高速逆流色譜原理及應(yīng)用

關(guān)于高速逆流色譜原理及應(yīng)用多級(jí)萃取技術(shù)第2頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第3頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月離心分配色譜平面圖第4頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月離心分配色譜立體圖第5頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月同步行星式逆流色譜第6頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第7頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月高速逆流色譜運(yùn)行平面圖第8頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第9頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月分離區(qū)分離區(qū)混合區(qū)第10頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第11頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月HSCCC系統(tǒng)連接工作圖第12頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月1、HPLC方法的建立盡可能使各峰得到良好的分離2、溶劑系統(tǒng)的選擇根據(jù)樣品的溶解特性選擇溶劑體系測(cè)定分配系數(shù)，依據(jù)分配系數(shù)確定溶劑系統(tǒng)K2/K1:0.5-2.53、HSCCC分離條件優(yōu)化色譜柱轉(zhuǎn)速；固定相的保留；流動(dòng)相流速；分離溫度。4、HPLC測(cè)定收集組分的純度HSCCC方法的建立過(guò)程:第13頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月丁醇-醋酸-水丁醇-甲醇-水(緩沖液)丁醇-乙酸乙酯-水(緩沖液)乙酸乙酯-水(緩沖液)氯仿-甲醇-水(毒)甲基異丁基酮-丙酮-水正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水)正己烷-乙腈正己烷-甲醇-水正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水)水溶性和強(qiáng)極性中等極性(氯仿)弱極性(正己烷)HSCCC常用溶劑系統(tǒng)（依據(jù)組分的極性和溶解性）第14頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月PreparativeIsolationofSixMajorSaponinsfromPlatycodiRadixbyHigh-speedCounter-currentChromatographyYoungWanHaandYeongShikKimABSTRACT:Introduction–Platycosides,theprimaryconstituentsofPlatycodiRadix,areknowntohavenumerousandvariedbiologicalactivities,exertinganti-inflammation,anti-allergy,anti-tumour,anti-obesityandanti-hyperlipidemiaeffects.However,effectivemethodsforisolatingandpurifyingplatycosidesfromPlatycodiRadixarenotcurrentlyavailable.Objective–TodevelopanefficientmethodforthepreparativeseparationofsixplatycosidesfromPlatycodiRadixbyhighspeedcounter-currentchromatography(HSCCC)coupledwithanevaporativelightscatteringdetection(ELSD)system.Methodology–Preparativeseparationwasperformedbywaterextractionusingreversed-phaseC18columnchromatographyonanHSCCC-ELSDsystem.Atwo-phasesolventsystemcomprisedhexane–n-butanol–water(1:40:20,v/v)and(1:10:5,v/v)wasemployed.Twootherkeyparameters,revolutionspeedoftheseparationcolumnandflow-rateofthemobilephase,werealsoinvestigatedforoptimumHSCCCperformance.EachpeakfractionobtainedfromseparationoftheplatycosideswascollectedaccordingtotheELSDelutionprofileanddeterminedbyHPLC.Results–Usingthedescribedmethod,sixplatycosides,allwithpuritiesofover94%,couldbeisolatedfrom300mgoftheplatycoside-enrichedfraction.Theirstructureswerecharacterizedbyelectrosprayionisationmassspectrometry(ESI-MS),1HNMRand13C-NMR.第15頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月IntroductionExperimentalApparatus.Reagentsandmaterials.Preparationofcrudesample.MeasurementofpartitioncoefficientsPreparationofthetwo-phasesolventsystemandsamplesolution.HSCCCseparationSelectionofthetwo-phasesolventsystemandHSCCCconditionsResultsandDiscussionHPLCanalysisandidentificationofHSCCCpeakfractionsStructuralidentificationAcknowledgementsReferences第16頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第17頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第18頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月高速逆流色譜的延伸應(yīng)用第19頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月實(shí)例1pH區(qū)帶CCC分離同分異構(gòu)體HSCCC條件：溶劑系統(tǒng):正丁醇-水(1:1)固定相:上相pH=0.5(HCl)流動(dòng)相:下相pH=10.7(NH3)流速:2.0mlmin-1轉(zhuǎn)速:715rpm檢測(cè)波長(zhǎng):206nm樣品量:230mg粗提物機(jī)型:pH-zone-refiningCCC固定相保留：60%1:3-sulfophthalicacid99.0％2:4-sulfophthalicacid99.0％JournalofChromatographyA,966(2002)111–118pH區(qū)帶逆流色譜分離中藥單體中應(yīng)用第20頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月實(shí)例2CCC分離蛇床子HSCCC條件：溶劑系統(tǒng):正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(5:5:5:5)流速:0–180min,1mlmin?1

180–480min,2mlmin?1轉(zhuǎn)速:1000rpm檢測(cè)波長(zhǎng):254nm樣品量:500mg粗提物機(jī)型:CCC-1000相保留:58%A:bergapten96.5%45.8mgB:imperatorin98.2%118.3mg92.1、93.7%JournalofChromatographyA,1061(2004)51–54逆流色譜分離中藥應(yīng)用(V流動(dòng)相)第21頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月實(shí)例3CCC分離短瓣金蓮花黃酮苷HSCCC條件：溶劑系統(tǒng):乙酸乙酯-正丁醇-水(2:1:3)流速:0–190min,1.5mlmin?1

190–480min,2.5mlmin?1轉(zhuǎn)速:800rpm檢測(cè)波長(zhǎng):254nm樣品量:500mg粗提物機(jī)型:CCC-1000保留值:49%1:quercetin-3-O-neohesperidoside

85.1%9.3mg2:orientin(葒草素)97%95.8mg3:未知化合物97%

4:vitexin(牡荊素)97%11.6mgJournalofChromatographyA,1092(2005)216–221逆流色譜分離中藥應(yīng)用(V流動(dòng)相)1.5ml/min2.5ml/min第22頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月貫葉連翹中金絲桃苷HSCCC-HPLC-DAD聯(lián)用分離中藥應(yīng)用第23頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月三相CCC分離15種化合物逆流色譜分離中藥應(yīng)用(三相溶劑系統(tǒng))HEX—MeOAc—ACN--Water第24頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月實(shí)例6二維CCC分離冬凌草HSCCC條件：溶劑系統(tǒng):一維:正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水1:5:1:5二維:正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水

3:5:3:5流速:2mlmin?1

轉(zhuǎn)速:800rpm樣品量:250mg粗提物機(jī)型:2D-CCC保留值:一維:40%

二維:

63%1:oridonin(甲素)95%2:ponicidin(乙素)95%JournalofChromatographyA,1146(2007)125–130二維逆流色譜分離中藥應(yīng)用第25頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月實(shí)例7分離白花前胡中香豆素HSCCC條件：溶劑系統(tǒng):石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水5:5:6:4流速:2mlmin?1

轉(zhuǎn)速:900rpm樣品量:250mg粗提物機(jī)型:TBE-300保留值:54.3%1:7.0mg99.3%2:7.4mg96.1%3:12.5mg96.5%4:42.1mg99.3%5:9.8mg99.7%6:65.2mg98.1%7:31.7mg,92.8%JournalofChromatographyB,877(2009)2571–2578HSCCC-ESI-MSn分離中藥應(yīng)用第26頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月擴(kuò)展和想象湖州:活豬走進(jìn)去鮮肉運(yùn)出來(lái)全機(jī)械化操作《中國(guó)豬業(yè)網(wǎng)》2010-12-27由于該定點(diǎn)屠宰遷建項(xiàng)目采用自動(dòng)化同步流水線加工，活豬進(jìn)去，出來(lái)便是新鮮的豬肉，減少了手工的環(huán)節(jié)和過(guò)程，豬肉更衛(wèi)生，肉品質(zhì)量也會(huì)有大幅提高。第27頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月Applicationofacceleratedsolventextractioncoupledwithhigh-performancecounter-currentchromatographytoextractionandonlineisolationofchemicalconstituentsfromHypericumperforatumL.YuchiZhang,ChunmingLiu,MinYu,ZhengkunZhang,YanjuanQi,JingWang,GuimeiWu,SainanLi,JingYu,YangHuJournalofChromatographyA,1218(2011)2827–2834第28頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月HypericumperforatumL.,atypicaltraditionalChinesemedicine,isusedallovertheworldforthetreatmentofdepression.Additionally,ithasbeenreportedthattheextractsofH.perforatummayhaveaninhibitoryeffect,onhumanbladdercancercells,andactasanantioxidantandanticonvulsant.TheextractsofH.perforatumcontainmanyconstituentswithdocumentedbiologicalactivitysuchasquinicacids,phloroglucinolsandabroadrangeofflavonoids.ExposureoftheextractsofH.perforatumtolightmayleadtothedegradationofphloroglucinols,whichareextremelysensitivetooxidationandunstableinsolutiononexposuretoair,thereforephloroglucinolsaredifficulttoseparateandisolatebyconventionalmethod.Inthiscase,amethodcombininganextractionsystemwithanisolationsystemonlinetoavoidtheexposureoftheextractstoairandlightisurgentlyneeded.Introduction第29頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月Thediagrampresentstwosetups(B)enablinghyphenationofASEandHPCCC第30頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月電視劇《東北一家人》背景：汽車(chē)廠家屬區(qū)開(kāi)辟一片荒地，打算承包給個(gè)人，由個(gè)人決定所要開(kāi)發(fā)的娛樂(lè)項(xiàng)目。甲（牛小偉，呂小品扮演）：打算建設(shè)過(guò)山車(chē)。乙（牛繼紅，金珠扮演）：打算開(kāi)發(fā)滑梯和秋千相關(guān)的項(xiàng)目。丙（孫明，鞏漢林扮演）：認(rèn)為甲和乙所開(kāi)發(fā)的項(xiàng)目太過(guò)時(shí)，小兒科，丙的思路是在過(guò)山車(chē)上打滑梯，蕩秋千。擴(kuò)展和想象第31頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第32頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月第33頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月CompletedpreparativeseparationofalkaloidsfromCephaltaxusfortuninebystep-pH-gradienthigh-speedcounter-currentchromatographyZhonghuaLiu,QizhenDu,KuiwuWang,LiliXiu,GuangleiSongJournalofChromatographyA,1216(2009)4663–4667第34頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月Chemicalstructureofcephalotaxine-typealkaloids第35頁(yè),共40頁(yè)，星期六，2024年，5月TheHSCCCexperimentwasperformedwithaprocedure:ThecolumnwasfirstentirelyfilledwiththeorganicstationaryphasecontainingTFA.Thiswasfollowedbysampleinjection.Thentheaqueousphasecontaining2%NH4OH(eluterbase)waspumpedintotheinletofthecolumnataflow-rateof3.0mL/minintheheadtotailelutionmode,whiletheapparatuswasrotatedat750rpm.AfterpeaksIandIIwereelutedoutofthecolumn,themobilephasewaschangedtotheaqueousphasecontaining0.2%NH4OHuntilpeakIIIwereelutedout.Followingthis,themobilephasewaschangedtotheaqueousphasec