《儀器分析》課件-模塊三 高效液相色譜法

儀器分析模塊三高效液相色譜法項(xiàng)目一高效液相色譜法目標(biāo)掌握高效液相色譜法分離類型01掌握高效液相色譜法各分離原理02相關(guān)標(biāo)題文字01項(xiàng)目一高效液相色譜法原理-2·高效液相色譜法主要分類類型·高效液相色譜法各分離原理HPLCHPLC01高效液相色譜法是以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜方法。高效液相色譜法（HPLC）02高效液相色譜法（HOLC）高效液相色譜儀的工作流程圖03高效液相色譜法的主要分離類型1.基本原理：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異.2.固定相：是固體吸附劑，有下列兩類：極性（硅膠、氧化鋁）、非極性（活性炭）。3.液固吸附色譜流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）04高效液相色譜法的主要分離類型3.流動(dòng)相的基本要求：⑴能溶解被分離的樣品⑵與所用檢測(cè)器相匹配⑶粘度盡可能小，以獲得高的柱效⑷價(jià)格便宜、毒性小、易于純化一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）05高效液相色譜法的主要分離類型4.流動(dòng)相的基本要求：流動(dòng)相的選擇原則：極性大的試樣用極性較強(qiáng)的流動(dòng)相；極性小的則用低極性流動(dòng)相。一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）061.基本原理主要基于樣品分子在流動(dòng)相和固定相間的溶解度不同（分配作用）而實(shí)現(xiàn)分離的液相色譜分離模式。分析對(duì)象：分析同系物及含有不同官能團(tuán)的多組分的混合物。2.固定相固定相是固定液涂抹在載體上制成。載體有全多孔型載體、表面多孔型載體、全多孔型離子載體；固定液：β,β-氧二丙腈，聚乙二醇，十八烷和角鯊?fù)椤?.流動(dòng)相要求：對(duì)固定相的溶解度盡可能小。對(duì)于親水性固定液，應(yīng)選擇疏水性流動(dòng)相；反之，相反。二.液-液分配色譜HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型07化學(xué)鍵合相色譜是在化學(xué)鍵合固定相上進(jìn)行物質(zhì)分離的一種液相色譜方法?；瘜W(xué)鍵合固定相：以化學(xué)反應(yīng)的方法將功能分子結(jié)合到惰性載體上(全多孔或薄殼型微粒硅膠)?；瘜W(xué)鍵合固定相分類：根據(jù)在硅膠表面(具有≡Si－OH基團(tuán))的化學(xué)反應(yīng)不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型(≡Si－O－C)；硅氧硅碳鍵型(≡Si－O－Si－C)硅碳鍵型（≡Si－C）和硅氮鍵型（≡Si－N）四種類型。三.化學(xué)鍵合相色譜HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型081.離子交換色譜的分離原理在離子交換色譜中，樣品離子對(duì)離子交換劑上帶固定電荷的活性交換基團(tuán)之間發(fā)生離子交換，不同的樣品離子對(duì)離子交換劑的親和力不同，或者說(shuō)相互作用不同，作用弱的溶質(zhì)不易被保留，先從柱中被沖洗出來(lái)，反之，作用強(qiáng)的，保留較長(zhǎng)，較晚淋洗出來(lái)。2.固定相：陽(yáng)離子交換樹脂或陰離子交換樹脂。3.流動(dòng)相：陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽(yáng)離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液。四.離子交換色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型091.基本原理：立體排阻，按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。2.固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)。3.流動(dòng)相：要求能溶解樣品，粘度低，與檢測(cè)器相匹配。4.分析對(duì)象：分離大分子物質(zhì)，分離范圍