飼料添加劑 屎腸球菌

ICS65.120

B46

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB××××—××××

飼料添加劑第5部分：微生物

屎腸球菌

Feedadditive—Part5：Livemicroorganisms—Enterococcusfaecium

（征求意見稿）

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實(shí)施

國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布

GB/T××××—××××

飼料添加劑屎腸球菌

1范圍

GB7300的本部分規(guī)定了飼料添加劑屎腸球菌產(chǎn)品的要求、試驗(yàn)方法、檢測(cè)規(guī)則、標(biāo)簽、運(yùn)輸、儲(chǔ)

存、保質(zhì)期的要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于含屎腸球菌的飼料添加劑。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定

GB/T4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定

GB/T4789.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)

GB/T4789.10食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)

GB/T4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)

GB/T6435飼料中水分的測(cè)定

GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定

GB/T10647飼料工業(yè)術(shù)語

GB/T10648飼料標(biāo)簽

GB/T13079飼料中總砷的測(cè)定

GB/T13080飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法

GB/T13081飼料中汞的測(cè)定

GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定方法

GB/T13091飼料中沙門氏菌的測(cè)定

GB/T14699.1飼料采樣

GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法

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GB/T××××—××××

3術(shù)語和定義

屎腸球菌Enterococcusfaecium

屬于腸球菌屬，革蘭氏陽性，菌體卵圓形，多數(shù)成對(duì)或成短鏈，無芽孢，不運(yùn)動(dòng)。在飼料工業(yè)中被

制成微生物飼料添加劑使用。

4要求

4.1微生物學(xué)指標(biāo)

4.1.1菌體形態(tài)

菌體細(xì)胞呈卵圓形，直徑0.6～2.0μm×0.6～2.5μm，多數(shù)成對(duì)或成短鏈。無芽孢，無明顯莢膜，通

常不運(yùn)動(dòng)。

4.1.2菌落形態(tài)

在腸球菌選擇性培養(yǎng)基（膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂）上菌落生長形態(tài)特征為：帶有棕紫色環(huán)的黑色或

棕黑色菌落，邊緣整齊、表面光滑、圓形。

4.1.3生理生化特征

屎腸球菌生理生化特征見表1。

表1屎腸球菌生理生化特征

特征結(jié)果特征結(jié)果

革蘭氏染色+碳水化合物反應(yīng)

6.5%NaCl+麥芽糖+

pH9.6+七葉苷+

0.04%碲酸鹽-丙酮酸-

0.02%疊氮化鈉+L-阿拉伯糖+

注：+為陽性反應(yīng)；-為陰性反應(yīng)。

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GB/T××××—××××

4.2感官指標(biāo)

產(chǎn)品性狀應(yīng)符合包裝上標(biāo)明的產(chǎn)品固有的形狀、色澤、氣味、均勻程度、雜質(zhì)等，無異臭味。

4.3水分

不高于8.0%。

4.4活菌數(shù)

屎腸球菌活菌數(shù)≥1.0×109CFU/g。

注：活菌數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。

4.5衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

屎腸球菌飼料添加劑符合表2的要求。

表2屎腸球菌飼料添加劑衛(wèi)生指標(biāo)

項(xiàng)目指標(biāo)

雜菌率的允許量，%≤0.1

黃曲霉素B1，μg/kg≤10.0

砷的允許量，mg/kg≤2.0

鉛的允許量，mg/kg≤5.0

汞的允許量，mg/kg≤0.1

鎘的允許量，mg/kg≤0.5

大腸菌群的允許量，CFU/100g≤400

霉菌總數(shù)的允許量，個(gè)/kg＜1.0×104

酵母總數(shù)的允許量，個(gè)/kg＜1.0×104

致病菌（志賀氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌）不得檢出

5試驗(yàn)方法

5.1抽樣

按GB/T14699.1進(jìn)行樣品的采集。采樣時(shí)必須特別注意樣品的代表性和避免采樣時(shí)的污染。首先準(zhǔn)

備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋、均質(zhì)袋或廣口瓶，金屬勺和刀，在衛(wèi)生學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上，采

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GB/T××××—××××

取有代表性的樣品，樣品采集后應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.2感官檢驗(yàn)

取一定量（250g）的樣品于無色玻璃杯中，自然光線下采用目測(cè)、鼻嗅的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3水分測(cè)定

按GB/T6435檢測(cè)。

5.4屎腸球菌檢測(cè)

5.4.1檢驗(yàn)程序

屎腸球菌檢驗(yàn)程序流程圖如圖1。

產(chǎn)品樣品

樣品25g+225ml無菌生理鹽水

10倍系列稀釋

選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，各以1ml加入平

皿，將45℃～50℃的腸球菌選擇性培養(yǎng)

36℃±1℃

24h～48h

挑取5～10
個(gè)菌落

菌體、菌落形態(tài)檢驗(yàn)

生理生化特征檢驗(yàn)

菌種鑒定菌落計(jì)數(shù)

圖1屎腸球菌檢驗(yàn)程序流程圖

報(bào)告5

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5.4.2菌種鑒定

5.4.2.1樣品制備

在按照GB/T14699.1進(jìn)行采樣基礎(chǔ)上，稱取25.0g±0.01g或25.0ml±0.01ml樣品，加入225ml無菌

生理鹽水中均質(zhì)，待均勻后，再將樣品用無菌生理鹽水按十倍稀釋法制成不同濃度稀釋液。取1.0ml

合適濃度稀釋液，注入無菌平板，每個(gè)稀釋度做3次重復(fù)。將融化并冷卻至45～50℃的腸球菌選擇性

培養(yǎng)基，向每個(gè)培養(yǎng)皿中倒入約15～20ml，搖勻并凝固，制成腸球菌瓊脂平板。37℃倒置培養(yǎng)24～

48h。需要時(shí)對(duì)樣品進(jìn)行延長均質(zhì)時(shí)間、研磨、超聲波等預(yù)處理。如果腸溶性固態(tài)樣品具有非水溶性，

應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，用合適的腸溶性緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行溶解并均質(zhì)。

5.4.2.2菌體形態(tài)檢驗(yàn)：挑取菌體，涂片染色，用光學(xué)顯微鏡觀察菌體形態(tài)。

5.4.2.3菌落形態(tài)檢驗(yàn)：觀察菌落顏色、形態(tài)。

5.4.2.4菌落選擇：用接種針或接種環(huán)隨機(jī)挑取5～10個(gè)菌落。

5.4.2.5生理生化特征檢驗(yàn)：接種并進(jìn)行4.1.3表1中各項(xiàng)試驗(yàn)。

5.4.3菌落計(jì)數(shù)

5.4.3.1按5.4.2.1中所述方法進(jìn)行傾注平板培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

5.4.3.2選取適宜的稀釋度，菌落在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5.4.3.3計(jì)算方法見公式（1）。

N=∑C/[V(n1+0.1n2)d]………………（1）

式中：

∑C——兩個(gè)連續(xù)稀釋度全部平板上菌落數(shù)總和

V——每個(gè)平板上接種的體積，ml

n1——第1個(gè)稀釋度的平板數(shù)

n2——第2個(gè)稀釋度的平板數(shù)

d——相對(duì)第1稀釋度的稀釋因數(shù)

結(jié)果為每克或每毫升產(chǎn)品微生物菌落數(shù)，以科學(xué)計(jì)數(shù)法表示結(jié)果。

具體結(jié)果輸出實(shí)例可參考GB/T4789.2。

5.4.3.4允許差

兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于2%。

5.5衛(wèi)生檢驗(yàn)

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GB/T××××—××××

5.5.1雜菌率的允許量

5.5.1.1雜菌識(shí)別：將腸球菌選擇性培養(yǎng)基替換為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，按5.4.2.1中所述方法進(jìn)行取樣、

樣品稀釋、傾注平板與培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。并觀察菌落顏色、形態(tài)，必要時(shí)顯微鏡鏡檢。

5.5.1.2雜菌率檢測(cè)：雜菌率=雜菌數(shù)/（屎腸球菌活菌數(shù)+雜菌數(shù)）×100%………（2）

5.5.2黃曲霉素B1檢驗(yàn)

按照GB/T17480執(zhí)行。

5.5.3砷含量測(cè)定

按照GB/T13079執(zhí)行。

5.5.4汞含量測(cè)定

按照GB/T13081執(zhí)行。

5.5.5鎘含量測(cè)定

按照GB/T13082執(zhí)行。

5.5.6霉菌和酵母檢測(cè)

按照GB/T4789.15執(zhí)行。

5.5.7大腸菌群檢測(cè)

按照GB/T4789.3執(zhí)行。

5.5.8致病菌檢測(cè)

按照GB/T4789.5、GB/T4789.10、GB/T13091執(zhí)行。

6檢驗(yàn)規(guī)則

6.1出廠檢驗(yàn)（交收檢驗(yàn)）

感官指標(biāo)、水分、粒度、活菌數(shù)、雜菌率指標(biāo)為出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目，由生產(chǎn)廠或公司的質(zhì)檢部門進(jìn)行檢

驗(yàn)，檢驗(yàn)合格并簽發(fā)質(zhì)量合格證的產(chǎn)品方可出廠。

6.2型式檢驗(yàn)（例行檢驗(yàn)）

6.2.1一般情況下，企業(yè)一年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，下列檢驗(yàn)項(xiàng)應(yīng)包括：

a）菌種遺傳特征檢驗(yàn)；與《Bergey’sManualofSystematicBacteriology》（《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手

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GB/T××××—××××

冊(cè)》）所列模式菌株ATCC19434的16SrRNA(16S核糖體核糖核酸)基因全序列進(jìn)行比對(duì)，相

似度在99%以上。

b）國家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)要求的其它型式檢驗(yàn)。

6.2.2但有下列情況之一時(shí)，企業(yè)半年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，下列檢驗(yàn)項(xiàng)應(yīng)包括：

a）更改主要原輔材料和關(guān)鍵生產(chǎn)工序；

b）新試制的產(chǎn)品或正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn)3個(gè)月以上（或半年），重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；

c）國家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)提出要求進(jìn)行型式檢驗(yàn)。

7.判定規(guī)則

7.1所驗(yàn)項(xiàng)目全部合格，判定為該批次產(chǎn)品合格。

7.2檢驗(yàn)結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本部分規(guī)定時(shí)，可自同批產(chǎn)品中重新加倍取樣進(jìn)行復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)果

即使有一項(xiàng)指標(biāo)不符合本部分規(guī)定，則判定該批產(chǎn)品不合格。

7.3各項(xiàng)目指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170中全數(shù)值比較法執(zhí)行。

8.標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、保質(zhì)期

8.1標(biāo)簽

8.1.1采用鮮明的標(biāo)簽貼于外包裝顯著位置；

8.1.2標(biāo)簽內(nèi)容應(yīng)符合GB10648的要求；

8.1.3標(biāo)簽應(yīng)標(biāo)明所添加微生物的學(xué)名和數(shù)量。

8.2包裝

應(yīng)采用符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的、無毒的包裝材料。

8.3運(yùn)輸

運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬，搬運(yùn)裝卸時(shí)小心輕放，不得與有毒物質(zhì)混裝混運(yùn)。

8.4儲(chǔ)存

應(yīng)保存于干燥、陰涼、通風(fēng)的倉庫中，避免直接日曬和高溫地表放置，防止長時(shí)間30℃以上高溫，

不得和有毒、有害物質(zhì)一起堆放，嚴(yán)防污染。建議使用10℃以下的冷藏條件。

8.5保質(zhì)期

產(chǎn)品保質(zhì)期為6個(gè)月以上。

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附錄A

（資料性附錄）

專用培養(yǎng)基及試劑

A.1腸球菌選擇性培養(yǎng)基（膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂）

A.1.1成分

胰蛋白胨17.0g

牛肉浸粉3.0g

酵母浸粉5.0g

牛膽粉10.0g

氯化鈉5.0g

檸檬酸鈉1.0g

七葉苷1.0g

檸檬酸鐵銨0.5g

疊氮化鈉0.25g

瓊脂18.0g

蒸餾水加至1000ml

pH7.1±0.1

A.1.2制法

將所有成分加入蒸餾水中，加熱溶解，校正pH7.1±0.1。分裝。高壓滅菌121℃15min。臨用時(shí)加

熱熔化瓊脂，冷至45～50℃時(shí)使用。

A.2生理鹽水

A.2.1成分

氯化鈉8.5g

蒸餾水加至1000ml

A.2.2制法

將氯化鈉加入蒸餾水中，攪拌溶解，分裝，高壓滅菌121℃15min。

A.3營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

A.3.1成分

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蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化鈉5g

瓊脂15～20g

蒸餾水加至1000ml

A.3.2制法

將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2ml校正pH至7.2～7.4。加入

瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。

A.4革蘭氏染色液

A.4.1結(jié)晶紫染色液

A.4.1.1成分

結(jié)晶紫8.5g

95%乙醇20ml

1%草酸銨水溶液80ml

A.4.1.2制法

將結(jié)晶紫完全溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。

A.4.2革蘭氏碘液

A.4.2.1成分

碘1.0g

碘化鉀2.0g

蒸餾水300ml

A.4.2.2制法

將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300ml。

A.4.3沙黃復(fù)染液

A.4.3.1成分

沙黃0.25g

95%乙醇10ml

蒸餾水90ml

A.4.3.2制法

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將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。

A.4.4染色法

A.4.4.1將涂片在酒精燈火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗。

A.4.4.2滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。

A.4.4.3滴加95%乙醇脫色，約15s～30s，直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗。

A.4.4.4滴加復(fù)染液，復(fù)染1min。水洗、待干、鏡檢。

A.5糖發(fā)酵管

A.5.1基礎(chǔ)成分

牛肉膏5.0g

蛋白胨5.0g

酵母浸膏5.0g

吐溫800.5ml

瓊脂1.5g

1.6%溴甲酚紫酒精溶液1.4ml

蒸餾水1000ml

A.5.2制法

按0.5%加入所需糖類，并分裝小試管，121℃高壓滅菌15min～20min。

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附錄B

（資料性附錄）

模式菌株ATCC19434的16SrRNA基因序列

1ttgagagtaaacctctcaaaactgaacaaagtaaaaacaaattgtgtagtctccgtaata

61ttccttagaaaggaggtgatccagccgcaccttccgatacggctaccttgttacgacttc

121accccaatcatctatcccaccttaggcggctggctccaaaaaggttacctcaccgacttc

181gggtgttacaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattca

241ccgcggcgtgctgatccgcgattactagcgattccggcttcatgcaggcgagttgcagcc

301tgcaatccgaactgagagaagctttaagagattagcttagcctcgcgacttcgcaactcg

361ttgtacttcccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacg

421tcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcttgctagagtgcccaactgaatga

481tggcaactaacaataagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacg

541agctgacgacaaccatgcaccacctgtcactttgcccccgaaggggaagctctatctcta

601gagtggtcaaaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccac

661atgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcaaccttgcggtcgta

721ctccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactgaagggcggaaaccctccaac

781acttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctcccca

841cgctttcgagcctcagcgtcagttacagaccagagagccgccttcgccactggtgttcct

901ccatatatctacgcatttcaccgctacacatggaattccactctcctcttctgcactcaa

961gtctcccagtttccaatgaccctccccggttgagccgggggctttcacatcagacttaag

1021aaaccgcctgcgctcgctttacgcccaataaatccggacaacgcttgccacctacgtatt

1081accgcggctgctggcacgtagttagccgtggctttctggttagataccgtcaagggatga

1141acagttactctcatccttgttcttctctaacaacagagttttacgatccgaaaaccttct

1201tcactcacgcggcgttgctcggtcagactttcgtccattgccgaagattccctactgctg

1261cctcccgtaggagtttgggccgtgtctcagtcccaatgtggccgatcaccctctcaggtc

1321ggctatgcatcgtggccttggtgagccgttacctcaccaactagctaatgcaccgcgggt

1381ccatccatcagcgacacccgaaagcgcctttcaaatcaaaaccatgcggtttcgattgtt

1441atacggtattagcacctgtttccaagtgttatccccttctgatgggcaggttacccacgt

1501gttactcacccgttcgccactcctctttttccggtggagcaagctccggtggaaaaagaa

1561gcgtacgacttgcatgtattaggcacgccgccagcgttcgtcctgagccaggatcaaact

1621ctcataaaaagttcgaacaatcttgcgattgttaagctcaatttgtttgctagcatatt

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前言

GB7300《飼料添加劑》按產(chǎn)品分為若干部分：

本部分為GB7300的第502部分。

本部分按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。

本部分起草單位：國家糧食局科學(xué)研究院。

本部分主要起草人：張曉琳、韓偉、李愛科、魏永剛、李曉敏、趙晨、黃穎、郝淑紅。

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飼料添加劑屎腸球菌

1范圍

GB7300的本部分規(guī)定了飼料添加劑屎腸球菌產(chǎn)品的要求、試驗(yàn)方法、檢測(cè)規(guī)則、標(biāo)簽、運(yùn)輸、儲(chǔ)

存、保質(zhì)期的要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于含屎腸球菌的飼料添加劑。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定

GB/T4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定

GB/T4789.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)

GB/T4789.10食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)

GB/T4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)

GB/T6435飼料中水分的測(cè)定

GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定

GB/T10647飼料工業(yè)術(shù)語

GB/T10648飼料標(biāo)簽

GB/T13079飼料中總砷的測(cè)定

GB/T13080飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法

GB/T13081飼料中汞的測(cè)定

GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定方法

GB/T13091飼料中沙門氏菌的測(cè)定

GB/T14699.1飼料采樣

GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法

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3術(shù)語和定義

屎腸球菌Enterococcusfaecium

屬于腸球菌屬，革蘭氏陽性，菌體卵圓形，多數(shù)成對(duì)或成短鏈，無芽孢，不運(yùn)動(dòng)。在飼料工業(yè)中被

制成微生物飼料添加劑使用。

4要求

4.1微生物學(xué)指標(biāo)

4.1.1菌體形態(tài)

菌體細(xì)胞呈卵圓形，直徑0.6～2.0μm×0.6～2.5μm，多數(shù)成對(duì)或成短鏈。無芽孢，無明顯莢膜，通

常不運(yùn)動(dòng)。

4.1.2菌落形態(tài)

在腸球菌選擇性培養(yǎng)基（膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂）上菌落生長形態(tài)特征為：帶有棕紫色環(huán)的黑色或

棕黑色菌落，邊緣整齊、表面光滑、圓形。

4.1.3生理生化特征

屎腸球菌生理生化特征見表1。

表1屎腸球菌生理生化特征

特征結(jié)果特征結(jié)果

革蘭氏染色+碳水化合物反應(yīng)

6.5%NaCl+麥芽糖+

pH9.6+七葉苷+

0.04%碲酸鹽-丙酮酸-

0.02%疊氮化鈉+L-阿拉伯糖+

注：+為陽性反應(yīng)；-為陰性反應(yīng)。

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4.2感官指標(biāo)

產(chǎn)品性狀應(yīng)符合包裝上標(biāo)明的產(chǎn)品固有的形狀、色澤、氣味、均勻程度、雜質(zhì)等，無異臭味。

4.3水分

不高于8.0%。

4.4活菌數(shù)

屎腸球菌活菌數(shù)≥1.0×109CFU/g。

注：活菌數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。

4.5衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

屎腸球菌飼料添加劑符合表2的要求。

表2屎腸球菌飼料添加劑衛(wèi)生指標(biāo)

項(xiàng)目指標(biāo)

雜菌率的允許量，%≤0.1

黃曲霉素B1，μg/kg≤10.0

砷的允許量，mg/kg≤2.0

鉛的允許量，mg/kg≤5.0

汞的允許量，mg/kg≤0.1

鎘的允許量，mg/kg≤0.5

大腸菌群的允許量，CFU/100g≤400

霉菌總數(shù)的允許量，個(gè)/kg＜1.0×104

酵母總數(shù)的允許量，個(gè)/kg＜1.0×104

致病菌（志賀氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌）不得檢出

5試驗(yàn)方法

5.1抽樣

按GB/T14699.1進(jìn)行樣品的采集。采樣時(shí)必須特別注意樣品的代表性和避免采樣時(shí)的污染。首先準(zhǔn)

備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋、均質(zhì)袋或廣口瓶，金屬勺和刀，在衛(wèi)生學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上，采

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取有代表性的樣品，樣品采集后應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.2感官檢驗(yàn)

取一定量（250g）的樣品于無色玻璃杯中，自然光線下采用目測(cè)、鼻嗅的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3水分測(cè)定

按GB/T6435檢測(cè)。

5.4屎腸球菌檢測(cè)

5.4.1檢驗(yàn)程序

屎腸球菌檢驗(yàn)程序流程圖如圖1。

產(chǎn)品樣品

樣品25g+225ml無菌生理鹽水

10倍系列稀釋

選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，各以1ml加入平

皿，將45℃～50℃的腸球菌選擇性培養(yǎng)

36℃±1℃

24h～48h

挑取5～10
個(gè)菌落

菌體、菌落形態(tài)檢驗(yàn)

生理生化特征檢驗(yàn)

菌種鑒定菌落計(jì)數(shù)

圖1屎腸球菌檢驗(yàn)程序流程圖

報(bào)告5

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5.4.2菌種鑒定

5.4.2.1樣品制備

在按