使用高效液相色譜儀會碰到的問題及操作規(guī)程

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高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分構(gòu)成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的調(diào)配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的調(diào)配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分別成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。高效液相色譜儀在使用過程中通常會碰到下面幾個問題：

1.色譜柱中的流動相見排干嗎？

不少做色譜分別試驗的人碰到過這樣的情形：不慎未適時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中全部流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，假如泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充分了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。由于泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘掉蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干枯的情況不太簡單發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉全部溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不愿定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)當(dāng)能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。

2.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問題？

假如常常需要更改流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會特別便利。PEEK管路簡單連接；PEEK接頭不僅無需工具，手擰即可固定，而且簡單調(diào)整錐箍之外的管路長度，便利與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。

使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未察看到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK碰到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。

使用PEEK接頭時則無需掛念接頭耐溶劑性能，由于接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。

3.如何防備液相泵的故障:

要保持泵的良好操作性能,必需維護系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對流動相進行過濾和脫氣.下面列出防備泵故障的幾項措施:

1）.用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑；

2）.過濾流動相和溶劑；

3）.脫氣；

4）.每天開始使用時放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；

5）.不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；

6）.定期更換墊圈；

7）.需要時加潤滑油；

8）.查閱有關(guān)泵操作手冊中的其它建議。

處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)當(dāng)能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時間的重復(fù)性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度