植物組織培養(yǎng)快繁（植物組織培養(yǎng)技術(shù)課件）

組培苗增殖培養(yǎng)目錄01增值培養(yǎng)的定義02增殖的類型03影響增殖的因素04組培苗增殖培養(yǎng)過(guò)程一、繼代培養(yǎng)（增殖培養(yǎng)）

將初代培養(yǎng)獲得的愈傷組織、不定芽、原球莖等無(wú)菌材料進(jìn)行切割、分離后轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基中增殖的過(guò)程。二、增殖的類型以芽繁芽原球莖增殖愈傷組織增殖三、影響增殖的因素1、植物種類2、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件3、增殖培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短1、植物種類

不同植物種類或同一種類不同品種，同一植物不同器官和不同部位繼代繁殖能力不同。一般是草本優(yōu)于木本植物，年幼材料優(yōu)于年老材料，剛分離組織優(yōu)于已繼代組織。2、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例是影響繁殖系數(shù)和不定芽質(zhì)量的主要因素。光照對(duì)增殖有一定影響，一般弱光利用增殖。3、增殖培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短有的植物材料增殖可保持原來(lái)的再生能力和增殖率；如葡萄、月季等。有的植物材料經(jīng)過(guò)一定時(shí)間增殖培養(yǎng)后才有分化再生能力；如沙棗等。有的隨增殖時(shí)間加長(zhǎng)分化再生能力降低；如杜鵑等。四、組培苗增殖過(guò)程1、培養(yǎng)基的配制1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L瓊脂

計(jì)算母液吸取量吸取母液混合調(diào)節(jié)PH值定容分裝計(jì)算糖、瓊脂等稱取量稱量糖、瓊脂等加水加熱溶解貼標(biāo)簽滅菌人員準(zhǔn)備機(jī)臺(tái)準(zhǔn)備工具準(zhǔn)備母瓶準(zhǔn)備取苗切苗接苗整理2、接種3、育苗室管理溫度：28℃左右。濕度：50-60%。光照：暗培養(yǎng)一周左右，給予1000-1500lux光照。4、注意事項(xiàng)（1）培養(yǎng)基滅菌徹底。（2）嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程。（3）嚴(yán)守生根苗切分及接種要求。組培苗生根培養(yǎng)目錄01組培苗生根培養(yǎng)的類型02影響組培苗生根的因素03組培苗生根培養(yǎng)過(guò)程一、組培苗生根培養(yǎng)的類型1、瓶?jī)?nèi)生根瓶?jī)?nèi)生根是指將完成壯苗階段的單苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生根的方法。2、瓶外生根瓶外生根也叫活體生根。瓶外生根是將已完成壯苗培養(yǎng)的小苗，用生根粉或海藻素處理后栽入疏松透氣的基質(zhì)中，經(jīng)過(guò)合理養(yǎng)護(hù)形成根系的方法。二、影響組培苗生根的因素1、植物材料2、培養(yǎng)基3、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑4、培養(yǎng)條件1、植物材料

不同植物、不同基因類型、同一植株不同部位和不同年齡對(duì)分化生根都有影響，一般木本比草本難，成樹(shù)比幼樹(shù)難，喬木比灌木難。2、培養(yǎng)基

一般情況下礦質(zhì)元素濃度較高時(shí)有利于莖、葉生長(zhǎng)，濃度較低時(shí)有利于生根，且根多而粗壯，發(fā)根也快，加鐵鹽則更好，因此生根培養(yǎng)可使用1/2MS或1/3MS培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)時(shí)通常使用的糖是蔗糖，其濃度一般為1%-3%；組培苗的生根要求一定的pH值，一般為5.0-6.0。3、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

對(duì)于大多數(shù)植物來(lái)說(shuō)，誘導(dǎo)生根需要有適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素，其中最常用的是NAA和IBA，質(zhì)量濃度一般為0.1-10mg/L。通常的使用方法是將植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑預(yù)先加入到培養(yǎng)基中，然后再接種組培苗誘導(dǎo)生根。4、培養(yǎng)條件

不同植物對(duì)光照和溫度的要求不同。光照強(qiáng)度和光照時(shí)間對(duì)生根影響十分復(fù)雜。三、組培苗生根的過(guò)程1、培養(yǎng)基的配制蝴蝶蘭生根培養(yǎng)基：1/2MS+1g/L活性炭+0.1mg/LNAA+18g/L白糖+4g/L瓊脂

計(jì)算母液吸取量吸取母液混合調(diào)節(jié)PH值定容分裝計(jì)算糖、瓊脂等稱取量稱量糖、瓊脂等加水加熱溶解貼標(biāo)簽滅菌人員準(zhǔn)備機(jī)臺(tái)準(zhǔn)備工具準(zhǔn)備母瓶準(zhǔn)備取苗切苗接苗整理2、接種3、育苗室管理溫度：28℃左右。濕度：50-60%。光照：暗培養(yǎng)一周左右，給予1500lux-2000lux光照。4、注意事項(xiàng)（1）培養(yǎng)基滅菌徹底。（2）嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程。（3）嚴(yán)守生根苗切分及接種要求。組培苗的煉苗與移栽

—以粗肋草為例目錄01組培苗的煉苗02組培苗移栽03小苗的養(yǎng)護(hù)管理04提高組培苗移栽成活率的途徑一、組培苗的煉苗

已生根的組培苗在移栽前要先進(jìn)行鍛煉，使組培苗適應(yīng)移栽后的環(huán)境并進(jìn)行自養(yǎng)，這是一個(gè)逐步鍛煉和適應(yīng)的過(guò)程，這個(gè)過(guò)程叫作馴化或煉苗。煉苗的目的在于通過(guò)人工控水、肥、增光、降溫等措施，使組培苗逐漸適應(yīng)外界環(huán)境，提高組培苗對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)性，提高其光合作用的能力，促使組培苗健壯，最終達(dá)到提高組培苗移栽成活率的目的。1、保護(hù)栽培設(shè)施（1）現(xiàn)代溫室（2）日光溫室（3）遮蔭防雨棚（4）防蟲(chóng)紗網(wǎng)棚2、煉苗過(guò)程一般是將生根狀態(tài)理想的組培苗（一般具有2-3條根，根長(zhǎng)1-2cm）移入溫室內(nèi)，開(kāi)始保持與培養(yǎng)室比較接近的環(huán)境條件，適當(dāng)遮光，以后逐漸撤除保護(hù)，使光照條件接近生長(zhǎng)環(huán)境。3、煉苗時(shí)間不同植物的組培苗煉苗時(shí)間不同。如甜葉菊的煉苗時(shí)間為5天，粗肋草的煉苗時(shí)間20-30天，白掌的煉苗時(shí)間30天，蝴蝶蘭、金線蓮的煉苗時(shí)間為2個(gè)月。二、組培苗移栽（1）苗的準(zhǔn)備將馴化（煉苗）過(guò)粗肋草瓶苗瓶塞打開(kāi)，向瓶?jī)?nèi)裝少許水輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，用鑷子輕輕攪動(dòng)瓶苗內(nèi)的培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基松動(dòng)后用鑷子小心將苗子取出，取苗時(shí)注意盡量避免傷苗。組培苗移栽前要將苗上的培養(yǎng)基清洗干凈后控水備用。若瓶苗有少量污染則用清水洗凈后，在1000倍甲基硫菌靈溶液中浸泡15s后取出，再用清水清洗后控水備用。（2）基質(zhì)準(zhǔn)備配制基質(zhì)。將泥炭土（0-10）、珍珠巖按照7：3的比例混合。配制土壤消毒劑。配制甲基硫菌靈1000倍液10L。土壤消毒。將配制好的甲基硫菌靈噴灑于基質(zhì)中消毒。（3）容器準(zhǔn)備組培苗一般采用72孔、105孔黑色穴盤(pán)種植即可。（4）種植種植時(shí)手勢(shì)要輕，要求根系舒展，不能外露，適當(dāng)種深些，1cm。以防后期莖伸長(zhǎng)過(guò)長(zhǎng)，影響美觀且易倒伏?；|(zhì)埋住莖基部即可，切勿將心埋住。不同級(jí)別小苗分別種植不同穴盤(pán)中，種植過(guò)程中要注意保濕工作，適時(shí)給葉面噴水，以免植株失水萎蔫。種植好后，澆定根水，并及時(shí)用薄膜（溫度低的季節(jié)）或遮蔭網(wǎng)（高溫強(qiáng)光季節(jié)）保濕。（1）水分控制小苗定植后，進(jìn)入成活期，時(shí)間長(zhǎng)度一般為8-15d。應(yīng)保持濕度。到成活期后，小苗有了根系，但這時(shí)的根系少而弱，吸水能力較差，需經(jīng)常給小苗噴灑葉面水保濕，并長(zhǎng)期保持基質(zhì)呈濕潤(rùn)狀態(tài)，防止小苗失水萎蔫。三、小苗的養(yǎng)護(hù)管理（2）溫度管理移栽前要保持溫度在25-30℃。（3）肥料管理當(dāng)小苗有新根和新葉長(zhǎng)出時(shí)可開(kāi)始澆肥。澆肥用2000-3000倍的20-20-20速效肥液澆灌。澆肥的次數(shù)和頻率要根據(jù)苗的長(zhǎng)勢(shì)來(lái)具體判斷。一般每澆1次肥后，澆1次水后再澆第2次肥。（4）光照強(qiáng)度剛剛移栽的小苗要給予適度遮陰，苗成活穩(wěn)定后要逐漸增強(qiáng)光照，才可使粗肋草葉色美觀。穴盤(pán)苗的光照強(qiáng)度控制在10000lux以內(nèi)，陰天可全光照。四、提高組培苗移栽成活率的途徑（1）組培苗的生理狀況。組培苗的生理狀況是影響移栽成活率的內(nèi)在因素。