酮戊酸合成酶、紅細(xì)胞生成素的生成。合成過多時(shí)，血紅素自發(fā)氧化為高鐵血紅素，高鐵血紅素能

直接抑制3-氨基-丫酮戊酸合成酶，阻止6-氨基-丫酮戊酸合成酶生成，以減少血紅素合成。

在人體生長各期，Hb種類與比例不同。在胚胎發(fā)育早期，約妊娠第5周，U與e基因表達(dá)于卵黃囊

的成紅細(xì)胞中，形成個(gè)體發(fā)育中第一個(gè)有功能的胚胎期血紅蛋白：Ge2(libGowerI);妊娠第6周，成

紅細(xì)胞開始由卵黃囊游移到肝臟，g表達(dá)水平顯著減低，a和y基因開始表達(dá)，形成HbGowerI(Ln)、

HbGowerII(a2e2)、HbPortland(?2e2)和HbF(a2Y2)等胚胎期血紅蛋白；妊娠第8周，《和e

鏈逐漸消失，Y鏈合成達(dá)到最高峰，P鏈開始合成，形成HbA(a2。2)；妊娠第36周，3鏈合成迅速增

加，Y鏈合成速率減低；剛出生時(shí)，B鏈與丫鏈合成量大致相等；出生后3個(gè)月，B鏈合成繼續(xù)增加，

Y鏈合成迅速減低，HbA逐步占Hb總量95環(huán)以上，而HbF逐步降至現(xiàn)以下。6鏈開始合成時(shí)間不很清楚，

出生后HbA2(a282)占Hb總量的2%~3%?

3.血紅蛋白的代謝

血紅蛋白降解產(chǎn)物為珠蛋白和血紅素。珠蛋白由蛋白酶、肽酶分解為氨基酸，進(jìn)入氨基酸代謝，可再

參與蛋白質(zhì)、多肽合成或轉(zhuǎn)變成其他含氮物質(zhì)；血紅素中鐵由單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)處理，與運(yùn)鐵蛋白結(jié)合進(jìn)

入鐵代謝庫，珠蛋白經(jīng)一系列蛋白酶和肽酶作用分解為內(nèi)源性氨基酸，與外源性氨基酸混在一起，進(jìn)入氨

基酸代謝，再參與合成蛋白質(zhì)、多肽、其他含氮物。

第二節(jié)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

本節(jié)要點(diǎn)：

(1)檢測原理

(2)方法學(xué)評價(jià)

(3)質(zhì)量控制

(4)參考值

(5)臨床意義

(6)操作方法

一、檢測原理(基礎(chǔ)知識(shí)，專業(yè)知識(shí)，掌握)

1.手工顯微鏡法：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積

內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。

2.血液分析儀法：用電阻抗和(或)光散射原理。

二、方法學(xué)評價(jià)(專業(yè)知識(shí)，專業(yè)實(shí)踐能力，掌握)

1.手工顯微鏡法：是傳統(tǒng)方法，不需要特殊設(shè)備，但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。但可作為：①對照核實(shí)儀器法

白細(xì)胞減少或血小板減少的情況；②受小紅細(xì)胞干擾的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的校正。

2.血液分析儀法：是常用方法，比手工法精確(如電阻抗計(jì)數(shù)法的變異系數(shù)為2%,手工法則大于11%),

且操作簡便、快速。當(dāng)白細(xì)胞數(shù)量明顯增高時(shí)，會(huì)干擾紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測定而產(chǎn)生誤差。

三、質(zhì)量控制(專業(yè)知識(shí)，專業(yè)實(shí)踐能力，熟練掌握)

1.手工法：誤差原因?yàn)椋孩贅颖荆貉喊l(fā)生凝固；②操作：稀釋、充池、計(jì)數(shù)不規(guī)范；③器材：微量

吸管、計(jì)數(shù)板不標(biāo)準(zhǔn)；④固有誤差(計(jì)數(shù)域誤差)。

(1)標(biāo)本：血液發(fā)生凝固，使細(xì)胞計(jì)數(shù)減少或分布不均。

(2)操作：稀釋、充池、計(jì)數(shù)不規(guī)范。

(3)器材：微量吸管、計(jì)數(shù)板不標(biāo)準(zhǔn)。

(4)固有誤差(計(jì)數(shù)域誤差)：估計(jì)細(xì)胞計(jì)數(shù)的95%可信限和變異系數(shù)。

2.儀器法：儀器應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)程操作，并定期進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)控。

四、參考值(相關(guān)專業(yè)知識(shí)，專業(yè)實(shí)踐能力，熟練掌握)

1.參考值：成年男性(4?5.5)X1012/L；成年女性(3.5?5.0)X1012/L；新生兒(6.0?7.0)X1012

/L?

2.醫(yī)學(xué)決定水平：高于6.8X1O'2/L,應(yīng)采取治療措施；低于3.5X10'2/L,為診斷貧血界限，應(yīng)尋找

病因；低于1.5X10'2/L應(yīng)考慮輸血。

五、臨床意義(相關(guān)專業(yè)知識(shí)，專業(yè)實(shí)踐能力，掌握)

1.生理性變化

(1)年齡與性別的差異：新生兒，由于出生前處于生理性缺氧狀態(tài)，故紅細(xì)胞明顯增高，較成人約增

加35%,出生2周后逐漸下降，2個(gè)月嬰兒約減少30%。男性在6~7歲時(shí)最低，隨年齡增大而逐漸上升，25?

30歲達(dá)到高峰，30歲后隨年齡增大而逐漸下降，直到60歲尚未停止。

女性也隨年齡增大而逐漸上升，13?15歲達(dá)到高峰，隨后受月經(jīng)、內(nèi)分泌等因素影響而逐漸下降，21~

35歲維持最低水平，以后隨年齡增大而逐漸上升，與男性水平相當(dāng)。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)男女在15?40歲期間差別

明顯，主要是男性雄性激素水平較高，其中睪丸酮有促進(jìn)紅細(xì)胞造血的作用。

(2)精神因素：感情沖動(dòng)、興奮、恐懼、冷水浴刺激等可使腎上腺素增多，導(dǎo)致紅細(xì)胞暫時(shí)增多。

(3)劇烈體力運(yùn)動(dòng)和勞動(dòng)：安靜時(shí)全身每分鐘耗氧0.3~0.4L,運(yùn)動(dòng)時(shí)可達(dá)2?2.5L,最高可達(dá)4-4.5L,

因需氧量增加，使紅細(xì)胞生成素生成增加、骨髓加速釋放紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞增多。

(4)氣壓減低：高山地區(qū)居民和登山運(yùn)動(dòng)員因大氣稀薄、氧分壓低，在缺氧刺激下，紅細(xì)胞代償性增

生，骨髓產(chǎn)生更多紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞增高。高海拔人群約增加14%。

(5)妊娠和老人：妊娠中、后期，為適應(yīng)胎盤循環(huán)需要，通過神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)，孕婦血漿容量明顯增

加使血液稀釋，導(dǎo)致紅細(xì)胞減少，妊娠約減少16%。老年人因造血功能明顯減退，導(dǎo)致紅細(xì)胞減少。

2.紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少

見于臨床上各種原因的貧血。通過紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定或血細(xì)胞比容測定可診斷貧血，明確貧

血程度。貧血原因分析應(yīng)結(jié)合體檢和進(jìn)一步檢查。按病因?qū)⒇氀殖桑?/p>

(1)造血原料不足

(A)缺鐵，鐵是制造血紅蛋白的原料，鐵供應(yīng)或吸收不足，原料不足使鐵重新利用率減少、血紅蛋白

合成量減少。

(2)骨髓造血功能減退

骨髓造血機(jī)制破壞，如再生障礙性貧血、骨髓纖維化骨髓增生異常綜合癥：骨髓被腫瘤細(xì)胞侵占，如

白血病、骨髓瘤、骨轉(zhuǎn)移癌等。以及某些藥物，如抗腫瘤藥物、磺胺類藥物、保泰松、有機(jī)碑、馬利蘭等

可抑制骨髓造血功能；物理因素，如X線、鉆、鐳照射等可抑制骨髓造血功能；繼發(fā)于其他疾病對骨髓的

抑制，如慢性腎功能衰竭(因尿素、肌酎、酚、口引噪等物質(zhì)潴留使骨髓造血功能受影響)。

(3)急性、慢性紅細(xì)胞丟失過多

各種原因出血，如月經(jīng)過多、消化性潰瘍、痔瘡、十二指腸鉤蟲病等。

(4)紅細(xì)胞破壞過多(紅細(xì)胞壽命縮短)

各種原因溶血，如輸血溶血反應(yīng)、蠶豆病、遺傳性球形細(xì)胞增多癥等。

3.紅細(xì)胞增多

(1)原發(fā)性紅細(xì)胞增多

這是一種骨髓異常增生的疾病。

如真性紅細(xì)胞增多癥、良性家族性紅細(xì)胞增多癥等。真性紅細(xì)胞增多癥是一種原因不明紅系細(xì)胞異常

增殖性疾病，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)在(7~10)X10l2/L,發(fā)生于40?70歲年齡組，其外周血紅細(xì)胞明顯增多、白

細(xì)胞和血小板增高、有時(shí)伴慢性粒細(xì)胞性白血病。

(2)繼發(fā)性紅細(xì)胞增多

實(shí)際上是骨髓對?缺氧的一種代償或者是對骨髓的刺激。

①心血管?。焊鞣N先天性心血管疾病，如房室間隔缺損、法洛四聯(lián)癥。②肺部疾?。悍螝饽[、肺源性

心臟病、肺纖維化、矽肺和各種引起肺氣體交換面積減少。③異常血紅蛋白病。④腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)(庫

欣病)，可能與皮質(zhì)激素刺激骨髓使紅細(xì)胞生成偏高有關(guān)。⑤某些藥物，如腎上腺素、糖皮質(zhì)激素、雄激

素等。

(3)相對性紅細(xì)胞增多

是由于血液濃縮所致。

如嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、多汗、多尿、大面積燒傷、晚期消化道腫瘤而長期不能進(jìn)食等引起血液濃縮、血

液中有形成分相對增多，多為暫時(shí)性增多。

六、操作方法(專業(yè)知識(shí)，專業(yè)實(shí)踐能力，了解)

看下面2個(gè)圖。

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(改良牛鮑計(jì)數(shù)板)：用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)

池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一條支持柱，將特制的專用蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池內(nèi)劃有

長、寬各3.0mm的方格，分為9個(gè)大格，每個(gè)大格面積為1.Omml容積為0.1mm"(u1)。

中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格，位于正中及四角的5個(gè)中方格是紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)區(qū)域，每個(gè)

中方格用單線分為16個(gè)小方格。四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)中方格。

根據(jù)1941年國際標(biāo)準(zhǔn)局(NBS)規(guī)定，大方格每邊長度允許誤差為±設(shè)，即蓋玻片與計(jì)數(shù)

池間隙深度允許誤差為±2臨即0.l±0.002mm。

2.蓋玻片：是專用的玻璃蓋片，要求表面平整光滑，兩面平整度在0.002mm以內(nèi)，蓋玻片規(guī)格是

24mmX20mmX0.6mm?

3.微量吸管：為一次性定量(10或20U1)毛細(xì)玻璃管采血，使用前須經(jīng)水銀稱重法校正(誤差應(yīng)〈土1%)。

使用后，應(yīng)經(jīng)2g/L過氧乙酸消毒2小時(shí)，然后依次用蒸儲(chǔ)水沖洗、95%乙醉脫水、乙醛干燥。

4.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)操作和注意事項(xiàng)

(1)計(jì)數(shù)和計(jì)算：在2ml紅細(xì)胞稀釋液中加血10U1,混勻后，充入計(jì)數(shù)池，靜置3?5min后，在高

倍鏡下，計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)需遵循一定方向逐格進(jìn)行，以免

重復(fù)或遺漏，對壓線細(xì)胞采用數(shù)左不數(shù)右、數(shù)上不數(shù)下的原則。

計(jì)算公式為：

紅細(xì)胞/L=NX25/5X10X106X200=NX1O10

=N/100X1012,

N表示5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得紅細(xì)胞數(shù)

X25/5：由5個(gè)中方格紅細(xì)胞數(shù)，換算為一個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)

X10：由一個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)，換算為1口1稀釋血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)

X106：1L=106u1

X200：為血液稀釋倍數(shù)

(2)清潔：應(yīng)保證計(jì)數(shù)板和蓋玻片清潔。操作時(shí)，勿接觸計(jì)數(shù)板表面，以防污染。使用后，依次用95%

乙醇、蒸儲(chǔ)水棉球、清潔綢布擦凈。

(3)充池：需一次完成充池，如充池過少、過多或有氣泡、繼續(xù)充液，應(yīng)重新操作，充池后不能移動(dòng)

蓋玻片。紅細(xì)胞在計(jì)數(shù)池中若分布不均，每個(gè)中方格間相差超過20個(gè)應(yīng)重新充池，兩次紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相差不

得超過5虬

(4)計(jì)數(shù)板：改良計(jì)數(shù)板每年要鑒定1次，以免影響計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

(5)白細(xì)胞影響：通常白細(xì)胞總數(shù)較少，僅相當(dāng)于紅細(xì)胞的1/500?1/1000,對結(jié)果影響很小，可

以忽略不計(jì)。但白細(xì)胞過高者(WBC>100X109/L),紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行校正。

方法有兩種：一是直接將患者紅細(xì)胞數(shù)減去白細(xì)胞數(shù)，二是在高倍鏡下觀察勿將白細(xì)胞計(jì)入，白細(xì)胞

體積常比紅細(xì)胞略大，中央無凹陷，細(xì)胞核隱約可見，無黃綠色折光。

(6)紅細(xì)胞稀釋液：傳統(tǒng)稀釋液(Hayem液)由NaCl(氯化鈉，調(diào)節(jié)滲透壓)、Na2so,?10HQ(結(jié)晶

硫酸鈉，提高比密防止細(xì)胞粘連)、HgCk。(氯化高汞，防腐)和蒸儲(chǔ)水組成。枸檬酸鈉稀釋液由枸椽酸

鈉(抗凝和維持滲透壓)、甲醛(防腐和固定紅細(xì)胞)、氯化鈉(調(diào)節(jié)滲透壓)和蒸儲(chǔ)水組成。普通生理

鹽水或加設(shè)甲醛生理鹽水。

第三節(jié)血紅蛋白測定

本節(jié)要點(diǎn)：

(1)檢測原理

(2)方法學(xué)評價(jià)

(3)質(zhì)量控制

(4)參考值

(5)臨床意義

(6)氟化高鐵血紅蛋白測定法操作

一、檢測原理

1.鼠化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法

血液中除硫化血紅蛋白(SHb)外的各種Hb(如氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白(Hi)

或其他衍生物)均可被高鐵氟化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN-結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物一一氟化高

鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，用分光光度計(jì)測定該處的吸光度，經(jīng)換算即可得到每升血液中的

血紅蛋白濃度，或通過制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線查得血紅蛋白濃度。

2.十二烷基硫酸鈉血紅蛋白(SDS)測定法

血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物，用分光光度計(jì)測定波

峰538nm處吸光度，經(jīng)換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

二、方法學(xué)評價(jià)

Hb測定方法大致分為：①根據(jù)Hb分子組成測Hb(全血鐵法)；②根據(jù)血液物理特性測Hb(比密法、

折射儀法)；③根據(jù)Hb與可逆性結(jié)合的特性測Hb(血?dú)夥治龇?，④根據(jù)Hb衍生物光譜特征定量測Hb

(比色法)。

1.氟化高鐵血紅蛋白法(HiCN)：1966年被ICSH推薦為參考方法。該法操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定

可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點(diǎn)。其致命的弱點(diǎn)是氟化鉀(KCN)試劑有劇毒，使用管理不當(dāng)可造成

公害。

2.十二烷基硫酸鈉血紅蛋白測定法(SDS)：該法操作簡單、呈色穩(wěn)定、準(zhǔn)確性和精確性符合要求、無

公害等優(yōu)點(diǎn)。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，不能直接用吸光度計(jì)算Hb濃度，而且SDS試劑本身質(zhì)量

差異較大會(huì)影響檢測結(jié)果。

3.疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法：該法優(yōu)點(diǎn)與HiCN測定法相似、最大吸收峰在542nm、顯色快、結(jié)果

穩(wěn)定、試劑毒性僅為HiCN測定法的1/7,但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白(AHD575)測定法：該法試劑簡單、呈色穩(wěn)定、無公害、吸收峰在575nm、可用氯化

血紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品。但儀器多采用540nm左右濾光板，限制了此法使用。

5.澳代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測定法：該法試劑溶血性強(qiáng)又不破壞白細(xì)胞，適用于儀器上

自動(dòng)檢測11b和白細(xì)胞。缺點(diǎn)是測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不佳。

6.沙利(Sahli)酸化血紅蛋白法：該法簡單易行，但重復(fù)性差、誤差較大，已被列為縣以上醫(yī)院淘汰

的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

7.血細(xì)胞分析儀：優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、快速、同時(shí)可獲得多項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)，血紅蛋白測定原理與手工法

相似，但由于各型儀器使用溶血?jiǎng)┎煌纬蒆b的衍生物不同。儀器須經(jīng)HiCN標(biāo)準(zhǔn)液校正后才能使用。

儀器法測定精度(CV)約為1%?

三、質(zhì)量控制

1.樣本：異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30X10'/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度，干擾Hb測定。

2.采血部位：部位不同，結(jié)果不同，靜脈血比毛細(xì)血管血低(10?15)%。

3.結(jié)果分析：測定值假性增高的原因是稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)、紅細(xì)胞溶解不當(dāng)、血漿中脂質(zhì)或蛋白質(zhì)量增加。

4.HiCN參考液：是制備標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算K值、校準(zhǔn)儀器和其他測定方法的重要物質(zhì)。ICSH公布了制備

方法和規(guī)格，我國HiCN部級參考品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為：

(1)圖形掃描波峰540±lnm,波谷504?502nm。

(2)AX540nm/A卜504nm=1.590?1.630。

(3)A\750nm<0.002o

(4)無菌試驗(yàn)：普通培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)陰性。

(5)精密度：隨機(jī)抽樣10支測定，CVW0.5%。

(6)準(zhǔn)確度：以W1I0HiCN參考品為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定，測定值與標(biāo)示值之差W±0.5%。

(7)穩(wěn)定性：3年內(nèi)不變質(zhì)，測定值不變。

(8)分裝于棕色安甑內(nèi)，每支不少于10ml。

(9)標(biāo)簽應(yīng)寫明產(chǎn)品名稱、批號、含量、有效期、生產(chǎn)日期、貯存法等。

5.質(zhì)控物

(l)ACD抗凝全血：4℃可保存3?5周，用于RBC、Hb和WBC質(zhì)控。

(2)進(jìn)口全血質(zhì)控物：用于多參數(shù)血細(xì)胞分析儀RBC、Hb和WBC質(zhì)控。

(3)醛化半固定紅細(xì)胞：4℃可保存50?60d,用于RBC、Hb質(zhì)控。

(4)溶血液：用于Hb質(zhì)控。

(5)凍干全血：可長期保存，用于Hb質(zhì)控。

四、參考值

成年男性成年女性新生兒

RBC(4.0-5.5)X1012/L(3.5-5.0)X1012/L(6.0-7.0)X10l2/L

Hb120-160g/LU0-150g/L170-200g/L

HCT0.47±0.040.42±0.05

老年(70歲以上)：男性94.2?122.2g/L；女性86.5?111.8g/L。

五、臨床意義

1.生理性變化

(1)年齡：隨年齡增長，Hb可增高或減低，和紅細(xì)胞變化相似。

(2)時(shí)間：紅細(xì)胞和血紅蛋白量有天內(nèi)波動(dòng)，上午7時(shí)達(dá)高峰，隨后下降。

2.病理性變化

血紅蛋白測定臨床意義和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相似，但在貧血程度的判斷上優(yōu)于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。需注意的是：

(1)某些疾病，血紅蛋白和紅細(xì)胞濃度不一定能正確反映全身紅細(xì)胞的總?cè)萘?。如大量失血時(shí)，在補(bǔ)

充液體前，雖循環(huán)血容量縮小，但血液濃度很少變化，從血紅蛋白濃度來看，很難反映出存在貧血。如水

潴留時(shí)，血漿容量增大，即使紅細(xì)胞容量正常，但血液濃度減低，從血紅蛋白濃度來看，已存在貧血，反

之，失水時(shí)，血漿容量縮小，即使血液濃度增高，但紅細(xì)胞容量減少，從血紅蛋白濃度來看，貧血不明顯。

(2)發(fā)生大細(xì)胞性貧血或小細(xì)胞低色素貧血時(shí)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與血紅蛋白濃度不成比例。大細(xì)胞性貧血

的血紅蛋白濃度相對偏高，小細(xì)胞低色素貧血的血紅蛋白減低，但紅細(xì)胞計(jì)數(shù)可正常。

六、HiCN法操作注意事項(xiàng)

1.測定：在5mlHiCN轉(zhuǎn)化液中，加血20U1,充分混合，靜置5min后，在波長540nm處，光徑(比色

杯內(nèi)徑)1.000cm,HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸儲(chǔ)水調(diào)零，測定吸光度(A)。

2.計(jì)算：

(1)直接按公式計(jì)算：

A64458")

Hb(</L)=—x---------------x251=Ax367.7

441000

A是在540nm處HiCN的吸光度

64458mg是Hb分子量

1000是將毫克轉(zhuǎn)換為克

251血液稀釋倍數(shù)

(2)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：

采用HiCN參考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在分光光度計(jì)上，波長540nm處,測定各種

參考液的吸光度，以參考液血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出換算常數(shù)K

(K=SHb/SA)。根據(jù)樣本吸光度從曲線上查出對應(yīng)的Hb,或用K值計(jì)算：

Hb(g/L)=KXA,

3.HiCN儲(chǔ)存：棕色容器(在塑料容器中CN-丟失，測定結(jié)果偏低)，有塞。4℃保存數(shù)月，不能在

保存，試劑失效。

4.干擾：WBC過高或球蛋白過高，干擾檢測結(jié)果。解決辦法：WBC過高可先離心后取上清比色：球蛋白

過高可在比色液中加入少量固體NaCl或碳酸鉀，混勻后溶液澄清再比色。

5.氟化鉀試劑處理：廢液先以水1：1稀釋，再加次氯酸鈉35ml/L,充分混勻，放置15h以上，使CN-

氧化成CO2和N?揮發(fā)，或水解成C0：和附；，再排入下水道。廢液不能和酸性溶液混合，否則產(chǎn)生劇毒鼠氫

酸氣體。

第四節(jié)紅細(xì)胞形態(tài)檢查

本節(jié)要點(diǎn)：

(1)檢測原理

(2)方法學(xué)評價(jià)

(3)質(zhì)量控制

(4)參考值

(5)臨床意義

一、檢測原理：顯微鏡觀察

紅細(xì)胞形態(tài)檢查與血紅蛋白測定、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相結(jié)合可粗略推斷貧血原因，對貧血診斷和鑒別診

斷有很重要臨床價(jià)值。將細(xì)胞分布均勻的血涂片，進(jìn)行染色(如瑞氏染色)后，根據(jù)各種細(xì)胞和成分各自

的呈色特點(diǎn)，在顯微鏡下進(jìn)行觀察和識(shí)別。

二、方法學(xué)評價(jià)

血涂片觀察一方面用于估計(jì)血細(xì)胞的相對數(shù)量，作為儀器質(zhì)控方法之一，另一方面通過形態(tài)學(xué)識(shí)別，

初步判斷貧血原因。但制片不當(dāng)，常使細(xì)胞鑒別發(fā)生困難，甚至產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)論。

三、質(zhì)量控制

1.選擇細(xì)胞分布均勻的區(qū)域。

2.注意檢查順序的完整性：應(yīng)先在低倍鏡下估計(jì)細(xì)胞分布和染色情況，再用油鏡觀察血膜體尾交界處

細(xì)胞形態(tài)，同時(shí)瀏覽是否存在其他異常細(xì)胞，如幼稚或有核紅細(xì)胞等，有時(shí)異常成分常集中分布在血片邊

緣，應(yīng)注意觀察。

四、參考值

正常紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)：雙凹圓盤形，大小一致，平均直徑7.2mm,淡粉紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū),

無異常結(jié)構(gòu)。

五、臨床意義

用

正常組噴

1.紅細(xì)胞體積大小變化

(1)小紅細(xì)胞：直徑〈6um的紅細(xì)胞。正常人偶見。小紅細(xì)胞血紅蛋白合成障礙，生理性淡染區(qū)擴(kuò)大,

見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。小紅細(xì)胞血紅蛋白充盈良好，生理性淡染區(qū)消失，見于遺傳性

球形細(xì)胞增多癥。

4虹細(xì)

(2)大紅細(xì)胞：直徑＞10um的紅細(xì)胞，為未完全成熟紅細(xì)胞，體積較大，因殘留脫氧核糖核酸，瑞氏

染色后呈多色性或嗜堿性點(diǎn)彩。見于巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、惡性貧血等。

(3)巨紅細(xì)胞：直徑＞15um的紅細(xì)胞，因葉酸、維生素及缺乏使幼稚細(xì)胞內(nèi)DNA合成不足，不能按

時(shí)分裂，脫核后成為巨大紅細(xì)胞，血涂片還可見分葉過多中性粒細(xì)胞。見于巨幼細(xì)胞性貧血。

(4)紅細(xì)胞大小不均：紅細(xì)胞間直徑相差一倍以上，大者可達(dá)12um,小者僅2.5/Um,與骨髓粗制

濫造紅細(xì)胞有關(guān)。見于嚴(yán)重的增生性貧血(如巨幼細(xì)胞性貧血)。

切根

2.紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變

(1)正常色素性：紅細(xì)胞呈淡紅色，中央有生理性淺染區(qū)。見于正常人、急性失血、再生障礙性貧血

和白血病等。

(2)低色素性：紅細(xì)胞中央生理性淺染區(qū)擴(kuò)大，成為環(huán)形紅細(xì)胞，提示血紅蛋白含量明顯減少。見于

缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞性貧血、某些血紅蛋白病。

(3)高色素性：紅細(xì)胞中央淺染區(qū)消失，整個(gè)紅細(xì)胞染成紅色，胞體增大，平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量

增高，平均血紅蛋白濃度正常。見于巨幼細(xì)胞性貧血。

(4)多色性：是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，胞體較大，胞質(zhì)內(nèi)尚存少量嗜堿性物質(zhì)(RNA),紅細(xì)胞染

成灰紅色或淡灰藍(lán)色。見于正常人(占1%左右)、骨髓造紅細(xì)胞功能活躍(如溶血性或急性失血性貧血)。

0III

niiv

網(wǎng)純倒電

(5)細(xì)胞著色不一：同一血涂片同時(shí)出現(xiàn)低色素、正常色素性兩種細(xì)胞，又稱雙形性貧血。見于鐵粒

幼紅細(xì)胞性貧血。

3.紅細(xì)胞形狀改變

(1)球形紅細(xì)胞：細(xì)胞中央著色深、體積小、直徑與厚度比小于2.4：1(正常值3.4：1),球形紅

細(xì)胞氣體交換功能較正常紅細(xì)胞為弱，且容易導(dǎo)致破壞、溶解。見于遺傳性和獲得性球形細(xì)胞增多癥(如

自身免疫溶血性貧血、直接理化損傷如燒傷等)和小兒。

（2）橢圓形紅細(xì)胞：細(xì)胞呈橢圓形、桿形、兩端鈍圓、長軸增大，短軸縮短、長是寬的3?4倍，長

徑為12.5um,橫徑為2.5um,其紅細(xì)胞生存時(shí)間一般正常也可縮短，血紅蛋白正常，與遺傳性細(xì)胞膜異

?；蛴嘘P(guān)，細(xì)胞成熟后呈橢圓形，置于高滲、等滲、低滲、正常血清內(nèi)，其橢圓形保持不變。見于遺傳

性橢圓形細(xì)胞增多癥（可達(dá)25%?75%）、大細(xì)胞性貧血（可達(dá)25%）、缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細(xì)

胞貧血、鐮形細(xì)胞性貧血、正常人（約占1%,不超過15%）。

（3）靶形細(xì)胞：細(xì)胞中央染色較深，外圍為蒼白區(qū)域，而邊緣又深染，形如射擊之靶。有時(shí)，中央深

染區(qū)呈細(xì)胞邊緣延伸的半島狀或柄狀。細(xì)胞直徑比正常大，但厚度變薄，由于紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白化學(xué)成分

發(fā)生變異和鐵代謝異常所致，形成過程是：紅細(xì)胞中血紅蛋白溶解成鐮狀或弓形空白區(qū)，隨后弓形空白區(qū)

兩端繼續(xù)彎曲延伸，形成環(huán)形透明帶，細(xì)胞生存時(shí)間約為正常細(xì)胞的一半或更短。見于各種低色素性貧血

（如珠蛋白生成障礙性貧血、HbC?。⒆枞渣S疸、脾切除后。

（4）口形紅細(xì)胞：細(xì)胞中央有裂縫，中央淡染區(qū)呈扁平狀，似張開的口形或魚口，細(xì)胞有膜異常，Na+

通透性增加，細(xì)胞膜變硬，使脆性增加，細(xì)胞生存時(shí)間縮短。見于口形紅細(xì)胞增多癥、小兒消化系統(tǒng)疾患

引起的貧血、酒精中毒、某些溶血性貧血、肝病和正常人（（4%）。

口形紅細(xì)胞

(5)鐮形紅細(xì)胞：細(xì)胞呈鐮刀狀、線條狀或L、S、V形等，是含有異常血紅蛋白S(HbS)的紅細(xì)胞,

在缺氧情況下，溶解度減低，形成長形或尖形結(jié)晶體，使細(xì)胞膜發(fā)生變形。檢查鐮形紅細(xì)胞時(shí)需加還原劑

如偏亞硫酸鈉后觀察。見于鐮狀細(xì)胞貧血(HbS-S,HbS-C)、鐮狀細(xì)胞特性樣本(HbA-S)。

海形紅細(xì)胞

(6)棘紅細(xì)胞：細(xì)胞表面有針狀突起、間距不規(guī)則、長和寬不一。見于遺傳性或獲得性B-脂蛋白缺

乏癥(高達(dá)70%?80%)、脾切除后、酒精中毒性肝病、尿毒癥。需與皺縮紅細(xì)胞(鋸齒狀紅細(xì)胞)鑒別，

皺縮紅細(xì)胞邊緣呈鋸齒形、排列緊密、大小相等、外端較尖。

(7)裂紅細(xì)胞：為紅細(xì)胞碎片或不完整紅細(xì)胞，大小不一、外形不規(guī)則、呈刺形、盔形、三角形、扭

轉(zhuǎn)形等，是細(xì)胞通過阻塞的、管腔狹小的微血管所致。見于彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、

重型珠蛋白生成障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重?zé)齻ＵＨ?<2%)。

(8)緡錢狀紅細(xì)胞：紅細(xì)胞互相連接如緡錢狀，是因?yàn)檠獫{中某些蛋白(纖維蛋白原、球蛋白)增高,

使紅細(xì)胞正負(fù)電荷發(fā)生改變所致。

(9)有核紅細(xì)胞(幼稚紅細(xì)胞)：除1周內(nèi)嬰幼兒血涂片中可見少量有核紅細(xì)胞外，其他則為病理現(xiàn)

象，包括：

①溶血性貧血：嚴(yán)重的溶血性貧血、新生兒溶血性貧血、自身免疫性溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血。

因紅細(xì)胞大量破壞、機(jī)體相對缺氧，使紅細(xì)胞生成素水平增高，骨髓紅系增生，網(wǎng)織紅細(xì)胞和部分幼稚紅

細(xì)胞提前釋放人血，說明骨髓有良好的調(diào)節(jié)功能。

②造血系統(tǒng)惡性疾患或骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤：各種急、慢性白血病、紅白血病。由于骨髓充滿大量白血病

細(xì)胞而使幼紅細(xì)胞提前釋放，或因髓外造血所致，有核紅細(xì)胞以中、晚幼紅細(xì)胞為主。紅白血病時(shí)可見更

早階段幼稚紅細(xì)胞，并伴形態(tài)異常。

③慢性骨髓增生性疾?。喝绻撬枥w維化，血涂片可見有核紅細(xì)胞，來自髓外造血和纖維化的骨髓。

④脾切除后：骨髓中個(gè)別有核紅細(xì)胞能到達(dá)髓竇，當(dāng)脾切除后，不能被脾臟扣留，從而進(jìn)入外周血。

(10)其他：①新月形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞著色極淡、殘缺不全、體積大、狀如新月形、直徑約20口m,見

于某些溶血性貧血(如陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥)。②淚滴形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞形如淚滴樣或梨狀，因細(xì)

胞內(nèi)含有Heinz小體或包涵體，或紅細(xì)胞膜被粘連而拉長所致。見于貧血、骨髓纖維化和正常人。③紅細(xì)

胞形態(tài)不整：出現(xiàn)不規(guī)則的奇異形狀，如豆?fàn)睢⒗嫘?、蝌蚪狀、麥粒狀、棍棒形等。見于某些感染、?yán)重

貧血、巨幼細(xì)胞性貧血。

4.紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)

（1）嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：瑞氏染色后，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍(lán)色顆粒（RNA）,屬于未完全成熟紅

細(xì)胞，顆粒大小不一、多少不等，原因?yàn)橹亟饘贀p傷細(xì)胞膜，使嗜堿性物質(zhì)凝集，或嗜堿性物質(zhì)變性，或

血紅蛋白合成中阻斷原嚇琳與鐵結(jié)合。見于鉛中毒。正常人血涂片中很少見到嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（約占1

/10000）。其他各類貧血見到點(diǎn)彩紅細(xì)胞表明骨髓造血旺盛或有紊亂現(xiàn)象。

（2）豪焦小體（Howell-Jolly'sbody、染色質(zhì)小體）：成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有一個(gè)或多

個(gè)直徑為1?2um暗紫紅色圓形小體，為核碎裂、溶解后的殘余部分。見于脾切除后、無脾癥、脾萎縮、

脾功能低下、紅白血病、某些貧血（如巨幼細(xì)胞性貧血）。

（3）卡波環(huán)：在嗜多色性、堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)紫紅色細(xì)線圈狀結(jié)構(gòu)，呈環(huán)形、8字形，為核

膜殘余物、紡錘體殘余物（電鏡下，可見形成紡錘體的微細(xì)管著色點(diǎn)異常）、脂蛋白變性物。見于白血病、

巨細(xì)胞性貧血、增生性貧血、鉛中毒、脾切除后。

（4）寄生蟲：紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見瘧原蟲、微絲蜘、杜利什曼原蟲等病原體。

表2異常紅細(xì)胞形態(tài)的改變及其臨床意義

形態(tài)異常主要臨床意義

大小改變

小紅細(xì)胞缺鐵性貧血、珠蛋白代謝異常的血紅蛋白病、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥

大紅細(xì)胞溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血

巨紅細(xì)胞巨幼細(xì)胞性貧血

大小不均嚴(yán)重的增生性貧血

表2異常紅細(xì)胞形態(tài)的改變及其臨床意義（續(xù)）

形態(tài)異常主要臨床意義

形態(tài)改變

球形紅細(xì)胞遺傳性球形紅細(xì)胞在增多癥、自身免疫性溶血性

貧血、新生兒溶血病及紅細(xì)胞醵胡陷所致貧血

橢圓形紅細(xì)胞遺傳性橢圓性紅細(xì)胞增多癥（25%以上）

靶形紅細(xì)胞珠蛋白生成障礙性貧血、各種低色素性貧血

鐮形紅細(xì)胞鐮形紅細(xì)胞性貧血（HbS?。?/p>

表2異常紅細(xì)胞形態(tài)的改變及其臨床意義（續(xù)）

形態(tài)異常主要臨床意義

口形紅細(xì)胞遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥、DIC

棘性紅細(xì)胞卜脂蛋白缺乏癥及脾切除后、酒精中毒性肝病、尿毒癥

裂細(xì)胞DIC,微血管病性溶血性貧血、重癥珠蛋白生成障礙性貧血

紅細(xì)胞形態(tài)不整巨幼細(xì)胞性貧血

表2異常紅細(xì)胞形態(tài)的改變及其臨床意義(續(xù))

形態(tài)異常主要臨床意義

血紅蛋白改變

正色素性急性失血、再障貧血、白血病

低色素性缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞性貧血、某些血紅蛋白病

高色素性巨幼細(xì)胞性貧血

嗜多色性增生性貧血(尤其是溶血性貧血)

表2異常紅細(xì)胞形態(tài)的改變及其臨床意義(續(xù))

形態(tài)異常主要臨床意義

出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)

堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞鉛、鈿、汞中毒(鉛中毒診斷篩查指標(biāo))

豪焦小體巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、脾切除后

卡波環(huán)巨幼細(xì)胞性貧血、鉛中毒

有核紅細(xì)胞各種溶血性貧血、白血病或腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移

習(xí)題6紅細(xì)胞中出現(xiàn)染色質(zhì)小體多見于

A.真性紅細(xì)胞增多癥

B.巨幼細(xì)胞性貧血

C.鉛中毒

D.再生障礙性貧血

E.白血病

J[答疑編號500731020401]

Il正確答案』B

第五節(jié)血細(xì)胞比容(HCT)測定

本節(jié)考點(diǎn)：

(1)檢測原理

(2)方法學(xué)評價(jià)

(3)質(zhì)量控制

(4)參考值

(5)臨床意義

(6)操作方法

(-)檢測原理

血細(xì)胞比容(Het、Ht、HCT或PCV)是指在一定條件下，經(jīng)離心沉淀壓緊的紅細(xì)胞在全血樣本中所占

比值。

L離心法：包括溫氏法(Wintrobe法)、微量法：是將抗凝血置于孔徑統(tǒng)一的溫氏管或毛細(xì)玻管中，

以一定轉(zhuǎn)速離心一定時(shí)間后，計(jì)算紅細(xì)胞層占全血的體積比。

2.血液分析儀法：原理是當(dāng)細(xì)胞通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即為細(xì)胞數(shù)量，

脈沖高度為細(xì)胞體積，通過紅細(xì)胞平均體積（MCV）和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）即求得血細(xì)胞比容，Hct=MCVXRBC。

（-）方法學(xué)評價(jià)

1.手工法：有折射計(jì)法、粘度法、比密測定法、離心法和放射性核素法。溫氏法：采用中速離心，不

能完全排除紅細(xì)胞間殘留血漿，測定結(jié)果偏高，已屬淘汰。微量法：采用高速離心，細(xì)胞間殘留血漿比溫

氏法少（約2Q,且樣本用量小、操作簡便、殘留血漿1%?3虹

2.血液分析儀法：儀器法CV為1%,手工法CV為2%,儀器法應(yīng)注意紅細(xì)胞增多癥或血漿滲透壓異常時(shí)

會(huì)出現(xiàn)誤差。

（三）質(zhì)量控制

1.手工法：抗凝劑量不準(zhǔn)確、混勻不充分、離心速度不夠會(huì)產(chǎn)生誤差。紅細(xì)胞形態(tài)異常（如小紅細(xì)胞、

大紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞）或紅細(xì)胞增多癥可使血漿殘留量增加6%。當(dāng)紅細(xì)胞增多時(shí)，Het

明顯增高，血漿殘留也會(huì)增加。

2.血液分析儀法：要注意Het是否與RBC、MCV相關(guān)。

（四）參考值

Wintrobe法：男性0.40?0.54；女性0.37?0.47。

微量法：男性0.47±0.04；女性0.42±0.05。

（五）臨床意義

1.增高：見于各種原因所致血液濃縮，如大量嘔吐、大手術(shù)后、腹瀉、失血、大面積燒傷、真性紅細(xì)

胞增多癥（可達(dá)0.80L/L）、繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。

2.減低：見于各種貧血，但不同類型的貧血，Het減少程度與RBC計(jì)數(shù)值不完全一致。

3.輸液評估：用于評估血漿容量有無增減或濃縮稀釋程度，有助于控制補(bǔ)液量和了解體液平衡情況，

是臨床輸血、輸液治療療效觀察的指標(biāo)。

4.計(jì)算平均值：作為紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞平均血打蛋白濃度計(jì)算的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。也是影響全血粘度

的決定因素之一。

（六）操作方法和注意事項(xiàng)

1.溫氏法：取EDTA-K?或肝素鈉抗凝靜脈血2ml,加入溫氏管中，用水平離心機(jī)以2264g（即有效半徑

22.5cm,3000r/min）,離心30分鐘，離心后血液分為5層，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細(xì)胞

層和有核紅細(xì)胞層、還原紅細(xì)胞層（紫黑紅色）、帶氧紅細(xì)胞層（鮮紅色）。讀取還原紅細(xì)胞層柱高的毫

米數(shù)，乘以0.01,即為每升血液中紅細(xì)胞體積的升數(shù)。

2.微量法：取抗凝全血或末梢血，充入一次性毛細(xì)玻管（管長75mm，內(nèi)徑約0.8?1.0mm,壁厚0.20?

0.25mm,每支含肝素2U）的2/3（50mm）處，封口后，用水平式毛細(xì)管Het離心機(jī)以12000r/min（相對

離心力RCF210000g）,離心5min,用專用讀數(shù)板或刻度尺，讀取還原紅細(xì)胞層和全層長度，計(jì)算Het值。

3.注意事項(xiàng)：橡皮泥封管口底面應(yīng)平整，以深入毛細(xì)血管內(nèi)2mm左右為宜。應(yīng)做雙份試驗(yàn)，結(jié)果之差

應(yīng)＜0.01,

第六節(jié)紅細(xì)胞平均指數(shù)

本節(jié)要點(diǎn)：

（1）檢測原理

（2）方法學(xué)評價(jià)

（3）質(zhì)量控制

（4）參考值

（5）臨床意義

（一）檢測原理

1.手工法：通過紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白量和血細(xì)胞比容值計(jì)算紅細(xì)胞平均指數(shù)。

（1）紅細(xì)胞平均容積：MCV,代表每個(gè)紅細(xì)胞平均體積的大小。

RBC

（2）紅細(xì)胞血平均紅蛋白含量：MCH,代表每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)平均所含血紅蛋白的量。

Hb

MCH---------（pg\ig=ioupg

（3）紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度：MCHC,代表平均每升紅細(xì)胞中所含血紅蛋白濃度。

Het

2.血液分析儀：能直接導(dǎo)出MCV值，再結(jié)合直接測定的RBC和Hb,計(jì)算出MCH（=Hb/RBC）和MCHC

（=MCHXMCV）。

（二）方法學(xué)評價(jià)

1.MCV：當(dāng)紅細(xì)胞凝集（如冷凝集綜合征）、嚴(yán)重高血糖癥（葡萄糖高于60000mg/L）可使MCV假性增

局o

2.MCH：高脂血癥、白細(xì)胞增多癥可使MCH假性增高。

3.MCHC：受Het（血漿殘留或出現(xiàn)異常紅細(xì)胞）和Hb（高脂血癥、白細(xì)胞增多癥）的影響。

（三）質(zhì)量控制

1.手工法：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容測定數(shù)據(jù)必須準(zhǔn)確可靠。

2.血液分析儀法：利用人群紅細(xì)胞平均指數(shù)相當(dāng)穩(wěn)定的原理，用XB分析法或浮動(dòng)均值法對血液分析儀

進(jìn)行質(zhì)量控制。

（四）參考值見表1-2T

tl-H下月人B8U制t的■壽意才

Mcv(nMCH"MCHC(|/U

m

17歲227J20-3?

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M*108

?帕加NW.ObciUsgiETgN1vBsu1dm

c?w.觸

lml=10,2fl,lg=10l2pg

（五）臨床意義

紅細(xì)胞平均指數(shù)可作為貧血形態(tài)學(xué)分類依據(jù)（表『2-2）。

小紅細(xì)胞性貧血可低至MCV50f1,MCH15pg、MCHC220g/L；大紅細(xì)胞可高至MCH150fKMCH50pg,但MCHC

正常或減低；MCHC增高見于球形細(xì)胞增多癥，但不超過380g/L。

紅細(xì)胞平均指數(shù)僅代表紅細(xì)胞平均值，有一定局限性。如溶血性貧血和急性白血病，雖屬正細(xì)胞性貧

血，但紅細(xì)胞可有明顯的大小不均和異形，大細(xì)胞性貧血，也可有小細(xì)胞存在，小細(xì)胞貧血，也可有大紅

細(xì)胞，必須作血涂片檢查才能較為準(zhǔn)確地診斷。

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第七節(jié)紅細(xì)胞體積分布寬度

本節(jié)要點(diǎn)：

（1）檢測原理

（2）方法學(xué)評價(jià)

（3）質(zhì)量控制

（4）參考值

（5）臨床意義

（-）檢測原理

紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）反映樣本中紅細(xì)胞體積大小的異質(zhì)程度，即反映紅細(xì)胞大小不等客觀指標(biāo),

常用變異系數(shù)（CV）表示，由血液分析儀的紅細(xì)胞體積直方圖導(dǎo)出。

（-）方法學(xué)評價(jià)

RDW是對紅細(xì)胞體積大小的評價(jià)，比血涂片紅細(xì)胞形態(tài)大小的觀察更為客觀和準(zhǔn)確。

（三）質(zhì)量控制

RDW異常受樣本中紅細(xì)胞碎片、紅細(xì)胞凝集、雙相性紅細(xì)胞的影響。

（四）參考值

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作者ffltrRDW(X<LWs)瞄南

Btssuft229<13,91983

Mtflirt90<14.8)985

Robert29<12.r1%5

Marti6)(SD)1987

2013<1€91996

?北京市協(xié)作組6家醫(yī)院使用5種型號全自動(dòng)血液分析儀調(diào)查2013成人（男1013例，女1000例）結(jié)

果。

（五）臨床意義

1.貧血形態(tài)學(xué)分類：根據(jù)紅細(xì)胞形態(tài)大小不同，將貧血分成6類(表1-2-4)。

1983年由Bessman提出的新貧血分類法對貧血病因鑒別診斷具有更大意義。MCV和RDW聯(lián)合檢測對貧

血形態(tài)學(xué)鑒別診斷靈敏度為86.7%?100%,特異度為83.4%?100%。

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2.作為缺鐵性貧血(IDA)：篩選診斷和療效觀察的指標(biāo)：RDW增大對IDA的診斷靈敏度達(dá)95%以上,

特異性不強(qiáng)，可作為IDA的篩選診斷指標(biāo)。當(dāng)鐵劑治療有效時(shí)，RDW開始增大，隨后逐漸降至正常。

3.鑒別缺鐵性貧血和B-珠蛋白生成障礙性貧血：RDW增大對IDA的診斷靈敏度達(dá)95%以上，特異性不

強(qiáng)，可作為IDA的篩選診斷指標(biāo)。當(dāng)鐵劑治療有效時(shí)，RDW開始增大，隨后逐漸降至正常。

第八節(jié)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

本節(jié)要點(diǎn)：

(1)檢測原理

(2)方法學(xué)評價(jià)

(3)質(zhì)量控制

(4)參考值

(5)臨床意義

(6)操作方法

(-)檢測原理

網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret,RET)是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞間的過渡細(xì)胞，屬于尚未完全成熟的

紅細(xì)胞，其胞質(zhì)中殘存嗜堿性物質(zhì)核糖核酸(RNA),經(jīng)活體染色(新亞甲藍(lán)、燦爛甲酚蘭(煌焦油藍(lán))、

中性紅等染料)后，形成核酸與堿性染料復(fù)合物，呈深染的顆粒狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。凡含兩個(gè)以上的深染顆粒

或具有線網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的無核紅細(xì)胞，即為網(wǎng)織紅細(xì)胞。

L普通光學(xué)顯微鏡法：在顯微鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分比或分?jǐn)?shù)。

2.網(wǎng)織細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法和血液分析儀法：用熒光染料（如口丫咤橙、派若寧T、嚷喋橙）使網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)

RNA著色，用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）得到網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。

（二）方法學(xué)評價(jià)

L普通光學(xué)顯微鏡法：試管法操作簡便、重復(fù)性較好。玻片法取血量少、染色時(shí)水分易蒸發(fā)，造成結(jié)

果偏低。但顯微鏡法受主觀因素影響較多，且耗時(shí)費(fèi)力。

2.網(wǎng)織細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法:可客觀地將Ret分成高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）、

低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）三類，有助于化療、放療、移植患者的監(jiān)測。

3.血液分析儀法：可提供網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值（Ret）、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（Ret%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬

度（RDWr）,網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積（MCVr/MRV）、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（HCr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血

紅蛋白濃度（MCHCr）＞網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度（HDWr）、度R、MFR、HFR、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RML

RMI=（MFR+HFR）/LFRX100）。儀器法優(yōu)點(diǎn)是測量細(xì)胞多、避免主觀因素、方法易于標(biāo)準(zhǔn)化。

（三）質(zhì)量控制

1.顯微鏡法

影響因素有：操作人員對網(wǎng)織紅細(xì)胞識(shí)別不同、血涂片質(zhì)量好壞、計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)量多少、計(jì)數(shù)方法等。

_1/Ret（100-Ret）

入Ret±2LI------------

Miller窺盤法計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞誤差可減小，網(wǎng)織紅細(xì)胞95%可信限為：、“

2.儀器法：儀器法計(jì)數(shù)紅細(xì)胞10000?50000個(gè)。出現(xiàn)Howe器法oily小體、有核紅細(xì)胞、巨大血小板

會(huì)使結(jié)果假性增高。

（四）參考值

顯微鏡計(jì)數(shù)法：成人0.008?0.02或（25?75）X109/L,新生兒0.02?0.06。儀器法：表1-2-5。

RMI：男性為9.1%?32.2%,女性為12.8%~33.7%.

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（五）臨床意義

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（尤其是網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值）是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)。正常情況下，骨髓中

網(wǎng)織紅細(xì)胞均值為150X109/L,血液中為65X107L。當(dāng)骨髓Ret增多，外周血減少時(shí)，提示釋放障礙;

骨髓和外周血R