GB 7300.201-2019 飼料添加劑 第2部分：維生素及類維生素 L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽

代替GB/T19422—2003飼料添加劑第2部分：維生素及類維生素L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽substanceshavingsimilareffect—L-Ascorbyl-2-phosphate2019-12-17發(fā)布I本部分的第1章、第3章、第4章、第5章為強(qiáng)制性的，其余為推薦性的。GB7300《飼料添加劑》按產(chǎn)品分為若干部分。本部分為GB7300的第201部分。本部分按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本部分代替GB/T19422—2003《飼料添加劑L-抗壞血酸-2-磷酸酯》,與GB/T19422—2003相比主要技術(shù)變化如下：——增加了產(chǎn)品規(guī)格(見(jiàn)3.2);——增加了L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量項(xiàng)目指標(biāo)，定為標(biāo)示量的95%～110%(見(jiàn)3.4);——增加了L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽占L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的比例指標(biāo)(見(jiàn)3.4);——增加了總磷的指標(biāo)(見(jiàn)3.4);——將總砷含量≤5.0(mg/kg)修改為≤2.0(mg/kg)(見(jiàn)3.4,2003年版的3.2);——將鉛含量≤30.0(mg/kg)修改為≤10.0(mg/kg)(見(jiàn)3.4,2003年版的3.2)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本部分由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。本部分起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所[國(guó)家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(北京)]、北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司。本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：1飼料添加劑第2部分：維生素及類維生素L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽GB7300的本部分規(guī)定了飼料添加劑L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及本部分適用于以L-抗壞血酸與偏磷酸鹽(鈉、鈣、鎂等)反應(yīng)所制得的L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB/T602化學(xué)試劑雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T6437飼料中總磷的測(cè)定分光光度法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標(biāo)簽GB/T13079—2006飼料中總砷的測(cè)定GB/T13080飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法GB/T14699.1飼料采樣GB/T18634飼用植酸酶活性的測(cè)定分光光度法3技術(shù)要求3.1外觀與性狀本品為類白色或淡黃色的粉末。3.2產(chǎn)品規(guī)格產(chǎn)品規(guī)格可根據(jù)合同要求確定，但L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽(以L-抗壞血酸計(jì))含量不得低于35%。3.3鑒別應(yīng)符合L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的最大紫外吸收波長(zhǎng)，或者4.4所描述的化學(xué)反應(yīng)的特征。3.4技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)應(yīng)符合表1規(guī)定。2指標(biāo)L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽(以L-抗壞血酸計(jì)，占標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù))/%95.0～110.0L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽占L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的比例/%≥干燥失重/%≤總砷/(mg/kg)≤鉛/(mg/kg)≤總磷/%≤4試驗(yàn)方法4.1試劑或材料除特殊說(shuō)明外，所有使用的試劑均為分析純和符合GB/T6682中規(guī)定的三級(jí)水，色譜用水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水，試劑和溶液的制備應(yīng)符合GB/T601、GB/T602和GB/T603的規(guī)定。4.1.5氫氧化鈉溶液(1mol/L):稱取40g氫氧化鈉，用水溶解定容至1000mL,混勻。4.1.6硝酸銀溶液(0.1mol/L):稱取16.9g硝酸銀，用水溶解定容至1000mL,混勻。4.1.8鹽酸溶液(0.1mol/L):吸取9mL鹽酸，用水溶解定容至1000mL,混勻。4.1.9碳酸鈉溶液(0.01mol/L):稱取1.05g碳酸鈉，用水溶解定容至1000mL,混勻。4.1.112,6-二氯靛酚鈉溶液：稱取295mg2,6-二氯靛酚鈉溶于1000mL水中，此溶液可保存1周。4.1.12酸性植酸酶：活性單位1000U以上，酶活按GB/T18634測(cè)定。4.1.13酸性植酸酶溶液：稱取1g酸性植酸酶，用冰乙酸溶液溶解定容至100mL,混勻。4.1.14偏磷酸溶液：稱取1g偏磷酸，用水溶解定容至100mL,混勻。4.1.15L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.1g(精確至0.0001g)L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品溶于100mL冰乙酸溶4.1.16L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)品：純度大于98.0%。4.1.17L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取約0.1g(精確至0.0001g)L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)品(4.1.16),置于100mL棕色容量瓶中，加適量25%乙醇溶液使其溶解，并稀釋定容至刻度，搖勻。該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液每毫升含L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂1mg。4.1.18L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.1.17)10.0mL于100mL棕色容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，搖勻。該標(biāo)準(zhǔn)工作液每毫升含L-抗3GB7300.201—20194.2.2超聲波水浴。4.2.3紫外分光光度計(jì)。4.2.4石英比色皿(1cm)。4.2.5高效液相色譜儀：帶紫外可調(diào)波長(zhǎng)檢測(cè)器(或二極管矩陣檢測(cè)器)。4.3感官檢驗(yàn)取適量試樣置于清潔干燥的容器中，在自然光下觀察其色澤。4.4鑒別試驗(yàn)4.4.1稱取試樣2g于100mL燒杯中，加水30mL溶解，過(guò)濾。取濾液10mL,加硝酸溶液(4.1.4)20mL,加熱20min。取試液5mL,滴加氫氧化鈉溶液(4.1.5)至中性，加硝酸銀溶液(4.1.6)1mL,即生成淺黃色沉淀；分離，沉淀在氨水溶液或硝酸溶液中均易溶解。4.4.2稱取試樣0.3g于250mL的容量瓶中，加入50mL鹽酸溶液(4.1.8)溶解，用碳酸鈉溶液(4.1.9)定容。吸取1.0mL試液于50mL容量瓶中，用碳酸鈉溶液定容至刻度。用紫外分光光度計(jì)掃描(200nm～400nm),L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽在261nm～265nm處有最大吸收值。4.4.3稱取試樣0.3g～0.5g于100mL的容量瓶中，加入約60mL的冰乙酸溶液(4.1.10),在超聲水浴中超聲10min,用冰乙酸溶液定容。精密吸取2mL試液于50mL小燒杯中，加入2,6-二氯靛酚鈉溶液(4.1.11)至溶液為粉紅色后，加入2mL酸性植酸酶溶液(4.1.13),于37℃水浴上保持30min,紅色褪去。4.5L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量的測(cè)定——紫外分光光度法(快速檢測(cè)法)4.5.1原理在pH值為10的條件下，L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽在263nm處有最大吸收，且符合朗伯比爾定律，據(jù)此可測(cè)出試樣溶液的吸光值，根據(jù)摩爾吸收系數(shù)計(jì)算出試樣中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量。4.5.2試驗(yàn)步驟平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣約0.3g(準(zhǔn)確至0.0001g),置于250mL棕色容量瓶中，加50mL鹽酸溶液(4.1.8),在超聲水浴中超聲10min,用碳酸鈉溶液(4.1.9)定容。準(zhǔn)確吸取1.0mL試液置于50mL棕色容量瓶中，用40mL碳酸鈉溶液溶解，并用鹽酸溶液(4.1.8)調(diào)節(jié)溶液pH值至10,用碳酸鈉溶液(4.1.9)稀釋至刻度，搖勻。放置20min后，將試液置于1cm石英比色皿中，以pH值為10的碳酸鈉溶液為空白對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)于263nm±1nm處測(cè)定吸收值。4.5.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量(以L-抗壞血酸計(jì))w?以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(1)計(jì)算： (1)式中：A——試樣溶液的吸收值；12.5——稀釋體積，單位為升(L);M——L-抗壞血酸的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol)(M=176.13);16000——L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的摩爾吸收系數(shù)(e),單位為升每厘米摩爾[L/(cm·mol)];m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);4GB7300.201—2019b——比色皿厚度，單位為厘米(cm)。試樣中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽占標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)(%)以w?表示，按式(2)計(jì)算：式中：K標(biāo)——產(chǎn)品中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽標(biāo)示量。平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字?！谥貜?fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.5%。4.6L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量測(cè)定——酶解法(仲裁法)在酸性條件下，酸性植酸酶可將L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽水解，用2,6-二氯靛酚鈉溶液滴定L-抗壞血酸含量。4.6.2試驗(yàn)步驟平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣0.3g～0.5g(精確至0.0001g)于100mL的容量瓶中，加入5mL冰乙酸(4.1.10),加入約60mL的水，在超聲水浴中保持10min,用水定容。準(zhǔn)確吸取10mL的上述試液于100mL具塞三角瓶中，加入5mL偏磷酸溶液(4.1.14),用2,6-二氯靛酚鈉溶液(4.1.11)滴定至粉紅色并保持30s即為終點(diǎn)。分別準(zhǔn)確吸取2mL的上述試液和L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.1.15)于50mL具塞三角瓶中，分別準(zhǔn)確加入2mL的酸性植酸酶溶液(4.1.13),于37℃水浴上水解1h后，加入5mL偏磷酸溶液，用2,6-二氯靛酚鈉溶液滴定至粉紅色并保持30s即為終點(diǎn)。同時(shí)做冰乙酸溶液(4.1.10)空白試驗(yàn)。4.6.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽含量(以L-抗壞血酸計(jì))w?,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(3)計(jì)算：式中：V?——滴定酶解后的試液所消耗的2,6-二氯靛酚鈉溶液的體積，單位為毫升(mL);V?——滴定未酶解的試液所消耗的2,6-二氯靛酚鈉溶液的體積，單位為毫升(mL);ms——L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，單位為克(g);V——滴定L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所消耗的2,6-二氯靛酚鈉溶液的體積，單位為毫升(mL);V?——滴定空白所消耗的2,6-二氯靛酚鈉溶液的體積，單位為毫升(mL);m?——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。試樣中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽占標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)(%)以w?表示，按式(4)計(jì)算：式中：K標(biāo)——產(chǎn)品中L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽標(biāo)示量。平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。5GB7300.201—20194.6.4精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.5%。4.7L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽占L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的比例的測(cè)定試樣中L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽經(jīng)水提取后，用液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽占L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽的比例。4.7.2試驗(yàn)步驟4.7.2.1試液的制備平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣約0.1g～1g(精確至0.0001g),置于100mL棕色容量瓶中，加約濾膜，供高效液相色譜儀分析。固定相：C18柱，內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)150mm,5μm或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。流動(dòng)相：每升水溶液中含300mL的甲醇，1g的己烷磺酸鈉和10mL的冰乙酸，過(guò)濾，超聲脫氣。檢測(cè)器：紫外可調(diào)波長(zhǎng)檢測(cè)器(或二極管矩陣檢測(cè)器),檢測(cè)波長(zhǎng)261nm。按高效液相色譜儀說(shuō)明書(shū)調(diào)整儀器操作參數(shù)，向色譜柱中注入L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.1.18)及試樣溶液，得到L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽色譜圖，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖和典型樣品溶液色譜圖參見(jiàn)附錄A,用外標(biāo)法定量。4.7.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽含量(以L-抗壞血酸計(jì))ws以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(5)計(jì)算： (5)P——樣品試液峰面積；p——L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.1.18)質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);Ps——L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.1.18)峰面積；m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);f——L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鎂轉(zhuǎn)換成L-抗壞血酸的換算系數(shù)。試樣中L-抗壞血酸-2-單磷酸酯鹽(以L-抗壞血酸計(jì))占L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽總含量的比例6式中：K——L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽總含量，由4.5或4.6的方法得出。平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值算術(shù)平均值平行做兩份實(shí)驗(yàn)。稱取試樣1g(準(zhǔn)確至0.001g),按照GB/T13079—2006中5.4.1.3干灰化法制4.9鉛的測(cè)定平行做兩份實(shí)驗(yàn)。稱取試樣1g(準(zhǔn)確至0.001g),按照GB/T13080規(guī)定執(zhí)行。4.10總磷的測(cè)定平行做兩份實(shí)驗(yàn)。稱取試樣1g(準(zhǔn)確至0.001g),按照GB/T6437規(guī)定執(zhí)行。4.11干燥失重的測(cè)定平行做兩份實(shí)驗(yàn)