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文檔簡介

ICS65.020.01

B15

GB

中華人民共和國國家標準

GB/T****.1-****

小麥抗病蟲性評價技術(shù)規(guī)范

第1部分:小麥抗條銹病評價技術(shù)規(guī)范

Rulesforresistanceevaluationofwheattodiseasesandinsectpests

Part1:Ruleforresistanceevaluationofwheattoyellowrust(Puccinia

striiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn.)

20**-**-**發(fā)布實施

20**-**-**

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標準化管理委員會

GB/T****.1—****

小麥抗病蟲性評價技術(shù)規(guī)范

第1部分:小麥抗條銹病評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小麥抗條銹病鑒定技術(shù)和抗性評價方法。

本文件適用于普通小麥(包括選育品種/系、地方品種、特殊遺傳材料、近等基因系、重組自交系、

DH群體)、雜交小麥、轉(zhuǎn)基因小麥、其它栽培小麥種、野生小麥、小麥野生近緣種對小麥條銹病

抗性的田間鑒定和評價。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1

抗病性diseaseresistance

植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。

2.2

慢銹性slowrusting

在適于病害發(fā)生的環(huán)境條件下,寄主植物和病原物相互作用表現(xiàn)侵染型為3型-4型的感病反應(yīng),

但田間病害發(fā)展速度相對較慢,終期病情指數(shù)低于25。

2.3

致病性pathogenicity

病原物所具有的破壞寄主和引起病變的能力。

2.4

人工接種artificialinoculation

在適宜條件下,通過人工操作將接種體放于植物體感病部位并使之發(fā)病的過程。

2.5

病情級別diseaseratingscale

植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。

2.6

抗性評價evaluationofresistance

根據(jù)采用的技術(shù)標準判別寄主植物對特定病蟲害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。

2.7

分離物isolate

采用人工方法從植物發(fā)病部位獲得的在特定環(huán)境條件下培養(yǎng)的病原物。

2.8

接種體inoculum

能夠侵染寄主并引起病害的病原體。

2.9

生理小種physiologicalrace

病原菌種、變種或?qū);蛢?nèi)的分類單位,各生理小種之間形態(tài)上無差異、但對具有不同抗病基因的

鑒別品種的致病力存在差異。

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2.10

鑒別寄主differentialhost

用于鑒定和區(qū)分特定病原菌生理小種或菌系的一套帶有不同抗性基因的寄主品種。

2.11

普遍率incidence

或稱發(fā)病率,發(fā)病植物體單元數(shù)占調(diào)查植物體單元總數(shù)的百分率,用以表示發(fā)病的普遍程度。在本

文件中,植物體單元為葉片。

2.12

嚴重度severity

發(fā)病植物單元上發(fā)病面積或體積占該單元總面積或總體積的百分率,亦可用分級法表示,即將發(fā)病

的嚴重程度由輕到重劃分出幾個級別,分別用一些代表值表示,說明病害發(fā)生的嚴重程度。

2.13

病情指數(shù)diseaseindex

是全面考慮發(fā)病率與嚴重度兩者的綜合指標。當嚴重度用分級代表值表示時,病情指數(shù)計算公式:

nn

DI(XiSi)/(XiSmax)100

i0i0

其中,DI為病情指數(shù),i為病級數(shù)(0~n),Xi為i級的單元數(shù),Si為i級嚴重度的代表值,Smax為

嚴重度最高級值,∑為累加符號,從0級(無病單位)開始累加。

當嚴重度用百分率表示時,則用以下公式計算:

DI=I×S×100

其中,I為普遍率,為嚴重度。

2.14

侵染型infectiontype

根據(jù)小麥過敏性壞死反應(yīng)有無和其強度劃分的病斑類型,用以表示小麥品種抗條銹病程度,按0、

0;、1、2、3、4六個類型記載,各類型可附加“+”或“-”號,以表示偏重或偏輕。

2.15

潛育期latentperiod

病菌侵染小麥建立寄生關(guān)系后到被接種小麥表現(xiàn)癥狀之前的這一時期稱為潛育期。

2.16

小麥條銹病wheatyellowrustorstriperust

由小麥條銹病菌PucciniastriiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn所引起的以葉部產(chǎn)生鐵銹狀病斑

癥狀的小麥病害。小麥條銹病主要危害葉片,也可危害葉鞘、莖稈和穗部。小麥受害后,葉片表面長出

褪綠斑,以后產(chǎn)生黃色粉皰,即病菌夏孢子堆,后期長出黑色皰斑,即病菌冬孢子堆。夏孢子堆鮮黃色,

窄長型至長橢圓形,成株期排列成條狀與葉脈平行,幼苗期不成行排列,形成以侵染點為中心的多重輪

狀。冬孢子堆狹長形,埋于表皮下,成條狀。

3病原物接種體制備

3.1條銹菌接種菌株分離

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采集具有典型條銹病病斑的小麥發(fā)病葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中,平展葉片,浸泡16h~24h,

用刀片刮取發(fā)病病斑,將刮下的夏孢子涂抹于感病品種銘賢169上,均勻噴霧,置于9℃~13℃的保濕

間內(nèi)黑暗保濕18h~24h,15d~17d后觀察發(fā)病情況,獲得分離物。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認為Puccinia

striiformisWest.f.sp.triticiEriksetHenn后,進行單孢純化,經(jīng)致病性測定后,擴繁保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2條銹菌分離菌株的生理小種鑒定

對用于抗性鑒定接種的條銹菌應(yīng)先進行生理小種鑒定。生理小種鑒定采用一套統(tǒng)一的鑒別寄主(見

附錄A),根據(jù)條銹菌與鑒別寄主相互作用產(chǎn)生的抗病或感病模式(見表A.1),確定不同菌株所屬的生

理小種。

3.3條銹菌繁殖和保存

3.3.1育苗

選用直徑為10cm,高度為10cm的花盆,裝富含有機質(zhì)的土壤,每盆播種20?!?5粒健康飽滿感

病品種銘賢169,覆土1cm,之后將育苗缽置于盛水的育苗盤內(nèi),使水從育苗缽底部緩慢吸收至土體表

面完全濕潤,移出,置于15℃~18℃溫室內(nèi)培養(yǎng)6d~8d,待用。

3.3.2接種和保濕

接種:在操作臺(或接種間)內(nèi)進行。首先用噴霧法凈化空氣,再用75%的乙醇對操作臺(接種

間)、接種針和手進行消毒。將待接種幼苗放在操作臺(接種間)上,在幼苗轉(zhuǎn)移時要套袋或采取其它

措施防止空氣中的孢子污染;寫標簽,記錄接種日期及接種的菌種編號;用手沾取小麥葉銹菌夏孢子(或

者從標樣保濕后刮取的少量夏孢子),接種到無菌苗的第一葉片上。

保濕:將接種后幼苗置于接種桶中,用清水噴霧,使葉片表面附著一層均勻的霧滴,密封,在9oC~

13oC黑暗條件下保濕18h~24h。

3.3.3菌種繁殖

菌種繁殖分為初繁和擴繁。

初繁:條銹菌夏孢子在銘賢169上繁殖。待繁菌苗銘賢169第一葉片全部展開后,從液氮中取出保

存菌種的安瓿瓶,在40oC~45oC溫水中活化5min,之后打開安瓿瓶,置于盛有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中,

于8oC~10oC黑暗條件下水化10h~12h。

初繁采取涂抹法:此法主要用于繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時應(yīng)用。從安瓿瓶或指形管中取

出少許條銹菌夏孢子放在潔凈的毛玻璃上,用滴管加入少量水,用接種針將條銹菌夏孢子與水拌勻備用。

另外用潔凈的手指沾清水或0.05%吐溫20(Tween20)水溶液將麥苗的葉片摩擦數(shù)次,去掉葉片表面的

蠟質(zhì)和茸毛,以利于菌液吸附于葉面上。用消毒過的接種針沾上調(diào)制好的孢子懸浮液,涂抹于麥葉正面,

插標簽,記錄接種日期及所用菌種。接種后把麥苗隨即放入保濕桶中,再用噴霧器噴霧,使麥苗和保濕

桶的內(nèi)壁沾滿霧滴,噴霧不能過量。噴霧后,馬上蓋嚴塑料薄膜或玻璃,把保濕桶放置在9oC~13oC黑

暗條件下保濕18h~24h。

在接種不同生理小種時,接種用的一切用具都要先行消毒,防止可能發(fā)生的污染。

擴繁:可采用涂抹法、掃抹法、噴(撒)粉法或噴霧法接種。

掃抹法:先將一葉期的銘賢169置于接種桶內(nèi),用0.05%的Tween20水溶液葉面噴灑,然后將發(fā)

病幼苗倒置,使病葉片在接種桶內(nèi)的無菌苗上掃抹3次~5次,再用0.05%的Tween20水溶液噴霧,使

葉片表面附著一層均勻的霧滴,密封,置于9oC~13oC黑暗條件下保濕18h~24h。

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噴(撒)粉法:小噴粉器(或用雙層紗布封口的玻璃試管)經(jīng)消毒、干燥后,按20:1~30:1的比

例均勻混合干燥滑石粉與條銹菌夏孢子粉。接種前,用手沾清水將葉片拂擦數(shù)次,以去掉葉片蠟質(zhì),用

噴霧器在麥苗上均勻噴上霧滴,隨即用噴粉器(或用雙層紗布封口的玻璃試管)將上述稀釋的孢子粉均

勻地噴灑(或抖落)到葉片上,再用清水噴霧,隨即放入保濕桶中,蓋上塑料薄膜,置于9oC~13oC黑

暗條件下保濕18h~24h。

噴霧法。用小型噴霧器將新制備好的孢子懸浮液(在小燒杯內(nèi),加入要接種的條銹菌孢子,先用少

量清水濕潤,攪成糊狀,按照2g:1000mL比例加入水,轉(zhuǎn)移至噴霧器內(nèi);或按10mg夏孢子:1mL無毒

輕量礦物油-Soltrol?170的比例稀釋成夏孢子懸浮液)噴在葉片已去除蠟質(zhì)的麥苗上,自然干燥15

min~30min,然后將麥苗放于保濕桶內(nèi)置于9oC~13oC黑暗條件下保濕18h~24h。

噴(撒)粉法及噴霧法適于對大量材料的接種鑒定。

3.3.4潛育發(fā)病

取出接種苗,置于可控溫度的溫室內(nèi)培養(yǎng)。保持晝溫15oC~19oC,夜溫10oC~14oC;光照強度:

6000Lux~10000Lux,光照時間:16h。待葉片顯斑時(接種后7d),剪去心葉,加玻璃罩隔離。接種

后約15d~17d,夏孢子即可成熟,待用。

3.3.5菌種收集

空氣凈化和器具消毒操作同3.3.2,輕取產(chǎn)孢麥苗小心橫放,用接種針輕輕抖動其葉片,使菌種散

落到玻璃罩內(nèi),移去麥苗,再輕敲玻璃罩,將菌種集中,裝入指形管。

3.3.6菌種保藏

根據(jù)待用時間的長短,菌種保藏可分短期保藏和長期保藏。

3.3.6.1短期保藏

當菌種在5d~6d內(nèi)使用時,將裝菌種的指形管放入盛有變色硅膠的干燥器內(nèi),置于0℃~5℃冰箱

中備用。

3.3.6.2長期保藏

當菌種將在第二年或更長時間使用時則可采用長期保藏。首先將菌種置于盛有變色硅膠的干燥器

內(nèi),放在0℃~5℃冰箱中干燥5d,然后移至安瓿管中,抽真空,封管,置于液氮或-80℃冰箱中。

4田間抗性鑒定

田間抗性鑒定在鑒定圃內(nèi)進行。

4.1鑒定圃選址

鑒定圃設(shè)置在小麥條銹病適發(fā)區(qū),選擇具備良好自然發(fā)病環(huán)境和可控灌溉條件、地勢平坦、土壤肥

沃的地塊。

4.2感病對照品種和誘發(fā)行品種選擇

鑒定所用感病對照和誘發(fā)行品種均采用銘賢169。

4.3鑒定圃田間配置及大田播種

4.3.1田間配置

鑒定圃采用開畦條播、等行距配置方式。畦埂寬50cm,畦寬250cm,畦長視地形、地勢而定;距

畦埂125cm處順畦種1行誘發(fā)行,在誘發(fā)行兩側(cè)20cm橫向種植鑒定材料,行長100cm,行距33cm,

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重復(fù)1次~3次,順序排列,編號,鑒定圃四周設(shè)100cm寬的保護區(qū)。

說明::矩形框表示畦??;

:實線表示誘發(fā)行和對照品種;

:表示鑒定材料

圖1鑒定圃田間配置示意圖

4.3.2播種

4.3.2.1播種時間

播種時間與大田生產(chǎn)一致,或適當調(diào)整不同材料的播期以使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候

條件(濕度與溫度)相遇。冬性材料按當?shù)貧夂蛘G锊?,弱冬性材料晚秋播,春性材料頂凌春播?/p>

4.3.2.2播種方式及播種量

采用人工開溝,條播方式播種。每份材料播種1行,每隔20份鑒定材料播種1行感病對照品種銘

賢169,鑒定材料每行均勻播種100粒;誘發(fā)行按每100cm行長均勻播種100粒。

4.4接種

4.4.1接種期

小麥條銹病抗性鑒定接種期為小麥拔節(jié)初期。選擇晴朗無風(fēng)天的傍晚進行。

4.4.2接種方法

采用夏孢子懸浮液噴霧法、噴(撒)粉法或注射法接種誘發(fā)行,利用誘發(fā)行發(fā)病后產(chǎn)生的夏孢子再

傳播侵染鑒定材料。根據(jù)鑒定需要選擇單小種或混合小種。具體操作是將所選生理小種的夏孢子粉用數(shù)

滴0.05%的Tween20水溶液調(diào)成糊狀,按2g孢子:1000mL水比例稀釋成夏孢子懸浮液。誘發(fā)行每隔500cm

設(shè)100cm長的接種段,用手持式噴霧器將夏孢子懸浮液均勻噴灑在接種段的小麥葉片上,之后速覆蓋

塑料薄膜,四周用土壓嚴,次日清晨揭去薄膜。

注射法。此法多用于麥苗有一定生長高度的拔節(jié)期。接種前,應(yīng)配制好孢子懸浮液(配制方法同噴

霧法),一般在誘發(fā)行上每隔100cm左右選取10個~20個單莖分別注射接種。其方法是用注射器將孢

子懸浮液從小麥心葉與其下的展開葉葉鞘相接處以下約1cm處注射,針頭易向下傾斜刺入,但不要刺

穿,擠壓少量懸浮液,以見到心葉處冒出水珠為度。懸浮液必須隨用隨攪拌或震蕩。田間接種注射最好

在陰天的傍晚進行。如天氣干旱,接種后在接種點上澆水1次~2次,也可以在接種前或接種后適當灌

水。

再次接種時,間隔3d~5d,并選擇誘發(fā)行不同的接種段接種。

4.5接種前后田間管理

在接種前6d~7d應(yīng)先進行田間灌溉,或在雨后接種;接種后若遇持續(xù)干旱,應(yīng)及時進行田間澆灌,

不施用任何殺菌劑。

4.6病情調(diào)查及記載標準

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4.6.1調(diào)查時間

在小麥乳熟期進行病情調(diào)查。

4.6.2調(diào)查方法及項目

調(diào)查時每份材料隨機抽樣20個~50個葉片(主要為旗葉),逐葉進行調(diào)查記載嚴重度、侵染型,計

算普遍率、平均嚴重度和病情指數(shù),調(diào)查2次,間隔10d。

4.6.3發(fā)病程度記載及標準

4.6.3.1侵染型記載及標準

病斑侵染型按0、0;、1、2、3、4六個類型劃分,其劃分標準見表1,各類型可附加“+”或“-”

號,以表示偏重或偏輕,用以表示小麥品種抗銹程度。每一鑒定材料隨機調(diào)查20片~50片葉,逐葉調(diào)

查記載侵染型,當發(fā)現(xiàn)同一葉片上出現(xiàn)不同侵染型時,主要侵染型記錄在前。

表1小麥條銹病侵染型級別及其癥狀描述

侵染型癥狀描述

0葉上不產(chǎn)生任何可見的癥狀

0;葉上產(chǎn)生小型枯死斑,不產(chǎn)生夏孢子堆

1葉上產(chǎn)生枯死條點或條斑,夏孢子堆很小,數(shù)目很少

2夏孢子堆小到中等大小,較少,其周圍葉組織枯死或顯著褪綠

3夏孢子堆較大、較多,其周圍葉組織有褪綠現(xiàn)象

4夏孢子堆大而多,周圍不褪綠

注:侵染型級別經(jīng)常用如下符號進行精細劃分,即“-”表示夏孢子堆較其相應(yīng)正常侵染型的夏

孢子堆略??;“+”:表示夏孢子堆較其相應(yīng)正常侵染型的夏孢子堆略大。

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圖小麥條銹病苗期和成株期分級標準圖(引自ChenXM.2020.FoodSecurity.)

4.6.3.2嚴重度記載及標準

嚴重度用分級法表示,設(shè)0、1%、5﹪、10﹪、20﹪、40﹪、60﹪、80﹪、100﹪九級。調(diào)查時每

份材料隨機抽樣20片~50片葉,逐葉記載嚴重度,計算平均嚴重度。

nn

×%

S(%)(XiSi)/Xi100

i1i1

其中,S為平均嚴重度,i為病級數(shù)(1~n),Xi為病情為i級的單元數(shù),Si為病情為i級的嚴重度值

(如小麥條銹病各級的百分數(shù))。

4.6.3.3普遍率記載及標準

每一鑒定材料隨機調(diào)查20片~50片葉,計數(shù)發(fā)病葉片數(shù),計算普遍率。

普遍率(%)=(發(fā)病葉片數(shù)/調(diào)查總?cè)~片數(shù))×100%

4.7抗性評價

4.7.1鑒定有效性判別

當鑒定圃中的感病或高感對照品種發(fā)病嚴重度達到60%以上,該批次抗條銹病鑒定視為有效。

4.7.2重復(fù)鑒定

初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、中抗的材料,次年需用相同的病原菌進行重復(fù)鑒定。

4.7.3抗性評價標準

依據(jù)鑒定材料發(fā)病程度(病情指數(shù)和侵染型)確定其對條銹病的抗性水平,其評價標準見表2。如

果兩年鑒定結(jié)果不一致,以抗性弱的發(fā)病程度為準。若一個鑒定群體中出現(xiàn)明顯的抗、感類型差異,應(yīng)

在調(diào)查表中注明“抗性分離”,其比例以“/”隔開。

表2小麥對條銹病抗性評價標準

侵染型病情指數(shù)抗性評價

0-免疫Immune(I)

0;-近免疫Nearlyimmune(NIM)

1-高抗HighlyResistant(HR)

2-中抗Moderatelyresistant(MR)

3~4≤25慢銹Slowrusting(SR)

3>25中感Moderatelysusceptible(MS)

4>25高感HighlySusceptible(HS)

5鑒定記載表格

小麥抗條銹病鑒定原始記錄及結(jié)果記載表格見附錄B。

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附錄A

(資料性附錄)

小麥條銹病病原菌和生理小種

A.1學(xué)名和形態(tài)描述

條形柄銹菌小麥?;蚉ucciniastriiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn.

屬真菌界(Fungi)、擔子菌門(Basidiomycota)、柄銹菌亞門Pucciniomycotina、柄銹菌

綱Pucciniomycetes、柄銹菌目Pucciniales、柄銹菌科(Puccinaceae)、柄銹菌屬(Puccinia)。

菌絲絲狀,有分隔,生長在寄主細胞間,用吸器進入小麥細胞吸取養(yǎng)料,在病部產(chǎn)生孢子堆。

夏孢子單胞球形,鮮黃色,表面有細刺,大?。?2~40)μm×(22~29)μm,有發(fā)芽孔6~

12個。冬孢子雙胞,棍棒形,頂部扁平或斜切,分隔處略縊縮,大小(36~68)μm×(12~

20)μm,柄短。該菌致病性有生理分化現(xiàn)象,我國已定名34個生理小種,分別為條中1號~

34號,條銹菌生理小種很易發(fā)生變異,1950年以后已出現(xiàn)過多次優(yōu)勢小種的改變。

A.2生理小種鑒定方法

A.2.1采用的鑒別寄主

生理小種鑒別寄主采用TrigoEureka.,F(xiàn)ulhard,保春128(Lutescens128),南大2419

(Mentana),維爾(Virgilio),阿勃(Abbondanza),早洋(EarlyPremium),阿夫(Funo),

丹麥1號(Danish1),尤皮2號(Jubilejina2),豐產(chǎn)3號(Fengchan3),洛夫林13(Lovrin13),

抗引655(Kangyin655),水源11(Shuiyuan11),中四(Zhong4),洛夫林10(Lovrin10),

Hybrid46,Triticumspeltaalbum和貴農(nóng)22(Guinong22)共19個小麥品種。

A.2.2條銹菌生理小種編碼規(guī)則與命名

中國小麥條銹菌生理小種和致病類型及其在鑒別寄主上的反應(yīng)見表A.1。

表A.1中國小麥條銹菌生理小種和致病類型及其在鑒別寄主上的反應(yīng)

洛10類群洛13類群Hybrid46類群水源11類群貴農(nóng)22類群

條條條條條條條條

條洛洛條洛洛洛條條條HHHHHH水水水水水水條貴貴貴

中中中中中中中中

鑒別寄主中1010中131313中中中YYYYYY111111111111中222222

1718212223242526

282930313234-1-1-2

號號號號號號號號

號26號238號號號45678945671314號40845

1.T.E.HLLHLHHHLHLHLHHHHHHHHHHHLHHLLHLHLHHHHHLHSSSS

2.FulhardHLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

3.保春128LHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

4.南大2419HLLHHLHHHHLHLHLHHHHHHHHHHHHHHHLHHHSSSS

5.維爾LLLLLLHLHLLHLHHHHHHHLHHLHLHLLHLLHLLHLSSSS

6.阿勃HLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

7.早洋HLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

8.阿夫LLHHLHHHHLHHHHHHHHHHHHHHLHHHHHHHHHSSSS

9.丹麥1號LHHLHLHLHLHHHHHHHHHHHHHHLHHHHHHHHHSSSS

10.尤皮Ⅱ號LLHHLLLLLLHLLHHLLHHHLHHHHLHLHLHHSSSS

11.豐產(chǎn)3號LHLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

12.洛夫林13LLLLLLLLLLLHHHHHHHLLLHHLLLLHLHSSSS

13.抗引655LLLHLLLLLLLLLHLLLHHHLHLHHLLLLHSSSS

14.水源11LLLLLLLLLLLLLLLLHHHHHHHHHHHHHHSSSR

15.中四LLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRRRR

16.洛夫林10LLLLLLLLHHHHHHHHHHHHLHHLHHLHLHSSRS

17.Hybrid46LLLLLLLLLLLLLLLHHHHHHHHHLLLLLLSRSS

18.T.speltaalbumLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRRRR

19.貴農(nóng)22LLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLSSRS

注:“L”表示抗病侵染型(0~2);“H”表示感病侵染型(3~4);表中僅列出部分主要生理小種在鑒別寄主上的反應(yīng)

9

GB/T****.1—****

附錄B

(規(guī)范性附錄)

表B年小麥品種(系)抗條銹病鑒定原始記錄及結(jié)果記載表

病情級別

鑒定結(jié)果

嚴重度(%)普遍率(%)

編號品種名稱來源病情指數(shù)

侵染型

0151020406080100平均調(diào)查發(fā)病葉片數(shù)調(diào)查總?cè)~片數(shù)平均

注1:鑒定地點地勢

注2:接種病原菌分離物編號生理小種類型

注3:接種日期調(diào)查日期

注4:播種日期

注5:海拔高度m經(jīng)度緯度

鑒定技術(shù)負責(zé)人(簽字):

GB/T****.1—****

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)

定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責(zé)任。

GB/T****-****《小麥抗病蟲性評價技術(shù)規(guī)范》為系列文件。

第1部分:小麥抗條銹病評價技術(shù)規(guī)范;

第2部分:小麥抗葉銹病評價技術(shù)規(guī)范;

第3部分:小麥抗稈銹病評價技術(shù)規(guī)范;

第4部分:小麥抗赤霉病評價技術(shù)規(guī)范;

第5部分:小麥抗紋枯病評價技術(shù)規(guī)范;

第6部分:小麥抗黃矮病評價技術(shù)規(guī)范。

第7部分:小麥抗蚜蟲評價技術(shù)規(guī)范;

第8部分:小麥抗吸漿蟲評價技術(shù)規(guī)范。

本文件為GB/T****的第1部分。

本文件附錄A為資料性附錄,附錄B為規(guī)范性附錄。

本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出。

本文件由全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心歸口。

本文件起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所。

本文件主要起草人:陳萬權(quán)、劉太國、陳巨蓮、徐世昌。

GB/T****.1—****

小麥抗病蟲性評價技術(shù)規(guī)范

第1部分:小麥抗條銹病評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小麥抗條銹病鑒定技術(shù)和抗性評價方法。

本文件適用于普通小麥(包括選育品種/系、地方品種、特殊遺傳材料、近等基因系、重組自交系、

DH群體)、雜交小麥、轉(zhuǎn)基因小麥、其它栽培小麥種、野生小麥、小麥野生近緣種對小麥條銹病

抗性的田間鑒定和評價。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1

抗病性diseaseresistance

植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。

2.2

慢銹性slowrusting

在適于病害發(fā)生的環(huán)境條件下,寄主植物和病原物相互作用表現(xiàn)侵染型為3型-4型的感病反應(yīng),

但田間病害發(fā)展速度相對較慢,終期病情指數(shù)低于25。

2.3

致病性pathogenicity

病原物所具有的破壞寄主和引起病變的能力。

2.4

人工接種artificialinoculation

在適宜條件下,通過人工操作將接種體放于植物體感病部位并使之發(fā)病的過程。

2.5

病情級別diseaseratingscale

植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。

2.6

抗性評價evaluationofresistance

根據(jù)采用的技術(shù)標準判別寄主植物對特定病蟲害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。

2.7

分離物isolate

采用人工方法從植物發(fā)病部位獲得的在特定環(huán)境條件下培養(yǎng)的病原物。

2.8

接種體inoculum

能夠侵染寄主并引起病害的病原體。

2.9

生理小種physiologicalrace

病原菌種、變種或?qū);蛢?nèi)的分類單位,各生理小種之間形態(tài)上無差異、但對具有不同抗病基因的

鑒別品種的致病力存在差異。

GB/T****.1—****

2.10

鑒別寄主differentialhost

用于鑒定和區(qū)分特定病原菌生理小種或菌系的一套帶有不同抗性基因的寄主品種。

2.11

普遍率incidence

或稱發(fā)病率,發(fā)病植物體單元數(shù)占調(diào)查植物體單元總數(shù)的百分率,用以表示發(fā)病的普遍程度。在本

文件中,植物體單元為葉片。

2.12

嚴重度severity

發(fā)病植物單元上發(fā)病面積或體積占該單元總面積或總體積的百分率,亦可用分級法表示,即將發(fā)病

的嚴重程度由輕到重劃分出幾個級別,分別用一些代表值表示,說明病害發(fā)生的嚴重程度。

2.13

病情指數(shù)diseaseindex

是全面考慮發(fā)病率與嚴重度兩者的綜合指標。當嚴重度用分級代表值表示時,病情指數(shù)計算公式:

nn

DI(XiSi)/(XiSmax)100

i0i0

其中,DI為病情指數(shù),i為病級數(shù)(0~n),Xi為i級的單元數(shù),Si為i級嚴重度的代表值,Smax為

嚴重度最高級值,∑為累加符號,從0級(無病單位)開始累加。

當嚴重度用百分率表示時,則用以下公式計算:

DI=I×S×100

其中,I為普遍率,為嚴重度。

2.14

侵染型infectiontype

根據(jù)小麥過敏性壞死反應(yīng)有無和其強度劃分的病斑類型,用以表示小麥品種抗條銹病程度,按0、

0;、1、2、3、4六個類型記載,各類型可附加“+”或“-”號,以表示偏重或偏輕。

2.15

潛育期latentperiod

病菌侵染小麥建立寄生關(guān)系后到被接種小麥表現(xiàn)癥狀之前的這一時期稱為潛育期。

2.16

小麥條銹病wheatyellowrustorstriperust

由小麥條銹病菌PucciniastriiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn所引起的以葉部產(chǎn)生鐵銹狀病斑

癥狀的小麥病害。小麥條銹病主要危害葉片,也可危害葉鞘、莖稈和穗部。小麥受害后,葉片表面長出

褪綠斑,以后產(chǎn)生黃色粉皰,即病菌夏孢子堆,后期長出黑色皰斑,即病菌冬孢子堆。夏孢子堆鮮黃色,

窄長型至長橢圓形,成株期排列成條狀與葉脈平行,幼苗期不成行排列,形成以侵染點為中心的多重輪

狀。冬孢子堆狹長形,埋于表皮下,成條狀。

3病原物接種體制備

3.1條銹菌接種菌株分離

GB/T****.1—****

采集具有典型條銹病病斑的小麥發(fā)病葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中,平展葉片,浸泡16h~24h,

用刀片刮取發(fā)病病斑,將刮下的夏孢子涂抹于感病品種銘賢169上,均勻噴霧,置于9℃~13℃的保濕

間內(nèi)黑暗保濕18h~24h,15d~17d后觀察發(fā)病情況,獲得分離物。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認為Puccinia

striiformisWest.f.sp.triticiEriksetHenn后,進行單孢純化,經(jīng)致病性測定后,擴繁保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2條銹菌分離菌株的生理小種鑒定

對用于抗性鑒定接種的條銹菌應(yīng)先進行生理小種鑒定。生理小種鑒定采用一套統(tǒng)一的鑒別寄主(見

附錄A),根據(jù)條銹菌與鑒別寄主相互作用產(chǎn)生的抗病或感病模式(見表A.1),確定不同菌株所屬的生

理小種。

3.3條銹菌繁殖和保存

3.3.1育苗

選用直徑為10cm,高度為10cm的花盆,裝富含有機質(zhì)的土壤,每盆播種20?!?5粒健康飽滿感

病品種銘賢169,覆土1cm,之后將育苗缽置于盛水的育苗盤內(nèi),使水從育苗缽底部緩慢吸收至土體表

面完全濕潤,移出,置于15℃~18℃溫室內(nèi)培養(yǎng)6d~8d,待用。

3.3.2接種和保濕

接種:在操作臺(或接種間)內(nèi)進行。首先用噴霧法凈化空氣,再用75%的乙醇對操作臺(接種

間)、接種針和手進行消毒。將待接種幼苗放在操作臺(接種間)上,在幼苗轉(zhuǎn)移時要套袋或采取其它

措施防止空氣中的孢子污染;寫標簽,記錄接種日期及接種的菌種編號;用手沾取小麥葉銹菌夏孢子(或

者從標樣保濕后刮取的少量夏孢子),接種到無菌苗的第一葉片上。

保濕:將接種后幼苗置于接種桶中,用清水噴霧,使葉片表面附著一層均勻的霧滴,密封,在9oC~

13oC黑暗條件下保濕18h~24h。

3.3.3菌種繁殖

菌種繁殖分為初繁和擴繁。

初繁:條銹菌夏孢子在銘賢169上繁殖。待繁菌苗銘賢169第一葉片全部展開后,從液氮中取出保

存菌種的安瓿瓶,在40oC~45oC溫水中活化5min,之后打開安瓿瓶,置于盛有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中,

于8oC~10oC黑暗條件下水化10h~12h。

初繁采取涂抹法:此法主要用于繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時應(yīng)用。從安瓿瓶或指形管中取

出少許條銹菌夏孢子放在潔凈的毛玻璃上,用滴管加入少量水,用接種針將條銹菌夏孢子與水拌勻備用。

另外用潔凈的手指沾清水或0.05%吐溫20(Tween20)水溶液將麥苗的葉片摩擦數(shù)次,去掉葉片表面的

蠟質(zhì)和茸毛,以利于菌液吸附于葉面上。用消毒過的接種針沾上調(diào)制好的孢子懸浮液,涂抹于麥葉正面,

插標簽,記錄接種日期及所用菌種。接種后把麥苗隨即放入保濕桶中,再用噴霧器噴霧,使麥苗和保濕

桶的內(nèi)壁沾滿霧滴,噴霧不能過量。噴霧后,馬上蓋嚴塑料薄膜或玻璃,把保濕桶放置在9oC~13oC黑

暗條件下保濕18h~24h。

在接種不同生理小種時,接種用的一切用具都要先行消毒,防止可能發(fā)生的污染。

擴繁:可采用涂抹法、掃抹法、噴(撒)粉法或噴霧法接種。

掃抹法:先將一葉期的銘賢169置于接種桶內(nèi),用0.05%的Tween20水溶液葉面噴灑,然后將發(fā)

病幼苗倒置,使病葉片在接種桶內(nèi)的無菌苗上掃抹3次~5次,再用0.05%的Tween20水溶液噴霧,使

葉片表面附著一層均勻的霧滴,密封,置于9oC~13oC黑暗條件下保濕18h~24h。

GB/T****.1—****

噴(撒)粉法:小

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