核酸合成 第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求-編制說明

《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制說明

《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》

標(biāo)準(zhǔn)起草組

2023年3月

1

一、工作簡(jiǎn)況

1任務(wù)來源

本項(xiàng)目根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)于2022年4月22日下達(dá)的2022年第一批推薦性

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃的通知（國(guó)標(biāo)委綜合〔2022〕17號(hào)），本項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)為20220184-T-469，

名稱為生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求，本標(biāo)準(zhǔn)等同

采用ISO20688-1：2020《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制

要求》。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC387）提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由_______________________等單位聯(lián)合起草。

2標(biāo)準(zhǔn)編制過程和主要工作過程

由核苷酸組成的單鏈線性生物聚合物被稱為“合成寡核苷酸”或“寡核苷酸”，是生

物技術(shù)必不可少的組成部分。廣泛用作聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增引物、微陣列、實(shí)時(shí)PCR

或下一代測(cè)序（NGS）捕獲探針技術(shù)中，同時(shí)是作為創(chuàng)建整個(gè)靶基因的輸入起始原料。

寡核苷酸質(zhì)量的好壞直接影響生物技術(shù)測(cè)量結(jié)果和試驗(yàn)進(jìn)程，寡核苷酸的生產(chǎn)質(zhì)量的

控制在寡核苷酸的合成中非常重要，直接決定寡核苷酸產(chǎn)品質(zhì)量的好壞。寡核苷酸的生產(chǎn)

必須對(duì)堿基數(shù)含量、分子量、堿基范圍、濃度和污染物進(jìn)行量化，以確保滿足最終的應(yīng)用

的質(zhì)量要求?？紤]到寡核苷酸用于生物活性應(yīng)用，其質(zhì)量，特別是堿基序列和構(gòu)象，將影

響適應(yīng)性或功能，例如對(duì)同源結(jié)合位點(diǎn)的分子識(shí)別、化學(xué)行為。每個(gè)最終用途應(yīng)用有不同

的具體要求。本項(xiàng)目基于我國(guó)寡核苷酸合成的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制、客戶需求等需求而建

立，擬研究建立通用的合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制通用要求標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一定義合成寡核

苷酸的常見質(zhì)量屬性，闡述寡核苷酸最終用途的量化和評(píng)估指標(biāo)。以幫助改進(jìn)寡核苷酸質(zhì)

量管理和提升寡核苷酸產(chǎn)品質(zhì)量水平，促進(jìn)和提升生物技術(shù)的測(cè)量水平，為生物安全檢測(cè)、

監(jiān)測(cè)，產(chǎn)品符合性判定提供技術(shù)支撐，提高生物安全檢測(cè)監(jiān)測(cè)水平。

預(yù)研和起草階段：2022年4月，標(biāo)準(zhǔn)起草單位根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)于2022年

4月22日下達(dá)的2022年第一批推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃的通知（國(guó)標(biāo)委發(fā)〔2022〕17號(hào)文）

和全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)生檢標(biāo)〔2022〕16號(hào)文件《關(guān)于下達(dá)2022年第一批推

薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知》立項(xiàng)文件的要求，成立了以中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院為牽

頭單位的標(biāo)準(zhǔn)起草工作組（以下簡(jiǎn)稱“工作組”），標(biāo)準(zhǔn)名稱《核酸合成第1部分：合成

3

寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》（計(jì)劃號(hào)：20220184-T-469）。2022年5月，工作組按照

GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、GB/T1.2-2020

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件起草規(guī)則》的

要求對(duì)ISO20688-1：2020標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)行翻譯校對(duì)工作。2023年3月，工作組在充分討論交

流的基礎(chǔ)上完成了標(biāo)準(zhǔn)初稿及編制說明的起草工作。2023年4月7日，完成了標(biāo)準(zhǔn)征求意

見稿及其編制說明。

二國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則

本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》

和GB/T1.2-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件

起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編制。

本項(xiàng)目等同采用ISO20688-1:2020標(biāo)準(zhǔn)，擬規(guī)定合成寡核苷酸（名義上最多250個(gè)堿基）

的生產(chǎn)和質(zhì)量控制的一般要求。給出合成寡核苷酸的一般質(zhì)量特性指標(biāo)以及評(píng)估質(zhì)量特性

指標(biāo)的常用方法。適用于寡核苷酸生產(chǎn)商的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，采購(gòu)方對(duì)合成寡核苷酸質(zhì)量

驗(yàn)收也可參考使用：

主要內(nèi)容包括：1）寡核苷酸的一般質(zhì)量管理要求；2）寡核苷酸生產(chǎn)的設(shè)施設(shè)備和環(huán)

境條件控制要求；3）寡核苷酸的生產(chǎn)工藝的要求；4）寡核苷酸的質(zhì)量控制過程要求；5）

合成寡核苷酸附加要求。

2、確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

本標(biāo)準(zhǔn)全文分為11章和5個(gè)附錄。標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容如表1所示：

表1本標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容

章條名稱內(nèi)容簡(jiǎn)要

規(guī)定了合成寡核苷酸（通常最多250個(gè)堿基）的生產(chǎn)和質(zhì)量控

1范圍制的最低要求。還描述了合成寡核苷酸的一般質(zhì)量屬性以及評(píng)

估質(zhì)量屬性的常用方法。

2規(guī)范性引用文件無。

對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、性能、純度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、寡核苷酸等術(shù)語(yǔ)進(jìn)

3術(shù)語(yǔ)和定義

行了定義。

寡核苷酸的設(shè)計(jì)和選

4不同用途的寡核苷酸合成的質(zhì)量和一致性要求不同。

擇

4

從寡核苷酸分級(jí)、質(zhì)量控制文件、質(zhì)量管理體系、人員和培訓(xùn)、

5一般質(zhì)量管理要求

安全控制方面對(duì)生產(chǎn)商做了要求。

規(guī)定來了生產(chǎn)者應(yīng)當(dāng)對(duì)可能影響合成寡核苷酸質(zhì)量的原料（包

6資源管理

括試劑、純水和輔助材料）進(jìn)行質(zhì)量控制。

7生產(chǎn)工藝要求合成寡核苷酸的過程及其要求。

合成的寡核苷酸應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)其指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，如與預(yù)

8質(zhì)量控制過程要求期用途有關(guān)的特性、純度、雜質(zhì)、定量、其摩爾質(zhì)量和/或堿基

長(zhǎng)度、退火溫度、報(bào)告等。

合成寡核苷酸的附加

9合成RNA的一些附加要求。

要求

10附錄A規(guī)范性附錄，過程檢查表

裝置和設(shè)備清單及其控制標(biāo)準(zhǔn)，適合生產(chǎn)合成寡核苷酸的設(shè)備

11附錄B

和儀器示例

12附錄C摩爾質(zhì)量和摩爾數(shù)的計(jì)算

13附錄D采用質(zhì)量分析法驗(yàn)證寡核苷酸序列

14附錄E采用經(jīng)過認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)測(cè)量?jī)x器的精度進(jìn)行控制-示例

3、主要技術(shù)差異

本項(xiàng)目等同采用ISO20688-1:2020《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的

生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》，與ISO20688-1:2020無技術(shù)差異。

4、標(biāo)準(zhǔn)解決的主要問題

隨著合成生物技術(shù)向工業(yè)領(lǐng)域的快速滲透，生物能源、生物化工和生物醫(yī)藥等應(yīng)用

領(lǐng)域均提出了日益迫切的大規(guī)模寡核苷酸合成需求。工業(yè)化寡核苷酸合成的完整流程從接

收序列開始到交付產(chǎn)品結(jié)束，是一個(gè)涉及生物信息學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)、自動(dòng)化等多學(xué)

科的過程，由各個(gè)學(xué)科力量組成的團(tuán)隊(duì)需要齊心協(xié)力，將整個(gè)工作流程從小規(guī)模制備轉(zhuǎn)變

為工業(yè)高通量制造。

實(shí)現(xiàn)高通量并行和高質(zhì)量規(guī)?；a(chǎn)的基礎(chǔ)是標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化。標(biāo)準(zhǔn)化涉及實(shí)驗(yàn)步

驟、試劑耗材、反應(yīng)條件等多個(gè)方面。本項(xiàng)目研究擬解決的關(guān)鍵問題是：為降低自動(dòng)化整

合門檻，需對(duì)生產(chǎn)流程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分解，分解為可定義、可管理、可獨(dú)立實(shí)施和控制、可

重復(fù)、小而明確的操作步驟。工業(yè)規(guī)模和實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的寡核苷酸合成之間的差異，不僅僅

體現(xiàn)在高通量合成技術(shù)的迭代和高性能合成裝備的開發(fā)與應(yīng)用，更重要的是需要針對(duì)工藝

規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)技術(shù)進(jìn)行合理的分解、整合和運(yùn)用，對(duì)每個(gè)操作步驟進(jìn)行調(diào)整，進(jìn)而達(dá)到

對(duì)合成寡核苷酸生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化。

5

三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）情況

現(xiàn)今，絕大部分短鏈寡核苷酸是利用固相亞磷酰胺化學(xué)法進(jìn)行合成；其具體過程由4

步循環(huán)組成，分別為：脫保護(hù)、偶聯(lián)、氧化和蓋帽；如下圖所示每一個(gè)循環(huán)生成一個(gè)新的

寡核苷酸。

圖片來源：THERAPEUTICOLIGONUCLEOTIDES,IMPURITIES,DEGRADANTS,ANDTHEIRCHARACTERIZATIONBY

MASSSPECTROMETRY

本項(xiàng)目等同采用ISO20688-1:2020標(biāo)準(zhǔn)，擬規(guī)定合成寡核苷酸（名義上最多250個(gè)堿

基）的生產(chǎn)和質(zhì)量控制的一般要求。給出合成寡核苷酸的一般質(zhì)量特性指標(biāo)以及評(píng)估質(zhì)量

特性指標(biāo)的常用方法。適用于寡核苷酸生產(chǎn)商的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，采購(gòu)方對(duì)合成寡核苷酸

質(zhì)量驗(yàn)收也可參考使用。本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。本項(xiàng)

目與現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)沒有沖突，配套使用。項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)對(duì)主要技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行了試驗(yàn)驗(yàn)證，以

下列出了部分技術(shù)指標(biāo)的試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果。

3.1應(yīng)用于編碼化合物、二代測(cè)序建庫(kù)等領(lǐng)域，長(zhǎng)度范圍在9nt–17nt的單鏈DNA的驗(yàn)

證

主要驗(yàn)證指標(biāo)包括：總量、堿基準(zhǔn)確度、純度等指標(biāo)。

3.1.1關(guān)鍵指標(biāo)概述

鑒于DNA編碼化合物庫(kù)的市場(chǎng)需求與標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的不匹配，項(xiàng)目組在前期的研究基礎(chǔ)

上，結(jié)合對(duì)輝瑞、羅氏、GSK、阿斯利康、先導(dǎo)藥業(yè)、華大基因等在內(nèi)的全球領(lǐng)先的應(yīng)用

公司，通用生物、先導(dǎo)藥業(yè)、金唯智、百力格等磷酸化標(biāo)記核酸合成公司調(diào)研研討。主要

6

內(nèi)容論據(jù)如下：

3.1.1.1磷酸化標(biāo)記核酸的總量檢測(cè)

5’磷酸化標(biāo)記核酸上下鏈，可通過堿基互補(bǔ)原則在高溫下變性形成雙鏈，上下鏈比例

對(duì)雙鏈的形成至關(guān)重要。若上下鏈濃度差異較大，會(huì)導(dǎo)致剩余單鏈無法互補(bǔ)配對(duì)，雙鏈濃

度較低；因此，對(duì)5’磷酸化標(biāo)記核酸進(jìn)行總量檢測(cè)具有重要意義。然而，合成的磷酸化標(biāo)

記核酸重量極輕難以稱量。因核酸在260nm處存在特征吸收峰，利用朗伯比爾定律可對(duì)

合成的磷酸化標(biāo)記核酸進(jìn)行濃度測(cè)定。

3.1.1.2磷酸化標(biāo)記核酸的相對(duì)分子質(zhì)量的檢測(cè)

定制序列的磷酸化標(biāo)記核酸，用于構(gòu)建DNA編碼化合物庫(kù)，在高通量測(cè)序技術(shù)下快

速高效篩選出先導(dǎo)化合物。近十年來，通過化學(xué)合成來獲得高通量磷酸化標(biāo)記核酸成為主

流手段；因此，合成的定制的磷酸化標(biāo)記核酸序列的堿基準(zhǔn)確度、堿基缺失率是DNA編

碼化合物庫(kù)的基礎(chǔ)。采用ESI源電離噴霧技術(shù)的液質(zhì)聯(lián)用儀可通過質(zhì)核比分離測(cè)得定制序

列的相對(duì)分子量，從而快速、高效、準(zhǔn)確地判斷定制的磷酸化標(biāo)記核酸序列的堿基準(zhǔn)確度、

堿基缺失率。

1）相對(duì)分子質(zhì)量的理論計(jì)算：

H2G2-00865-1的序列為ATCAACACGGT，5＇為磷酸化標(biāo)記，其分子量計(jì)算如下：

M=（#dA×313.20）+（#dC×289.17）+（#dG×329.9）+（#dT×304.18）+Pho-62

=（4×313.20）+（3×289.17）+（2×329.9）+（2×304.18）+80-62=3408.47

2）質(zhì)譜測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量

采用ESI源電離噴霧技術(shù)，負(fù)離子模式將樣品轉(zhuǎn)化為運(yùn)動(dòng)的帶電氣態(tài)離子碎皮，按質(zhì)

荷比（m/z）大小分離記錄，通過換算測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量。

流動(dòng)相配制參照取2μL1mmol/L磷酸化標(biāo)記引物原液+100μL水，置于進(jìn)樣器中，設(shè)

置盡量20μL。點(diǎn)擊儀器開始按鈕進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)，并通過質(zhì)譜分析軟件對(duì)目標(biāo)引物分子量測(cè)

量結(jié)果進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果如表2：

表2磷酸化標(biāo)記核酸質(zhì)譜數(shù)據(jù)

序理論分子實(shí)測(cè)分子平均分子

樣本名稱序列5＇修飾相對(duì)誤差

號(hào)量量量

A1H2G2-00865-1ATCAACACGGTPho3408.473406.30.064%

3405.5±

A2H2G2-00865-1ATCAACACGGTPho3408.473405.90.075%

0.80

A3H2G2-00865-1ATCAACACGGTPho3408.473404.40.120%

示例：H2G2-00865-1（DSL級(jí)）的MASS結(jié)果如下：

7

結(jié)論：質(zhì)譜實(shí)測(cè)相對(duì)分子質(zhì)量與理論相對(duì)分子質(zhì)量的相對(duì)誤差（DSL級(jí)）≤0.05%，

符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

3.1.1.3磷酸化標(biāo)記核酸的純度檢測(cè)

對(duì)于定制序列的磷酸化標(biāo)記核酸而言，相對(duì)分子量檢測(cè)是定性檢測(cè)，用于判斷堿基準(zhǔn)

確度；而純度檢測(cè)是定量檢測(cè)，用于判斷合成的磷酸化標(biāo)記核酸中含有百分之幾的目標(biāo)序

列。因此，磷酸化標(biāo)記核酸的純度檢測(cè)也是DNA編碼化合物庫(kù)建庫(kù)實(shí)驗(yàn)的重要因素?？?/p>

采用高效液相色譜儀、毛細(xì)管電泳/平板電泳、質(zhì)譜、測(cè)序等方法對(duì)磷酸化標(biāo)記核酸的純度

進(jìn)行檢測(cè)，可有效判斷并控制磷酸化標(biāo)記核酸的純度，為DNA編碼化合物庫(kù)建庫(kù)實(shí)驗(yàn)建

立前提條件。

采用液相色譜-質(zhì)譜法，ESI源電離噴霧技術(shù)，負(fù)離子模式將樣品轉(zhuǎn)化為運(yùn)動(dòng)的帶電氣

態(tài)離子碎片，按質(zhì)荷比（m/z）大小分離并記錄。計(jì)算目標(biāo)峰面積占所有峰面積的比值得

出純度，見表3。

表3磷酸化標(biāo)記核酸質(zhì)譜數(shù)據(jù)

序號(hào)樣本名稱理論分子量實(shí)測(cè)分子量相對(duì)誤差質(zhì)譜純度

A1H2G2-00865-13408.473406.30.064%94.34%

A2H2G2-00865-13408.473405.90.075%94.27%

A3H2G2-00865-13408.473404.40.120%94.31%

示例：H2G2-00865-1（DSL級(jí)）的MASS結(jié)果如下：

8

結(jié)論：質(zhì)譜純度（DSL級(jí)）＞85%，符合指標(biāo)要求。

3.1.2關(guān)鍵指標(biāo)、方法和要求的建立

根據(jù)市場(chǎng)需求及與相關(guān)利益方的討論，在前期研究和相關(guān)利益方廣泛調(diào)研溝通的基礎(chǔ)

上，經(jīng)過反復(fù)討論研究，對(duì)能體現(xiàn)磷酸化標(biāo)記核酸的技術(shù)參數(shù)和指標(biāo)、表征檢測(cè)方法及相

關(guān)要求進(jìn)行了確定。項(xiàng)目擬綜合紫外可見分光光度、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、基因

測(cè)序法等多種生化檢測(cè)方法，各方法均為現(xiàn)行主流方法，項(xiàng)目組對(duì)各方法進(jìn)行方法學(xué)研究，

表4列出了經(jīng)討論研究后的磷酸化標(biāo)記核酸的檢測(cè)方法、技術(shù)參數(shù)和技術(shù)要求。

表4磷酸化標(biāo)記核酸測(cè)定指標(biāo)及技術(shù)要求

待測(cè)樣品指標(biāo)測(cè)定方法/儀器要求

總量（mmol/L）紫外分光光度計(jì)1.00mmol/L±0.15mmol/L

LC-MS偏差≤0.05%

堿基準(zhǔn)確度

基因測(cè)序儀與定制序列一致

OD260/OD280：1.7～1.9

紫外吸收強(qiáng)度紫外分光光度計(jì)

OD/OD>1.7

純度260230

HPLC純度HPLC儀≥85%

磷酸化標(biāo)記

相對(duì)分子質(zhì)量LC-MS≥85%

核酸

堿基缺失完全匹配度基因測(cè)序＜5%

率相對(duì)分子質(zhì)量LC-MS偏差≤0.05%

紫外吸收強(qiáng)度分光光度計(jì)±15%(不含等于)

上下鏈濃

質(zhì)譜峰強(qiáng)度比LC-MS＞20%

度差

化合物間濃度差紫外分光光度計(jì)偏差≤25%

脫磷酸化

相對(duì)分子質(zhì)量LC-MS偏差＜5%

產(chǎn)物

3.2應(yīng)用于基因擴(kuò)增、文庫(kù)構(gòu)建等領(lǐng)域，長(zhǎng)度范圍原則上在2個(gè)至30個(gè)核苷酸的引物探針

的驗(yàn)證

3.2.1廠家調(diào)研

通過查閱國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品說明書、分析報(bào)告（COA報(bào)告）以及對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)分

9

析，對(duì)引物、探針以及相關(guān)試劑盒等的參數(shù)和指標(biāo)進(jìn)行了調(diào)研。發(fā)現(xiàn)各個(gè)廠家合成的引物

探針的各參數(shù)相差不大，基本要通過質(zhì)譜檢測(cè)。但國(guó)內(nèi)對(duì)引物探針還沒有一個(gè)公認(rèn)的統(tǒng)一

評(píng)價(jià)方法，尚無技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)可以依據(jù)，對(duì)指標(biāo)要求尚不明確，各生產(chǎn)商根據(jù)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)和品

牌宣傳的需要，在參數(shù)和指標(biāo)上各成系統(tǒng)，對(duì)特異性等關(guān)鍵指標(biāo)并未進(jìn)行標(biāo)識(shí)。國(guó)內(nèi)外有

許多公司如華大基因、上海生工、TAKARA、Invitrogen公司等都能合成引物探針，有一

套比較完善、嚴(yán)格的產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控體系，會(huì)給用戶出具合成報(bào)告單，報(bào)告中會(huì)明確列出各

項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)。但各合成商隨產(chǎn)品的說明書中規(guī)定的參數(shù)也不統(tǒng)一，使得產(chǎn)品質(zhì)量狀況參差

不齊，缺乏一個(gè)統(tǒng)一判定標(biāo)準(zhǔn)，因此，為了規(guī)范引物探針的質(zhì)量以及維護(hù)市場(chǎng)秩序很有必

要制定引物探針測(cè)定相關(guān)的通用標(biāo)準(zhǔn)。

3.2.2引物探針質(zhì)量指標(biāo)的建立

項(xiàng)目組查閱了國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、分析報(bào)告（COA報(bào)告），分別咨詢了上海生工、

寶生物、invitrogen公司、金唯智、華大基因等主要引物探針合成商，并進(jìn)行了有效溝通交

流，對(duì)各個(gè)廠商合成的報(bào)告單、產(chǎn)品說明書、質(zhì)檢報(bào)告中引物探針的參數(shù)和指標(biāo)及相關(guān)信

息進(jìn)行了匯總整理研究，合成產(chǎn)品的合成報(bào)告單上信息包括30余種，各廠商標(biāo)注都不同，

知名廠商和部分小廠商標(biāo)注信息差異較大，詳見表5。除上海生工發(fā)布了企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以外，

未見統(tǒng)一的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范。從匯總整理研究結(jié)果可知，引物探針信息大致可以分為四類：

一是基本信息，二是技術(shù)信息，三是特殊信息，四是其他信息。基本信息包括：OrderNo.、

LotNo.、Date、PrimerName等；技術(shù)信息包括：Sequence（5′to3′）、Purification、質(zhì)譜報(bào)

告等；特殊信息主要指修飾信息；其他信息是個(gè)別廠商標(biāo)注的一些相關(guān)信息。項(xiàng)目組根據(jù)

使用說明書和咨詢交流結(jié)果，同時(shí)對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)分析，綜合實(shí)驗(yàn)效果，研究確立了核酸

引物探針質(zhì)量控制技術(shù)關(guān)鍵指標(biāo)參數(shù)，包括Sequence（5′to3′）、Purification、Modification

等18個(gè)指標(biāo)，詳見表6。

表5主要引物探針合成廠商合成報(bào)告單信息一覽表

序信息上海華大成都

報(bào)告信息上海生工invitrogen金唯智寶生物

號(hào)類別基康基因擎科

1OrderNo.√√√√√√√

2LotNo.√√√√√√√

3Date√√√√√√

基本

4PrimerName√√√√√√√

信息

5PrimerLength√√√√√

6OD′s√√√√√√

7ug′s/OD√√√

10

8ug′s√√√√√

9nmoles/OD√√√√

10nmoles√√√√

MW（ug/umole）/

11√√√√√√√

（g/mole）

12Package√√√√√√

13保存信息√√√√

14Sequence（5′to3′）√√√√√√√

15%GC√√√√√√√

16Tm√√√√√√

技術(shù)

17Tm（1MNa+）√

信息

18Tm（50mMNa+）√

19Purification√√√√√√

20配制方法及相應(yīng)濃度√√√√√√

21Modification√√√√√√

22ModificationMW√

23特殊AggregateMW√√

信息MillimolarExtincion

24√

Coeff.（OD/umoles）

25CouplingEff.√√

26ODperVial√

ScaleofSynthesis

27其他√√

（nmole）

信息

28Basecomposition√

29nmoles/tube√

表6核酸引物探針關(guān)鍵指標(biāo)一覽表

序號(hào)指標(biāo)類型關(guān)鍵指標(biāo)測(cè)試方法

1OrderNo./

2LotNo./

3Date/

4基本指標(biāo)PrimerName/

5PrimerLength直接計(jì)算

6OD＇s分光光度法

7ug＇s根據(jù)OD數(shù)計(jì)算得出

11

8nmoles根據(jù)質(zhì)量數(shù)和相對(duì)分子量計(jì)算得出

9MW(ug/umole)/(g/mole)公式計(jì)算得出，MS測(cè)定驗(yàn)證

10Package/

11保存信息/

12Sequence(5＇-3＇)根據(jù)訂單和相對(duì)分子量推算

13%GC根據(jù)序列計(jì)算得出

14技術(shù)指標(biāo)Tm根據(jù)公式計(jì)算得出或檢測(cè)Na+濃度推算得出

15PurificationPAGE,HPLC測(cè)定

16配制方法及相應(yīng)濃度/

17特殊指標(biāo)Modification吸收光譜法測(cè)定

18其他指標(biāo)補(bǔ)充指標(biāo)/

3.2.3引物探針質(zhì)量指標(biāo)的驗(yàn)證

3.2.3.1引物探針的相對(duì)分子質(zhì)量的檢測(cè)

1）相對(duì)分子質(zhì)量的理論計(jì)算：

MON863上游引物序列為GTAGGATCGGAAAGCTTGGTAC，其分子量計(jì)算如下：

M=（#dA×313.20）+（#dC×289.17）+（#dG×329.2）+（#dT×304.18）-62+1

=（6×313.20）+（3×289.17）+（8×329.2）+（5×304.18）-62+1=6840.21

MON863探針序列為TGAACACCCATCCGAACAAGTAGGGTCA，5'修飾6-FAM，3'修飾BHQ1，其

分子量計(jì)算如下：

M=（#dA×313.20）+（#dC×289.17）+（#dG×329.2）+（#dT×304.18）+（6-FAM）+BHQ1-62+1

=（10×313.20）+（8×289.17）+（6×329.2）+（4×304.18）+537.5+554.60-62+1=9668.38

2）質(zhì)譜測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量

采用ESI源電離噴霧技術(shù)，負(fù)離子模式下將樣品轉(zhuǎn)化為運(yùn)動(dòng)的帶電氣態(tài)離子碎片，與

磁場(chǎng)中按質(zhì)核比（m/z）大小分離并記錄，通過換算測(cè)得相對(duì)分子量。測(cè)定條件如下：流

動(dòng)相配制參見表7。

表7流動(dòng)相A、流動(dòng)相B配制

流動(dòng)相A0.075%HFIPA0.0375%DIEA10μmol/LEDTA

990mL一級(jí)水

（以1L計(jì)算）（750μL）（375μL）10mL

流動(dòng)相B0.075%HFIPA0.0375%DIEA10μmol/LEDTA800mLACN

（以1L計(jì)算）（750μL）（375μL）10mL一級(jí)水190mL

柱溫：40℃；

色譜柱：XBridgeOligonucleotideBEHC18Column,130?,2.5μm,4.6mmX50mm；

12

流速：0.3mL/min；

梯度洗脫：流動(dòng)相B從5%到30%，15min；

質(zhì)譜條件：采用Agilent1200-G6210液質(zhì)聯(lián)用飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（TOF）；

毛細(xì)管電壓：4000V；

霧化氣壓力：40psi；

霧化氣溫度：350℃；

碎裂電壓：150V；

霧化氣：氮?dú)狻?/p>

3）測(cè)定結(jié)果

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求及引物探針合成原理，測(cè)得的引物探針相對(duì)分子量（MW）與定制序列

MW值作比較，相對(duì)誤差在0.05%內(nèi)視為合格產(chǎn)品。即采用測(cè)得的相對(duì)分子量與理論的相

對(duì)分子量相對(duì)誤差應(yīng)小于等于0.05%。有修飾基團(tuán)的應(yīng)考慮修飾基團(tuán)相對(duì)分子量。

檢測(cè)結(jié)果如表8，質(zhì)譜圖見圖1-2：

表8引物探針質(zhì)譜數(shù)據(jù)

理論分實(shí)測(cè)分相對(duì)誤

序號(hào)樣本名稱序列修飾

子量子量差

MON863

A1GTAGGATCGGAAAGCTTGGTAC/6840.216836.50.05%

-F

MON863TGAACACCCATCCGAACAAGTAG5'6-FAM，

A29668.389665.10.03%

-PGGTCA3'BHQ1

13

圖1引物MON863-F的質(zhì)譜圖

圖2探針MON863-P的質(zhì)譜圖

結(jié)論：質(zhì)譜實(shí)測(cè)相對(duì)分子質(zhì)量與理論相對(duì)分子質(zhì)量的相對(duì)誤差≤0.05%，符合標(biāo)準(zhǔn)要

求。

3.2.3.2引物探針的PCR擴(kuò)增結(jié)果

使用合成的引物探針MON863（FAM-BHQ1）進(jìn)行qPCR擴(kuò)增，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。從圖

3和圖4中可以看出，擴(kuò)增效率在95%以上，線性R2=1.000，合成的引物探針符合要求。

14

圖3qPCR擴(kuò)增曲線

圖4qPCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線

15

四、標(biāo)準(zhǔn)中涉及專利的情況

本標(biāo)準(zhǔn)不涉及專利問題。

五、預(yù)期達(dá)到的社會(huì)效益、對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作用等情況

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)、基因芯片技術(shù)等已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于生物學(xué)各個(gè)基礎(chǔ)研究

領(lǐng)域和輔助臨床診斷。其中，PCR技術(shù)是各生物實(shí)驗(yàn)室的通用基礎(chǔ)技術(shù)，特別是熒光定量

PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、物種鑒定等；基于核酸雜交技術(shù)的基因芯片平臺(tái)，具有

通量高和應(yīng)用群體大的特點(diǎn)，已形成巨大的生物產(chǎn)業(yè)，成為近20年來生物學(xué)領(lǐng)域的最強(qiáng)

有力研究工具之一；核酸捕獲芯片可快速捕獲人類全外顯子區(qū)域或其他數(shù)M長(zhǎng)度堿基，其

正與高通量測(cè)序技術(shù)結(jié)合繼續(xù)推動(dòng)著生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展；SNP芯片，特別是人類SNP

芯片已成為全基因組關(guān)聯(lián)分析研究糖尿病腫瘤等復(fù)雜疾病致病基因強(qiáng)大工具。因此，PCR

技術(shù)和基因芯片技術(shù)等分子技術(shù)的作用和重要性是毋庸置疑的。

寡核苷酸是用于PCR反應(yīng)、測(cè)序、基因芯片等技術(shù)的關(guān)鍵、核心物質(zhì)，其質(zhì)量的好壞

直接影響實(shí)驗(yàn)和診斷結(jié)果。雖然，目前可通過基于多序列比對(duì)方式來設(shè)計(jì)合適的候選寡核

苷酸，能夠減少引物與模板DNA的錯(cuò)誤匹配，提高反應(yīng)的有效性。但應(yīng)用廣泛的染色體

定位，組織原位雜交，Northern雜交，Southern雜交等技術(shù)，由于單個(gè)樣品操作數(shù)目少，

初始樣品多樣化，目標(biāo)片段特性多樣化等原因，目前市場(chǎng)上只有引物探針試劑盒產(chǎn)品，沒

有關(guān)于寡核苷酸質(zhì)量評(píng)價(jià)和檢測(cè)方法相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，更未形成合成寡核苷酸的工藝要求，也未

產(chǎn)生成熟的標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)業(yè)模式。而已形成巨大生物產(chǎn)業(yè)的基因平臺(tái)，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)，基本被

幾個(gè)大的國(guó)外公司壟斷，各公司都有自己的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法，尚處于無標(biāo)可依狀

態(tài)。寡核苷酸生產(chǎn)和質(zhì)量控制的研究有利于提高寡核苷酸質(zhì)量，促進(jìn)分子診斷原料國(guó)產(chǎn)化

和標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程，促進(jìn)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，在國(guó)際市場(chǎng)具有一定的競(jìng)爭(zhēng)力。

六、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平

的對(duì)比情況，或與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況

本標(biāo)準(zhǔn)等同采用ISO20688-1:2020《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的

生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》，與ISO20688-1:2020無技術(shù)差異。

16

七、在標(biāo)準(zhǔn)體系中的位置，與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)，特別是強(qiáng)制性標(biāo)

準(zhǔn)的協(xié)調(diào)性

本專業(yè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)體系框架如圖：

本標(biāo)準(zhǔn)屬于生化檢測(cè)專用方法標(biāo)準(zhǔn)中33-00的生物分析方法類的33-01核酸檢測(cè)小

類。

本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。

本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)沒有沖突，配套使用。

八、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)

無重大分歧意見。

17

九、標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)的建議

建議本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

十、貫徹國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議（包括組織措施、技術(shù)措施、過渡辦法

等內(nèi)容）

1）首先應(yīng)在實(shí)施前保證標(biāo)準(zhǔn)文本的充足供應(yīng)，使每個(gè)寡核苷酸生產(chǎn)廠商、研究單位

以及檢測(cè)機(jī)構(gòu)等都能及時(shí)獲得本標(biāo)準(zhǔn)文本，這是保證新標(biāo)準(zhǔn)貫徹實(shí)施的基礎(chǔ)。

2）本次制定的標(biāo)準(zhǔn)，不僅與寡核苷酸相關(guān)產(chǎn)品研制企業(yè)有關(guān)，而且與研究院所、檢

測(cè)機(jī)構(gòu)、醫(yī)藥生產(chǎn)等相關(guān)。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)使用過程中容易出現(xiàn)的疑問，起草單位有義務(wù)進(jìn)行

必要的解釋。

3）可以針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)使用的不同對(duì)象，如生產(chǎn)企業(yè)、質(zhì)量監(jiān)管等相關(guān)部門，有側(cè)重點(diǎn)地

進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的培訓(xùn)和宣貫，以保證標(biāo)準(zhǔn)的有效貫徹執(zhí)行。

4）建議本標(biāo)準(zhǔn)批準(zhǔn)發(fā)布即實(shí)施。

十一、廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議

無。

十二、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng)。

無。

《核酸靶序列定量qPCR法和dPCR法的性能評(píng)價(jià)要求》標(biāo)準(zhǔn)起草組

2023年4月

18

目錄

一、工作簡(jiǎn)況3

二國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容4

三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）情況；5

四、標(biāo)準(zhǔn)中涉及專利的情況16

五、預(yù)期達(dá)到的社會(huì)效益、對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作用等情況16

六、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比情況，或與測(cè)試的國(guó)

外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況16

七、在標(biāo)準(zhǔn)體系中的位置，與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)，特別是強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)性17

八、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)17

九、標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)的建議18

十、貫徹國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議（包括組織措施、技術(shù)措施、過渡辦法等內(nèi)容）18

十一、廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議18

十二、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng)。18

2

一、工作簡(jiǎn)況

1任務(wù)來源

本項(xiàng)目根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)于2022年4月22日下達(dá)的2022年第一批推薦性

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃的通知（國(guó)標(biāo)委綜合〔2022〕17號(hào)），本項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)為20220184-T-469，

名稱為生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求，本標(biāo)準(zhǔn)等同

采用ISO20688-1：2020《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制

要求》。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC387）提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由_______________________等單位聯(lián)合起草。

2標(biāo)準(zhǔn)編制過程和主要工作過程

由核苷酸組成的單鏈線性生物聚合物被稱為“合成寡核苷酸”或“寡核苷酸”，是生

物技術(shù)必不可少的組成部分。廣泛用作聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增引物、微陣列、實(shí)時(shí)PCR

或下一代測(cè)序（NGS）捕獲探針技術(shù)中，同時(shí)是作為創(chuàng)建整個(gè)靶基因的輸入起始原料。

寡核苷酸質(zhì)量的好壞直接影響生物技術(shù)測(cè)量結(jié)果和試驗(yàn)進(jìn)程，寡核苷酸的生產(chǎn)質(zhì)量的

控制在寡核苷酸的合成中非常重要，直接決定寡核苷酸產(chǎn)品質(zhì)量的好壞。寡核苷酸的生產(chǎn)

必須對(duì)堿基數(shù)含量、分子量、堿基范圍、濃度和污染物進(jìn)行量化，以確保滿足最終的應(yīng)用

的質(zhì)量要求。考慮到寡核苷酸用于生物活性應(yīng)用，其質(zhì)量，特別是堿基序列和構(gòu)象，將影

響適應(yīng)性或功能，例如對(duì)同源結(jié)合位點(diǎn)的分子識(shí)別、化學(xué)行為。每個(gè)最終用途應(yīng)用有不同

的具體要求。本項(xiàng)目基于我國(guó)寡核苷酸合成的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制、客戶需求等需求而建

立，擬研究建立通用的合成寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制通用要求標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一定義合成寡核

苷酸的常見質(zhì)量屬性，闡述寡核苷酸最終用途的量化和評(píng)估指標(biāo)。以幫助改進(jìn)寡核苷酸質(zhì)

量管理和提升寡核苷酸產(chǎn)品質(zhì)量水平，促進(jìn)和提升生物技術(shù)的測(cè)量水平，為生物安全檢測(cè)、

監(jiān)測(cè)，產(chǎn)品符合性判定提供技術(shù)支撐，提高生物安全檢測(cè)監(jiān)測(cè)水平。

預(yù)研和起草階段：2022年4月，標(biāo)準(zhǔn)起草單位根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)于2022年

4月22日下達(dá)的2022年第一批推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃的通知（國(guó)標(biāo)委發(fā)〔2022〕17號(hào)文）

和全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)生檢標(biāo)〔2022〕16號(hào)文件《關(guān)于下達(dá)2022年第一批推

薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知》立項(xiàng)文件的要求，成立了以中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院為牽

頭單位的標(biāo)準(zhǔn)起草工作組（以下簡(jiǎn)稱“工作組”），標(biāo)準(zhǔn)名稱《核酸合成第1部分：合成

3

寡核苷酸的生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》（計(jì)劃號(hào)：20220184-T-469）。2022年5月，工作組按照

GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、GB/T1.2-2020

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件起草規(guī)則》的

要求對(duì)ISO20688-1：2020標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)行翻譯校對(duì)工作。2023年3月，工作組在充分討論交

流的基礎(chǔ)上完成了標(biāo)準(zhǔn)初稿及編制說明的起草工作。2023年4月7日，完成了標(biāo)準(zhǔn)征求意

見稿及其編制說明。

二國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則

本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》

和GB/T1.2-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件

起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編制。

本項(xiàng)目等同采用ISO20688-1:2020標(biāo)準(zhǔn)，擬規(guī)定合成寡核苷酸（名義上最多250個(gè)堿基）

的生產(chǎn)和質(zhì)量控制的一般要求。給出合成寡核苷酸的一般質(zhì)量特性指標(biāo)以及評(píng)估質(zhì)量特性

指標(biāo)的常用方法。適用于寡核苷酸生產(chǎn)商的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，采購(gòu)方對(duì)合成寡核苷酸質(zhì)量

驗(yàn)收也可參考使用：

主要內(nèi)容包括：1）寡核苷酸的一般質(zhì)量管理要求；2）寡核苷酸生產(chǎn)的設(shè)施設(shè)備和環(huán)

境條件控制要求；3）寡核苷酸的生產(chǎn)工藝的要求；4）寡核苷酸的質(zhì)量控制過程要求；5）

合成寡核苷酸附加要求。

2、確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

本標(biāo)準(zhǔn)全文分為11章和5個(gè)附錄。標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容如表1所示：

表1本標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容

章條名稱內(nèi)容簡(jiǎn)要

規(guī)定了合成寡核苷酸（通常最多250個(gè)堿基）的生產(chǎn)和質(zhì)量控

1范圍制的最低要求。還描述了合成寡核苷酸的一般質(zhì)量屬性以及評(píng)

估質(zhì)量屬性的常用方法。

2規(guī)范性引用文件無。

對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、性能、純度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、寡核苷酸等術(shù)語(yǔ)進(jìn)

3術(shù)語(yǔ)和定義

行了定義。

寡核苷酸的設(shè)計(jì)和選

4不同用途的寡核苷酸合成的質(zhì)量和一致性要求不同。

擇

4

從寡核苷酸分級(jí)、質(zhì)量控制文件、質(zhì)量管理體系、人員和培訓(xùn)、

5一般質(zhì)量管理要求

安全控制方面對(duì)生產(chǎn)商做了要求。

規(guī)定來了生產(chǎn)者應(yīng)當(dāng)對(duì)可能影響合成寡核苷酸質(zhì)量的原料（包

6資源管理

括試劑、純水和輔助材料）進(jìn)行質(zhì)量控制。

7生產(chǎn)工藝要求合成寡核苷酸的過程及其要求。

合成的寡核苷酸應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)其指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，如與預(yù)

8質(zhì)量控制過程要求期用途有關(guān)的特性、純度、雜質(zhì)、定量、其摩爾質(zhì)量和/或堿基

長(zhǎng)度、退火溫度、報(bào)告等。

合成寡核苷酸的附加

9合成RNA的一些附加要求。

要求

10附錄A規(guī)范性附錄，過程檢查表

裝置和設(shè)備清單及其控制標(biāo)準(zhǔn)，適合生產(chǎn)合成寡核苷酸的設(shè)備

11附錄B

和儀器示例

12附錄C摩爾質(zhì)量和摩爾數(shù)的計(jì)算

13附錄D采用質(zhì)量分析法驗(yàn)證寡核苷酸序列

14附錄E采用經(jīng)過認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)測(cè)量?jī)x器的精度進(jìn)行控制-示例

3、主要技術(shù)差異

本項(xiàng)目等同采用ISO20688-1:2020《生物技術(shù)核酸合成第1部分：合成寡核苷酸的

生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求》，與ISO20688-1:2020無技術(shù)差異。

4、標(biāo)準(zhǔn)解決的主要問題

隨著合成生物技術(shù)向工業(yè)領(lǐng)域的快速滲透，生物能源、生物化工和生物醫(yī)藥等應(yīng)用

領(lǐng)域均提出了日益迫切的大規(guī)模寡核苷酸合成需求。工業(yè)化寡核苷酸合成的完整流程從接

收序列開始到交付產(chǎn)品結(jié)束，是一個(gè)涉及生物信息學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)、自動(dòng)化等多學(xué)

科的過程，由各個(gè)學(xué)科力量組成的團(tuán)隊(duì)需要齊心協(xié)力，將整個(gè)工作流程從小規(guī)模制備轉(zhuǎn)變

為工業(yè)高通量制造。

實(shí)現(xiàn)高通量并行和高質(zhì)量規(guī)?；a(chǎn)的基礎(chǔ)是標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化。標(biāo)準(zhǔn)化涉及實(shí)驗(yàn)步

驟、試劑耗材、反應(yīng)條件等多個(gè)方面。本項(xiàng)目研究擬解決的關(guān)鍵