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文檔簡介

經(jīng)典柱色譜技術(shù)

——凝膠柱色譜操作技術(shù)江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物藥學(xué)院儀器分析技術(shù)凝膠柱色譜操作技術(shù)主要包括五個(gè)步驟3、加樣2、裝柱1、溶脹4、洗脫5、再生儀器分析技術(shù)凝膠是干燥的顆粒，使用前需要在洗脫液中充分溶脹一至數(shù)天，溶脹一定要完全，否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱的不均勻。

如在沸水中將濕凝膠逐漸升溫到近沸，則溶脹時(shí)間可以縮短1-2小時(shí)，同時(shí)還可以殺死凝膠中產(chǎn)生的細(xì)菌、脫掉凝膠中的氣泡。1、溶脹凝膠溶脹儀器分析技術(shù)2、裝柱濕法裝柱：1）凝膠裝柱前，去除凝膠中單體、粉末、雜質(zhì)，并排除其中的氣泡；2）將空柱垂直固定，加入少許流動(dòng)相排除柱底起泡，并加約1/4柱高度的流動(dòng)相；3）柱頂部鏈接一個(gè)漏斗，在攪拌下緩慢均勻連續(xù)地加入凝膠懸浮液，同時(shí)打開柱的出口，維持適當(dāng)流速，使凝膠顆粒水平沉積到所需高度；4）拆除漏斗，用濾紙片蓋住凝膠床表面，再用大量洗脫劑將凝膠床洗滌一段時(shí)間。儀器分析技術(shù)用流動(dòng)相平橫處理；樣品過濾或離心；打開色譜柱活塞，讓流動(dòng)相與凝膠床剛好平齊，關(guān)閉出口；將樣品沿管壁輕輕加入到色譜柱中，打開流出口，使樣品滲入到凝膠床；當(dāng)樣品液面恰與凝膠床表面齊平，再次加入少量的洗脫劑沖洗管壁，使樣品全部滲入凝膠床。3、加樣儀器分析技術(shù)流動(dòng)相一般采用水或緩沖液，少數(shù)用水與一些有機(jī)溶劑的混合液?？稍O(shè)置好流速，定量分布收集洗脫液。4、洗脫儀器分析技術(shù)用恰當(dāng)?shù)姆椒ǔツz中的污染物，使其恢復(fù)其原來的性質(zhì)。交聯(lián)葡萄糖凝膠溫?zé)岬?.5mol/L氫氧化鈉和0.5mol/L的氯化鈉的混合液浸泡，用水沖洗到中性聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠

鹽溶液浸泡

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