G -B- 7300.502-2023 飼料添加劑 第5部分：微生物 植物乳桿菌（正式版）

飼料添加劑第5部分：微生物植物乳桿菌Lactobacillusplantarum國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)本文件為GB7300《飼料添加劑》的第502部分。GB7300已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物蛋氨酸羥基類似物(GB7300.103);——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素甜菜堿鹽酸鹽(GB7300.204);——第3部分：礦物元素及其絡(luò)(螯)合物——第3部分：礦物元素及其絡(luò)(螯)合物亞硒酸鈉(GB7300.302);——第4部分：酶制劑木聚糖酶(GB7300.401);——第4部分：酶制劑纖維素酶(GB7300.403);——第5部分：微生物——第5部分：微生物植物乳桿菌(GB7300.502);——第5部分：微生物——第5部分：微生物嗜酸乳桿菌(GB7300.504);——第6部分：非蛋白氮尿素(GB7300.601);——第8部分：防腐劑、防霉劑和酸度調(diào)節(jié)劑碳酸氫鈉(GB7300.801);——第10部分：調(diào)味和誘食物質(zhì)谷氨酸鈉(GB7300.1001);——第10部分：調(diào)味和誘食物質(zhì)大蒜素(GB7300.1002)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。Ⅱ1飼料添加劑第5部分：微生物植物乳桿菌本文件規(guī)定了飼料添加劑植物乳桿菌的技術(shù)要求、采樣、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包本文件適用于以植物乳桿菌為菌種，經(jīng)液態(tài)發(fā)酵、干燥等工藝后制得的飼料添加劑產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T5917.1飼料粉碎粒度測(cè)定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T13079飼料中總砷的測(cè)定GB/T13080—2018飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測(cè)定GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定GB/T13091飼料中沙門氏菌的測(cè)定GB/T13092飼料中霉菌總數(shù)測(cè)定方法GB/T13093飼料中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定GB/T14699.1飼料采樣GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B?的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18869飼料中大腸菌群的測(cè)定GB/T28716飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。植物乳桿菌Lactobacillusplantarum屬于細(xì)菌界厚壁菌門芽孢桿菌綱乳桿菌目乳桿菌科乳桿菌屬，為革蘭氏陽(yáng)性桿菌，菌體為直或彎的24技術(shù)要求載體和稀釋劑品種來(lái)自《飼料原料目錄》或《飼料添加劑品種目錄》,并符合GB13078物質(zhì)及微生物的限量要求。中有毒有害理化指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求。植物乳桿菌活菌計(jì)數(shù)/(CFU/g)活菌數(shù)以每克產(chǎn)品中菌落形成單位(colonyformingunits,CFU)表示。衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合表2的要求。表2衛(wèi)生指標(biāo)總砷/(mg/kg)鉛/(mg/kg)汞/(mg/kg)鎘/(mg/kg)黃曲霉毒素B?/(μg/kg)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇“/(mg/kg)玉米赤霉烯酮/(mg/kg)大腸菌群/(MPN/g)霉菌總數(shù)/(CFU/g)不得檢出表中所列限量，除特別注明外，均以干物質(zhì)含量88%為基礎(chǔ)計(jì)算(大腸菌群、霉菌總數(shù)、沙門氏菌除外)此類指標(biāo)僅適用于植物性載體生產(chǎn)的產(chǎn)品。3樣品的采集應(yīng)遵循隨機(jī)性、代表性的原則，采樣過(guò)程應(yīng)符合無(wú)菌采樣要求，防止一切可能的外來(lái)5.2.1應(yīng)在同一批次產(chǎn)品中采集樣品，每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求，一般不少于5.2.2獨(dú)立包裝小于或等于500g的產(chǎn)品，取完整包裝。5.2.3獨(dú)立包裝大于500g的產(chǎn)品，應(yīng)用無(wú)菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品，放入同5.3.1應(yīng)盡快將樣品送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。5.3.2應(yīng)在運(yùn)輸過(guò)程中保持樣品完整。5.3.3應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存樣品，或采取必要措施防止樣品中微生物數(shù)量的變化。6試驗(yàn)方法6.2植物乳桿菌鑒定按附錄A規(guī)定的方法測(cè)定。按附錄B規(guī)定的方法測(cè)定。若為包被植物乳桿菌產(chǎn)品，應(yīng)提供溶解方法。按GB/T6435規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T5917.1規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T13079規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T13080—2018規(guī)定的方法測(cè)定。4按GB/T13081規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T13082規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T17480規(guī)定的方法測(cè)定。6.11脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)按GB/T30956規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T28716規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T18869規(guī)定的方法測(cè)定。按GB/T13091規(guī)定的方法測(cè)定。7檢驗(yàn)規(guī)則以相同材料、相同的生產(chǎn)工藝，經(jīng)連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，但每批產(chǎn)品不應(yīng)超過(guò)50t。型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為第4章規(guī)定的所有項(xiàng)目，在正常生產(chǎn)情況下，每半年至少進(jìn)行1次型式檢驗(yàn)。有下a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時(shí)；b)生產(chǎn)工藝、配方或主要原料來(lái)源有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；c)停產(chǎn)3個(gè)月以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)管理部門提出檢驗(yàn)要求時(shí)。56(規(guī)范性)植物乳桿菌菌種鑒別方法A.1形態(tài)鑒別蛋白胨牛肉粉吐溫80磷酸氫二鉀(K?HPO?·7H?O)乙酸鈉(CH?COONa·3H?O)檸檬酸三銨硫酸鎂(MgSO?·7H?O)硫酸錳(MnSO?·4H?O)pH將各成分加入蒸餾水中，加熱不斷攪拌，煮沸使瓊脂完全溶解，115℃高壓滅菌15min～20min。臨用時(shí)加熱使培養(yǎng)基熔化，冷卻至45℃~50℃時(shí)使用。A.1.2菌落選擇用接種針或接種環(huán)隨機(jī)挑取5個(gè)菌落。A.1.3菌體染色及形態(tài)檢驗(yàn)革蘭氏染色陽(yáng)性。菌體細(xì)胞呈圓端直桿狀，通常寬為0.9μm～1.2μm,長(zhǎng)為3.0μm～8.0μm,單A.1.4菌落形態(tài)在MRS培養(yǎng)基的瓊脂平板上菌落生長(zhǎng)形態(tài)特征為：白色、偶爾呈淺黃或深黃色，邊緣整齊、表面光A.2生理生化特征接種并培養(yǎng)24h,進(jìn)行表A.1中各項(xiàng)試驗(yàn)。7表A.1植物乳桿菌生理生化特征試驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果試驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果十十十山梨醇十十十十十一 注1:“十”表示為90%以上的菌株為陽(yáng)性反應(yīng)；“一”表示90%以上菌株為陰性反應(yīng)。A.3分子生物學(xué)鑒定采用核酸序列分析法對(duì)菌株rRNA酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)中模式菌株ATCC14917判定該菌株為植物乳桿菌(Lactobacillus基因中16SrRNA全基因序列進(jìn)行分析，與GenBank等國(guó)際核的16SrRNA基因序列進(jìn)行同源性比較，序列差異小于1%,則8(規(guī)范性)植物乳桿菌活菌計(jì)數(shù)B.1.2生理鹽水B.1.2.2制法將氯化鈉加入蒸餾水中，攪拌溶解，分裝，121℃高壓滅菌15min。在按照GB/T14699.1進(jìn)行采樣基礎(chǔ)上，稱取25.0g樣品，加入225mL無(wú)菌生理鹽水(對(duì)于包被產(chǎn)品，可采用廠家提供的方法進(jìn)行預(yù)處理)中均質(zhì)。待均勻后，再將樣品用無(wú)菌溶劑按十倍稀釋法制成不同濃度稀釋液。取1.0mL合適濃度稀釋液，注入無(wú)菌平皿，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。將融化并冷卻至45℃~50℃的MRS培養(yǎng)基，向每個(gè)培養(yǎng)皿中倒入15mL～20mL,搖勻并凝固，制