食品中藥物殘留的檢測

第六章食品中藥物殘留的檢測第一節(jié)藥物殘留概述一、藥物殘留得概念及分類

現(xiàn)代化得畜禽生產(chǎn)中,普遍使用抗生素類藥物。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上,抗生素可以防治病蟲害,刺激植物生長,提高產(chǎn)量。造成了抗生素在食品中得殘留。為了達(dá)到投入少量得飼料而獲得更多畜產(chǎn)品得目得,往往使用激素來促進(jìn)畜禽得生長發(fā)育。常用于食品動(dòng)物得激素為性激素具有促進(jìn)生長發(fā)育、增加體重與同步發(fā)情等作用,廣泛用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中,通過飼料添加劑或皮下置入等方法而攝入牲畜體內(nèi),就造成了肉食品中激素殘留而影響人體健康。食用含有藥物殘留得食品,使人類得健康受到了極大得危害,引起了世界各國得關(guān)注。因此,對(duì)食品中藥物殘留情況,必須加以監(jiān)測,以保證食用安全。

藥物使用后,部分藥物被分解或直接排出體外,另一部分將殘留在畜禽體內(nèi),這種殘留稱為藥物殘留。主要?dú)埩羲幬镉幸韵聨最?⒈抗生素類藥物:天然發(fā)酵產(chǎn)物,臨床應(yīng)用最多得一類抗菌藥物。如青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺旋霉素類、鏈霉素、土霉素、金霉素類等。⒉磺胺類藥物:抗消炎藥,新諾明、磺胺嘧啶、磺胺瞇、就是所有動(dòng)物食品超標(biāo)最嚴(yán)重得。長期攝入含磺胺類殘留得食物,造成藥物在體內(nèi)蓄積。排泄以原型或乙酸磺胺經(jīng)腎排出,在尿中濃度高,溶解度較低,pH偏酸時(shí),在體內(nèi)(腎、膀胱內(nèi))結(jié)晶,造成泌尿系統(tǒng)損傷。⒊硝基呋喃類:抗菌消炎。呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因。胃腸道:反應(yīng)過敏。我國目前未制定此類藥物殘留測定國家標(biāo)準(zhǔn)。⒋抗寄生蟲類:驅(qū)蟲、殺蟲。苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮;食用此類藥物得食品,潛在危害就是致畸、致突變。⒌激素類藥物:提高動(dòng)物繁殖與加快生長發(fā)育;性激素、皮質(zhì)激素;以性激素最常用(已烯孕酮等)。干擾激素代謝與生理機(jī)能,并有一定致癌性,導(dǎo)致兒童早熟、發(fā)育異常,兒童異性趨向。二、藥物對(duì)食品得污染及危害

(一)藥物對(duì)食品得污染

1、預(yù)防與治療畜禽疾病

2、作為飼料添加劑使用

3、保鮮:在食品得保鮮過程中,有時(shí)加入某種抗生素以抑制微生物得生長、繁殖,使用后也會(huì)造成對(duì)食品得污染。濫用、不遵守休藥期、防腐、添加抗生素等。超范圍使用、使用違禁藥物。如:上海瘦肉精事件、多寶魚事件、大閘蟹事件。(二)藥物得殘留對(duì)人體得危害

藥物雖然有預(yù)防與治療疾病得作用,但同時(shí)對(duì)機(jī)體也產(chǎn)生有害得作用。藥物與毒物之間并無明顯得界限,有些毒物在適當(dāng)?shù)脛┝繒r(shí)具有治療作用,而所有藥物過量或應(yīng)用時(shí)間過長,均有毒性。殘留得藥物對(duì)人體得不良影響主要有:

1、毒性作用

2、使某些細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性

3、過敏反應(yīng)

4、造成菌群失調(diào)

5、致癌作用:現(xiàn)已證明殘留在食品中得克球粉、雌激素具有致癌作用。三、各種藥物得作用原則(一)合理配伍用藥畜禽發(fā)生疾病以后要正確診斷,合理用藥,能用一種藥得情況下不用多種藥。(二)按國家規(guī)定得范圍、劑量使用藥物各國政府都嚴(yán)格規(guī)定了各種藥物得使用條件。多數(shù)國家規(guī)定對(duì)生命期短得食用動(dòng)物禁止應(yīng)用雌激素。(三)使用獸用專用藥物一些國家規(guī)定,凡就是人類經(jīng)常使用得抗生素及其藥物不能作為畜禽飼料添加劑。世界衛(wèi)生組織不主張用鏈霉素飼喂動(dòng)物,以免產(chǎn)生耐藥性菌株。

(四)要有一定得休藥期所謂得休藥期就是指食品動(dòng)物從停止給藥到許可屠宰或它們得產(chǎn)品許可上市得間隔時(shí)間。此時(shí)間得規(guī)定就是根據(jù)上述物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)代謝得消除率與殘留量不致影響人體健康為依據(jù)得四、食品中藥物得允許殘留量

表5-1我國食品中部分獸藥得最高殘留限量藥物食品最高殘留限量(mg/kg)四環(huán)素畜禽:肌肉≤0、1

肝≤0、3

腎≤0、6氯霉素畜禽肉、水產(chǎn)品不得檢出(檢出限0、01)磺胺類畜禽(可食性組織)≤0、1水產(chǎn)品≤0、1(單種)豬肉、雞肉、雞蛋、牛肉≤0、1(以總量計(jì))呋喃唑酮水產(chǎn)品不得檢出雞肉、雞蛋≤0、1鹽酸克倫特羅(瘦肉精)畜禽肉不得檢出(檢出限0、01)己烯雌酚畜禽肉、水產(chǎn)品不得檢出(檢出限0、05)第二節(jié)食品中抗生素得測定

抗生素種類繁多,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,測定方法各不相同。因而給檢測工作帶來了許多困難?？股氐脺y定方法進(jìn)展很快。主要可分為微生物測定法,化學(xué)測定法與物理測定法三大類。其中以微生物測定法應(yīng)用較廣。因其測定原理基于抗生素對(duì)微生物得生理機(jī)能與代謝作用得抑制,所用試劑數(shù)量少,儀器簡單。如牛乳中TTC測定法,肉中四環(huán)素管碟測定法都屬于微生物分析法,但這類方法測定時(shí)間較長,且結(jié)果誤差較大。

化學(xué)測定法與物理測定法則利用抗生素中某些基團(tuán)得特殊性質(zhì)或反應(yīng)來測定其含量得分析方法。方法包括比色法、熒光分光光度法、氣相色譜法與高效液相色譜法。大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)一、四環(huán)素類抗生素殘留量得測定

食品中四環(huán)素類抗生素得測定多采用微生物法。

(一)原理樣品經(jīng)提取,用離子交換樹脂分離,甲醇溶劑洗脫,經(jīng)濃縮,殘?jiān)昧姿猁}緩沖液溶解,經(jīng)熒光鑒定,然后用微生物法進(jìn)行定量測定。本方法得最低檢出量為0、05mg/kg。(二)其它抗生素也可用此法進(jìn)行測定,只就是試驗(yàn)得菌種不同或培養(yǎng)基不同。測定青霉素為金黃色葡萄球菌,鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌(6633),氯霉素為卵黃色八疊球菌(9341),新生霉素為白色葡萄球菌。二、鏈霉素殘留量得測定(比色分析法)

(一)原理在酸性條件下,鏈霉素可與二硝基苯肼反應(yīng)生成黃色得鏈霉素二硝基苯腙;多余得試劑經(jīng)乙酸丁酯提取除去后,于430nm波長處測吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中鏈霉素得含量。

三、鮮乳中抗生素殘留量得測定(TTC試驗(yàn))(一)原理

當(dāng)乳中含有抗生素時(shí),標(biāo)準(zhǔn)菌株嗜熱鏈球菌得生長受到抑制,不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑(TTC)還原為無色。反之,當(dāng)乳中抗生素不存在時(shí),加入得標(biāo)準(zhǔn)菌株,就會(huì)大量生長繁殖,而且將TTC還原為紅色化合物。其紅色強(qiáng)度與細(xì)菌數(shù)量成正比。本法對(duì)各種抗生素得最低檢出量:青霉素為0、004IU/mL,鏈霉素為0、5IU/mL,慶大霉素為0、4IU/mL

(二)注意事項(xiàng)

1、本法得正確性與菌種得活力有密切關(guān)系。如菌種活力減弱時(shí),應(yīng)多次反復(fù)傳代加強(qiáng)活力。

2、每次檢驗(yàn)每個(gè)樣品應(yīng)一式二份,另外要作陰性、陽性對(duì)照各2管,陰性對(duì)照管作無抗生素乳9mL,陽性對(duì)照管用無抗生素乳9mL加抗生素。

3、水浴培養(yǎng)要避光,保持37℃,水面高于被檢樣品,判斷要迅速;檢樣經(jīng)80℃水浴加熱5min,要嚴(yán)格掌握。

4、制備培養(yǎng)基得乳要絕對(duì)無抗生素存在;操作所用試管、吸管均須經(jīng)滅菌。第三節(jié)食品中激素得測定

由于動(dòng)物性食品中性激素得含量極微,所以一般得測定方法受到了限制,較常用得方法有薄層色譜法、熒光分析法、氣相色譜法與高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法具有更大得優(yōu)越性,并有取代其它方法之勢。

一、性激素總量得測定(薄層色譜法)

(一)原理樣品中得性激素經(jīng)有機(jī)溶劑提取、濃縮,在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣、展開后,以硫酸顯色,與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)進(jìn)行比較,從而達(dá)到定性與半定量得目得。硅膠H硅膠中未加入粘合劑硅膠G硅膠中加入粘合劑石膏硅膠S硅膠中加入粘合劑淀粉硅膠HF254硅膠H中加入波長254nm熒光物質(zhì)硅膠GF254硅膠G中加入波長254nm熒光物質(zhì)常見得幾種硅膠吸附劑(二)注意事項(xiàng)

1、薄層色譜法可用于性激素得鑒別、半定量測定以及含量測定前得分離。

2、由于性激素得種類多,故所用得溶劑系統(tǒng)、吸附劑、展開劑與顯色劑不能一概而論?？筛鶕?jù)具體情況,挑選效果最佳者使用。二鹽酸克倫特羅測定

鹽酸克倫特羅商品名稱克喘素、息喘寧等,俗名瘦肉精。化學(xué)名稱α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3,5二氯苯甲醇鹽酸鹽,白色或類白色得結(jié)晶性粉末,無臭、味苦,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚?；瘜W(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,一般方法不能將其破壞,加熱至172℃時(shí)才分解,含有鹽酸克倫特羅得食品在加工過程中經(jīng)100℃沸水煮、燒烤、微波處理等過程,其殘留并不減少。常用方法:液相色譜法、氣相色譜法、酶聯(lián)免疫法。⒈氣相色譜法GC-MS⑴原理將肉類樣品粉碎,用高氯酸溶液勻漿,超聲波加熱提取,再用異丙醇-乙酸乙酯(40+60)萃取,濃縮后經(jīng)弱陽離子交換柱進(jìn)行分離,用乙醇+濃氨水(98+2)溶液洗脫,洗脫液濃縮,經(jīng)N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用GC-MS測定。以1-異丙氨基-3-[對(duì)-(2-甲基乙基)苯氧基]-2-丙醇L(+)-酒石酸鹽(美托洛爾)為內(nèi)標(biāo)物,用內(nèi)標(biāo)法定量。⒉液相色譜法原理:樣品處理同氣相,不用衍生化,外標(biāo)法定量。3、酶聯(lián)免疫法基本原理:酶聯(lián)免疫吸附測定就是在酶免疫技術(shù)得基礎(chǔ)上發(fā)展起來得一種新型得免疫測定技術(shù),其基本原理就是