藥品檢測(cè)技術(shù)-鑒別技術(shù)（藥物質(zhì)量檢驗(yàn)課件）

光譜鑒別法紫外-可見(jiàn)分光光度法：該光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷。含有共軛體系的有機(jī)藥物在紫外-可見(jiàn)光區(qū)（200-760nm波長(zhǎng)）有特征吸收?；鶓B(tài)激發(fā)態(tài)分子的能級(jí)及電子在能級(jí)間的躍遷

v’3J‘

v’2J‘

電子

v1’激發(fā)態(tài)

v’oJ

v3

v2J

電子

v1J

基態(tài)

v0J

電子振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)能級(jí)能級(jí)

紅外光光度法：有機(jī)化合物分子受到中紅外線的照射后，產(chǎn)生振動(dòng)能級(jí)躍遷，同時(shí)伴隨轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷，形成振-轉(zhuǎn)光譜，也叫紅外光譜。紫外-可見(jiàn)光分光光度法朗伯－比爾（Beer-Lambert）定律當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)（單色光），溶液吸光度A只與溶液中有色物質(zhì)濃度和比色皿厚度有關(guān)，成正比，即A∝LCA＝kLC式中：k－比例常數(shù)－系吸系數(shù)L－比色皿厚度C－溶液濃度當(dāng)C為摩爾濃度，令k＝ε，稱(chēng)為摩爾吸光系數(shù)當(dāng)C為百分濃度，令k＝E，稱(chēng)為百分吸光系數(shù)

I0I

←L→

ACA與C成線性關(guān)系紫外-可見(jiàn)光分光光度法λ1λ2峰峰谷谷010203

比較吸收光譜特性的一致性比測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，或同時(shí)測(cè)定最小吸收用于鑒別常用方法紫外-可見(jiàn)光分光光度法①比測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)紫外-可見(jiàn)光分光光度法

例：乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷。紫外-可見(jiàn)光分光光度法

紫外-可見(jiàn)光分光光度法③比較吸收光譜特性的一致性有些藥物的吸收峰雖較多，但各峰對(duì)應(yīng)的吸光度的比值是一定的。紫外-可見(jiàn)光分光光度法③比較吸收光譜特性的一致性利用藥物本身或其反應(yīng)產(chǎn)物有吸收特性，進(jìn)行鑒別。紫外-可見(jiàn)光分光光度法④與對(duì)照品比較,對(duì)比吸收光譜的一致性己稀雌酚注射液用供試品溶液250-450nm波長(zhǎng)吸收光譜與對(duì)照品是否一致鑒別。對(duì)照品供試品紫外-可見(jiàn)光分光光度法USP采用對(duì)照品法供試藥與其對(duì)照品按同一方法處理，在同樣條件下紫外光譜圖一致。在200~400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描兩溶液,要求在相同的波長(zhǎng)處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的范圍內(nèi).BP規(guī)定一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)，僅有一個(gè)最大或最小吸收J(rèn)P與ChP相似

SCI文獻(xiàn)各國(guó)紫外鑒別法比較紫外-可見(jiàn)光分光光度法紫外-可見(jiàn)光分光光度法此法簡(jiǎn)單易行，應(yīng)用范圍廣，使用頻率高但因?yàn)槲展庾V比較簡(jiǎn)單，吸收曲線形狀變化不大，缺乏精細(xì)結(jié)構(gòu)，所以紫外分光光度法鑒別出的相同物質(zhì)，不一定是同一種物質(zhì)用作鑒別的專(zhuān)屬性不如紅外分光光度法紅外分光光度法IR色譜法是有機(jī)藥物分子的振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，能反映藥物分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，分子中每個(gè)基團(tuán)一般都由相應(yīng)的吸收峰，且特征性強(qiáng)，（除光學(xué)異構(gòu)體及長(zhǎng)鏈烷烴同系物外）幾乎沒(méi)有兩種化合物具有完全相同的紅外吸收光譜。因此，紅外吸收光譜具有“指紋性”，被廣泛地應(yīng)用于化合物的鑒別。

特點(diǎn)

專(zhuān)屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，應(yīng)用廣（固、液、氣）

主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥以及結(jié)構(gòu)相近的同類(lèi)物質(zhì)。用途原料藥同類(lèi)藥（其他方法不易區(qū)分的）磺胺類(lèi)、甾體激素類(lèi)、半合成抗生素

標(biāo)準(zhǔn)圖譜法：Ch.P要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜，與《藥品紅外光譜集》中的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，如果峰位、峰形、相對(duì)強(qiáng)度都一致時(shí)，即為同一種藥物。

對(duì)照品法：將供試品與對(duì)照品在同樣的條件下繪制紅外圖譜，彼此對(duì)比是否一致的方法。可消除不同儀器和操作條件造成的誤差。紅外分光光度法試樣的制備方法壓片法供試品（約1mg)+干燥KBr/KCl(約200mg)

研磨均勻（瑪瑙研缽）

置壓膜中真空加壓至0.8-1GPa2-3min均勻透明片無(wú)明顯顆粒供試片同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干擾紅外分光光度法糊法供試品（約5mg）,滴加少量液體石蠟或其他液體制成糊狀物瑪瑙研缽

取適量夾于兩個(gè)KBr片（150mg/片）之間供試片KBr（約300mg）制成空白片，作背景校正紅外分光光度法試樣的制備方法

膜法

供試品多為高分子聚合物，可做成液膜鋪展于適宜的鹽片上。

溶液法

液體供試品（或溶于適宜的溶劑內(nèi)），制成1%-10%的溶液，置于0.1-0.5mm厚的液體池中，即可測(cè)得。紅外分光光度法20特征區(qū)指紋區(qū)紅外分光光度法標(biāo)準(zhǔn)圖譜法：Ch.P要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜，與《藥品紅外光譜集》中的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，如果峰位、峰形、相對(duì)強(qiáng)度都一致時(shí)，即為同一種藥物。

對(duì)照品法：將供試品與對(duì)照品在同樣的條件下繪制紅外圖譜，彼此對(duì)比是否一致的方法。可消除不同儀器和操作條件造成的誤差。紅外分光光度法

各國(guó)紅外光譜法比較Ch.P采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法USP采用對(duì)照品法BP采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法、對(duì)照品法JP規(guī)定條件下測(cè)定一定波長(zhǎng)處特征吸收峰。紅外分光光度法化學(xué)鑒別法鑒別方法化學(xué)鑒別法光譜鑒別法色譜鑒別法顯微鑒別法生物學(xué)法

根據(jù)藥物與化學(xué)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的顏色、沉淀、氣體、熒光等現(xiàn)象，鑒別藥物真?zhèn)蔚姆椒ā?/p>

特點(diǎn)

操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、現(xiàn)象明顯、實(shí)驗(yàn)成本低，應(yīng)用范圍廣；

化學(xué)鑒別法是藥物鑒別中最常用的一種方法。

化學(xué)鑒別法顯色反應(yīng)鑒別法

沉淀反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法氣體生成反應(yīng)鑒別法化學(xué)鑒別法化學(xué)鑒別法顯色反應(yīng)鑒別法向供試品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。

①三氯化鐵呈色反應(yīng)——含酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基的藥物顯色反應(yīng)鑒別法6+4FeCl3

+12HCl紫色配位化合物中性或弱酸性條件②重氮化偶合呈色反應(yīng)——含芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基結(jié)構(gòu)的藥物顯色反應(yīng)鑒別法N2+Cl-.+NaNO2+2HCl+NaCl+2H2ON2+Cl-.++NaOH+NaCl+2H2O芳香第一胺粉紅色到猩紅色重氮鹽③Vitali呈色反應(yīng)——托烷生物堿類(lèi)藥物，具有莨菪酸結(jié)構(gòu)KOH(C2H5OH)KOH深紫色水解莨菪酸3HNO3黃色殘?jiān)@色反應(yīng)鑒別法④茜素氟藍(lán)法——有機(jī)氟化物顯色反應(yīng)鑒別法有機(jī)氟無(wú)機(jī)氟離子

茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰F-+Ce3++

pH4.3堿液吸收藍(lán)紫色氧瓶燃燒法⑤茚三酮呈色反應(yīng)——含脂肪氨基、類(lèi)似氨基酸結(jié)構(gòu)的藥物顯色反應(yīng)鑒別法茚三酮藍(lán)紫色⑥異羥肟酸鐵呈色反應(yīng)——含芳酸及其酯類(lèi)和酰胺類(lèi)結(jié)構(gòu)的藥物顯色反應(yīng)鑒別法紅色向供試品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成不同顏色、或具有特殊性狀的沉淀物。

沉淀反應(yīng)鑒別法①丙二酰脲類(lèi)的硝酸銀反應(yīng)+2AgNO3+2HNO3沉淀反應(yīng)鑒別法——巴比妥類(lèi)藥物白色沉淀R-Cl-+Ag+AgCl②氯化物的銀鹽沉淀沉淀反應(yīng)鑒別法白色沉淀——鹽酸鹽類(lèi)藥物③苯甲酸鹽類(lèi)的三氯化鐵反應(yīng)+3FeCl3+OH-+7NaCl+2Cl-赭色沉淀沉淀反應(yīng)鑒別法——苯甲酸鹽類(lèi)藥物④還原性基團(tuán)的銀鏡反應(yīng)異煙肼+AgNO3+NH3·H2OAg沉淀反應(yīng)鑒別法HO—C—COONH4HO—C—COONH4+2Ag+2NH3+2H2OHO—CH—COOHHO—CH—COOH+2Ag(NH3)2OH

水浴中⑤與重金屬離子反應(yīng)沉淀反應(yīng)鑒別法2+CoCl2H+亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀利多卡因向供試品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成氣體。

氣體生成反應(yīng)鑒別法①胺類(lèi)、酰脲類(lèi)、酰胺類(lèi)藥物經(jīng)強(qiáng)堿處理生成氨氣氣體生成反應(yīng)鑒別法紅色石蕊試紙變藍(lán)硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的試紙顯黑色②化學(xué)結(jié)構(gòu)含硫藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后加熱產(chǎn)生硫化氫氣體硫鳥(niǎo)嘌呤●7H2O強(qiáng)酸?H2S氣體生成反應(yīng)鑒別法（臭雞蛋氣味）醋酸鉛試紙變黑③含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱可生成紫色碘蒸汽氣體生成反應(yīng)鑒別法?I2紫色④含醋酸酯和乙酰胺類(lèi)的藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。氣體生成反應(yīng)鑒別法硫酸乙醇有香味如：硫酸奎寧溶液顯藍(lán)色熒光熒光反應(yīng)鑒別法①藥物本身在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光如：氯普噻噸+HNO3后，紫外下顯綠色熒光反應(yīng)鑒別法②藥物與適當(dāng)試劑反應(yīng)后發(fā)射熒光色譜鑒別法色譜法是以試樣組分在固定相和流動(dòng)相間的溶解、吸附、分配、離子交換或其他親和作用的差異為依據(jù)而建立起來(lái)的各種分離分析方法。加入石油醚分層胡蘿卜素葉黃素葉綠素A、B原理:基于物質(zhì)在不同相之間具有不同的分配系數(shù)引起的分離1906，俄國(guó)植物學(xué)家茨維特固定相（stationaryphase）：色譜法中，填入柱管內(nèi)靜止不動(dòng)的一相（固體或液體）稱(chēng)為固定相。流動(dòng)相(mobilephase)：攜帶樣品流過(guò)固定相的流體（一般是氣體或液體）稱(chēng)為流動(dòng)相。色譜柱(chromatographycolumn)：裝有固定相的管子稱(chēng)為色譜柱。流動(dòng)相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）樣品（溶解于流動(dòng)相中的溶質(zhì)）分離是一個(gè)物理的過(guò)程

任何色譜法都存在兩個(gè)相，即流動(dòng)相和固定相；流動(dòng)相可以是氣體或液體，固定相為固體或涂漬在固體表面的高沸點(diǎn)液體；流動(dòng)相對(duì)固定相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，它攜帶樣品通過(guò)固定相；被分離樣品中各組分與色譜兩相間具有不同的作用力，這種作用力一般表現(xiàn)為吸附力或溶解能力，正是這種作用力的差異導(dǎo)致通過(guò)各組分通過(guò)固定相時(shí)達(dá)到彼此分離。色譜法的共同特點(diǎn)色譜鑒別法是利用藥物在一定的色譜條件下，產(chǎn)生特征色譜行為，利用其特征參數(shù)（比移值或保留時(shí)間）進(jìn)行鑒別。比較藥物的色譜行為及特征參數(shù)的檢驗(yàn)結(jié)果是否與藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的一致，以此來(lái)驗(yàn)證藥物真?zhèn)蔚姆椒ā?/p>

柱色譜法平面色譜法高效液相色譜法highperformanceliquidchromatography（HPLC）氣相色譜法gaschromatography（GC）色譜鑒別法薄層色譜法thin-layerchromatography(TLC)紙色譜法paperchromatography（PC）薄層色譜鑒別法色譜鑒別法是將供試品及規(guī)定的對(duì)照品按相同的方法，控制相同的條件點(diǎn)樣與同一薄層板上，經(jīng)展開(kāi)、檢視所得的色譜斑點(diǎn)做對(duì)比，進(jìn)行藥物的鑒別。一般采用對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法，要求供試品與對(duì)照品主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)一致。一種物質(zhì)在固定的條件下有固定的Rf值，不同物質(zhì)在相同的條件下可有不同的Rf值。因此，未知物與已知物（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）在相同條件下比較Rf值可提供定性依據(jù)。薄層色譜鑒別法常用的鑒別法①同等條件下，供試品與對(duì)照品在同一塊薄層板比較②供試品與對(duì)照品等體積混合在同一塊薄層板比較③供試品與和其化學(xué)結(jié)構(gòu)相似對(duì)照品比較④將③下兩溶液等體積混合點(diǎn)樣、比較對(duì)照品樣品混合薄層色譜鑒別法常用的鑒別法對(duì)照品樣品混合①同等條件下，供試品與對(duì)照品在同一塊薄層板比較——供試品所顯的主斑點(diǎn)顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)與對(duì)照品所顯的主斑點(diǎn)一致，而且主斑點(diǎn)大小與顏色深淺也應(yīng)大致相同；②供試品與對(duì)照品等體積混合在同一塊薄層板比較——應(yīng)顯單一、緊致的斑點(diǎn)；③供試品與和其化學(xué)結(jié)構(gòu)相似對(duì)照品比較——主斑點(diǎn)應(yīng)顯兩個(gè)不同（Rf）的斑點(diǎn)薄層色譜鑒別法色譜鑒別法薄層色譜法具有專(zhuān)屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、實(shí)驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。在鑒別試驗(yàn)中，薄層色譜法是色譜法中應(yīng)用最廣的一種方法高效液相色譜、氣相色譜法色譜鑒別法高效液相色譜法是特指一種用液體為流動(dòng)相的色譜分離分析方法。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué)鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專(zhuān)用檢測(cè)器等新實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。氣相色譜法是特指一種用氣體為流動(dòng)相的色譜分離分析方法。

在色譜條件及操作條件一定的情況下，被測(cè)物質(zhì)（藥物）在色譜柱上的保留值（保留時(shí)間或保留體積）是一定的，要求與對(duì)照品的一致。流動(dòng)相

泵色譜柱檢測(cè)器

泵輸液分離

檢測(cè)

記錄AEGBCDF進(jìn)樣閥進(jìn)樣液相色譜組成溶劑真