WS-T 491-2024 梅毒非特異性抗體檢測(cè)指南

ICS11.020CCSC50WS代替WS/T491—2016Guidelineofnon-treponemaltestsforsyphilisIWS/T491—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4縮略語(yǔ) 5檢測(cè)原理與方法 26標(biāo)本采集和處理 27儀器和器材 38實(shí)驗(yàn)操作步驟 59結(jié)果描述和表示 710質(zhì)量控制 811臨床意義 12局限性 附錄A（規(guī)范性）抗干擾性能初步評(píng)估 13附錄B（規(guī)范性）抗干擾性能評(píng)估—驗(yàn)證廠家聲明 14附錄C（規(guī)范性）水平旋轉(zhuǎn)儀關(guān)鍵技術(shù)參數(shù) 15參考文獻(xiàn) WS/T491—2024本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)代替WS/T491—2016《梅毒非特異性抗體檢測(cè)操作指南》。與WS/T491—2016相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：——增加了規(guī)范性引用文件（見(jiàn)第2章）；——增加了術(shù)語(yǔ)和定義中“前帶現(xiàn)象”和“賈-赫反應(yīng)”（見(jiàn)3.1和3.2——增加了水平旋轉(zhuǎn)儀中“固定反應(yīng)程序”（見(jiàn)7.1.1.3）；——增加了實(shí)驗(yàn)操作步驟中“腦脊液標(biāo)本的檢測(cè)”（見(jiàn)8.3.4和8.3.5——增加了報(bào)告格式概述、質(zhì)量控制概述（見(jiàn)9.3和10）；——增加了臨床意義中“檢測(cè)策略”（見(jiàn)11.1）；——增加了附錄C水平旋轉(zhuǎn)儀關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)等（見(jiàn)附錄C）；——更改了標(biāo)本采集和標(biāo)本處理的部分條款（見(jiàn)第6章，見(jiàn)2016年版的第7章——?jiǎng)h除了縮略語(yǔ)中轉(zhuǎn)速條款（見(jiàn)2016年版的第4章）。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)負(fù)責(zé)技術(shù)審查和技術(shù)咨詢，由國(guó)家衛(wèi)生健康委醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)性和格式審查，由國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)醫(yī)政司負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)管理、法規(guī)司負(fù)責(zé)統(tǒng)籌管理。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海市皮膚病醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院、廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院、上海市臨床檢驗(yàn)中心、四川大學(xué)華西醫(yī)院、中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病控制中心、北京大學(xué)第一醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：顧偉鳴、郭瑋、楊天賜、孫自鏞、王慶忠、陶傳敏、劉家云、尹躍平、馮珍如、趙敏。本標(biāo)準(zhǔn)于2016年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。1WS/T491—2024梅毒非特異性抗體檢測(cè)指南本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梅毒非特異性抗體檢測(cè)的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開(kāi)展梅毒非特異性抗體檢測(cè)的相關(guān)機(jī)構(gòu)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T22576.1—2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用要求GB/T22576.5醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求第5部分：臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的要求WS/T661靜脈血液標(biāo)本采集指南3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)3.1前帶現(xiàn)象prozonephenomenon前帶現(xiàn)象是一種抗原-抗體免疫反應(yīng)現(xiàn)象?；颊哐逯写嬖诟邼舛鹊目贵w時(shí)，檢測(cè)時(shí)血清標(biāo)本中的抗體量顯著多于抗原量，抗原抗體量的比例不合適，所形成的免疫復(fù)合物反而減少，不出現(xiàn)凝集或者凝集反應(yīng)減弱的假陰性。當(dāng)血清稀釋后再檢測(cè)呈現(xiàn)高滴度陽(yáng)性結(jié)果的現(xiàn)象。注1：部分現(xiàn)癥患者的梅毒非特異性抗體檢測(cè)可發(fā)生前帶現(xiàn)象。梅毒患者有特征性的臨床表現(xiàn)，其血清標(biāo)本的定性實(shí)驗(yàn)可顯示陰性反應(yīng)或弱凝集反應(yīng)，血清經(jīng)過(guò)梯度倍比稀釋后，半定量實(shí)驗(yàn)的凝集反應(yīng)由弱到強(qiáng)，再逐步減弱。注2：12％二期梅毒、0.51％一期梅毒、少數(shù)晚期梅毒患者的梅毒非特異性實(shí)3.2賈-赫反應(yīng)Jarisch-Herxheimerreaction賈-赫反應(yīng)指在第一次抗梅毒治療后24h內(nèi)，其癥狀反應(yīng)加重。這是由于抗梅毒藥物殺滅了梅毒螺旋體，而釋放大量異種蛋白及內(nèi)毒素，被患者吸收后在病損處或體內(nèi)發(fā)生加劇癥狀的反應(yīng)。3.3血清固定serofast血清固定指患者經(jīng)過(guò)規(guī)范抗梅毒治療和一定時(shí)間的隨訪，其梅毒非特異性抗體水平維持在相對(duì)恒定的低滴度狀態(tài)。注1：判斷血清固定應(yīng)具備3個(gè)要素：1.流行病學(xué)病史和臨床表現(xiàn)排除復(fù)發(fā)、再感染；2.經(jīng)過(guò)抗梅毒治療后，連續(xù)2），注2：晚期梅毒患者的血清固定發(fā)生率達(dá)35.2％至44.4％。個(gè)別患者可終生血清固定。4縮略語(yǔ)下列縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2WS/T491—2024VDRL：性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)（VenerealDiseaseResearchLaboratorytest）RPR：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RapidPlasmaReaginCircleCardtest）EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）TRUST：甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)（ToluidineRedUnheatedSerumtest）RCF：相對(duì)離心率（RelativeCentrifugalForce）CSF：腦脊液（CerebrospinalFluid）r/min：每分鐘轉(zhuǎn)速（RevolutionsPerMinute）s/min：每分鐘秒（SecondsPerMinute）SOP:標(biāo)準(zhǔn)操作程序（StandardOperatingProcedure）5檢測(cè)原理與方法5.1原理宿主感染梅毒螺旋體后，被損害的宿主細(xì)胞及梅毒螺旋體本身釋放的類脂物質(zhì)，引起宿主產(chǎn)生IgM和IgG等抗類脂質(zhì)抗體。這類抗體在體外與含心磷脂、卵磷脂和膽固醇的抗原溶液發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生絮狀凝集現(xiàn)象，凝集的強(qiáng)弱程度與抗體濃度成正相關(guān)，在一定程度上反映梅毒螺旋體感染宿主的免疫活動(dòng)狀態(tài)。5.2方法5.2.1VDRL商品化試劑盒包含VDRL抗原、VDRL緩沖液和說(shuō)明書(shū)。VDRL抗原是含有心磷脂、卵磷脂和膽固醇的無(wú)水乙醇溶液。VDRL緩沖液含氯化鈉、40％甲醛（中性）水溶液、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀的磷酸鹽溶液，pH=6.0±0.1。用緩沖液新鮮配制的VDRL抗原工作液與標(biāo)本中的抗體發(fā)生反應(yīng)，在顯微鏡下可觀察到絮狀凝集。5.2.2RPR商品化試劑盒包含抗原、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品、抗原滴針、反應(yīng)板和說(shuō)明書(shū)。RPR是一種改良的VDRL實(shí)驗(yàn)，將VDRL抗原結(jié)合到作為示蹤物質(zhì)的炭顆粒上，當(dāng)抗原與標(biāo)本中的抗體發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生肉眼可觀察到的黑色絮狀凝集。RPR抗原溶液中添加氯化膽堿起到化學(xué)滅活效果，添加EDTA起到穩(wěn)定試劑性能的作用。5.2.3TRUST商品化試劑盒包含抗原、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品、抗原滴針、反應(yīng)板和說(shuō)明書(shū)。TRUST的檢測(cè)原理同RPR，將VDRL抗原結(jié)合到作為示蹤物質(zhì)的甲苯胺紅染料顆粒上，當(dāng)抗原與標(biāo)本中的抗體發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生肉眼可觀察到的紅色絮狀凝集。TRUST抗原溶液中氯化膽堿起到化學(xué)滅活效果，添加EDTA起到穩(wěn)定試劑性能的作用。6標(biāo)本采集和處理6.1標(biāo)本采集器和容器6.1.1采集血液標(biāo)本時(shí)，宜使用無(wú)添加劑或內(nèi)壁經(jīng)硅化處理的真空采集器。6.1.2含有添加劑（促凝劑、抗凝劑）的真空采集器，應(yīng)在使用前進(jìn)行抗干擾性能評(píng)估（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)附錄A和附錄B）。6.1.3采集新鮮全血標(biāo)本時(shí)，不應(yīng)直接注入普通塑料試管，以免血塊收縮不良。6.1.4宜使用潔凈、帶蓋（帽/塞）的玻璃試管收集CSF。3WS/T491—20246.2靜脈血液采集6.2.1靜脈血液標(biāo)本的采集和處理參照WS/T661的要求進(jìn)行。6.2.2非抗凝全血標(biāo)本在自然凝固、血塊充分收縮后，經(jīng)過(guò)低速離心，直接吸取血清進(jìn)行定性和半定量實(shí)驗(yàn)。6.2.3抗凝全血標(biāo)本在充分混勻后經(jīng)過(guò)低速離心，直接吸取血漿進(jìn)行定性實(shí)驗(yàn)。注：血清和血漿標(biāo)本采用RCF1200g至1700g離心15分鐘。6.3CSF采集6.3.1CSF采集遵從臨床診療操作規(guī)范。6.3.2通常每次CSF采集分段收集2～3管。宜使用第二管CSF標(biāo)本，離心后取上清進(jìn)行定性和半定量實(shí)驗(yàn)。6.4標(biāo)本驗(yàn)收原則上不合格標(biāo)本應(yīng)予以退回。如標(biāo)本不可代替，在與臨床醫(yī)師和護(hù)師充分溝通的情況下讓步檢驗(yàn)，報(bào)告中應(yīng)注明“標(biāo)本不合格，結(jié)果僅供參考”。以下標(biāo)本狀態(tài)可干擾檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性：a)靜脈血液標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血或脂血；b)CSF標(biāo)本出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)顆粒物質(zhì)；c)CSF標(biāo)本呈現(xiàn)肉眼可辨粉紅色，提示標(biāo)本在采集過(guò)程中可能被血液污染（相當(dāng)于每1mLCSF含有≥3μL血液，或含有紅細(xì)胞4×109個(gè)/L～12×109個(gè)/L）。6.5標(biāo)本保存6.5.1血清、血漿和CSF標(biāo)本應(yīng)保存在帶蓋試管或其他密閉容器中，以防止外源性污染、蒸發(fā)和泄漏。6.5.2血清和血漿標(biāo)本在4h內(nèi)檢測(cè)可置室溫存放；如8h至48h檢測(cè)應(yīng)置于2℃~8℃保存；預(yù)計(jì)超過(guò)48h檢測(cè)應(yīng)置于-20℃~-80℃凍存。標(biāo)本凍融不宜超過(guò)3次。6.5.3CSF標(biāo)本在4h內(nèi)檢測(cè)，可置室溫存放；5個(gè)連續(xù)檢測(cè)日內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)置2℃~8℃保存。CSF不應(yīng)凍存。注：凍存CSF標(biāo)本用于VDRL實(shí)驗(yàn)會(huì)降低檢測(cè)敏感性。凍存CSF標(biāo)本用于RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)對(duì)結(jié)果的影響不明確，需要更7儀器和器材7.1水平旋轉(zhuǎn)儀7.1.1基本要求7.1.1.1水平狀態(tài)轉(zhuǎn)速精度符合100±2r/min或180±2r/min。7.1.1.2時(shí)間控制精度符合±1s/min的要求。7.1.1.3電子控制部件可預(yù)設(shè)實(shí)驗(yàn)的固定反應(yīng)程序。常用固定反應(yīng)程序如下：a)VDRL-血清標(biāo)本的反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速180±2r/min；時(shí)間4min±4s；b)VDRL-CSF標(biāo)本的反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速180±2r/min；時(shí)間8min±8s；c)RPR/TRUST反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速100±2r/min；時(shí)間8min±8s。7.1.1.4水平旋轉(zhuǎn)儀具有數(shù)顯倒計(jì)時(shí)和蜂鳴的雙重提醒功能。4WS/T491—20247.1.2維護(hù)和校準(zhǔn)7.1.2.1每年至少一次對(duì)水平旋轉(zhuǎn)儀進(jìn)行校準(zhǔn)，并做好日常保養(yǎng)和維護(hù)，保存相應(yīng)記錄。最大允許誤差符合本標(biāo)準(zhǔn)第7.1.1條要求。7.1.2.2可自行制定程序化文件進(jìn)行日常維護(hù)和比對(duì)，并保存相關(guān)記錄。7.2反應(yīng)板7.2.1RPR/TRUST反應(yīng)板7.2.1.1商品化試劑盒中的反應(yīng)板上有若干個(gè)直徑18mm的反應(yīng)圓圈。7.2.1.2沿反應(yīng)圓圈內(nèi)側(cè)邊緣呈凹面，防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出。7.2.2VDRL反應(yīng)板7.2.2.1宜使用專用VDRL反應(yīng)板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。7.2.2.2用于血清標(biāo)本檢測(cè)的反應(yīng)板上有直徑14mm的反應(yīng)圓圈，沿圓圈邊緣的膠漆或陶瓷防溢環(huán)可防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出，反應(yīng)孔中間透明，便于直接在顯微鏡下觀察。7.2.2.3用于CSF標(biāo)本檢測(cè)的反應(yīng)板上有直徑16mm的反應(yīng)圓圈，反應(yīng)孔中間為深度1.75mm凹面，防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出，反應(yīng)孔中間透明，便于直接在顯微鏡下觀察。7.2.2.4使用紙質(zhì)反應(yīng)板代替玻璃板進(jìn)行VDRL實(shí)驗(yàn)時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后吸取反應(yīng)液體置載玻片上，覆上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。7.3微量移液器7.3.1基本要求7.3.1.1梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性依賴于抗原滴加量的精度。當(dāng)試劑盒配套的抗原滴針不符合量值標(biāo)化要求時(shí)，宜使用微量移液器。7.3.1.2宜使用50μL固定式微量移液器，吸取血清、血漿、CSF和無(wú)菌生理鹽水。7.3.1.3宜使用微量移液器吸取和滴加抗原，滴加抗原量應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)第7.4.2條至第7.4.5條的技術(shù)要求。7.3.1.4宜使用精準(zhǔn)適配微量移液器的聚丙烯材料移液吸頭，確保良好的密封性；吸頭表面光滑，標(biāo)本殘留少，確保質(zhì)量一致性和結(jié)果的重復(fù)性。7.3.2維護(hù)和校準(zhǔn)7.3.2.1每年至少一次對(duì)微量移液器的使用量程進(jìn)行校準(zhǔn)，并做好日常維護(hù)和保養(yǎng)。7.3.2.2可由具有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室人員按照程序化文件對(duì)微量移液器進(jìn)行內(nèi)部比對(duì)，并保存相關(guān)記錄。7.4抗原滴針7.4.1可采用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的抗原滴針進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。7.4.2RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)用于血清/血漿檢測(cè)時(shí)，滴針的每滴抗原量是17μL，或符合59±1滴/mL的技術(shù)要求。7.4.3RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)用于CSF檢測(cè)時(shí)，滴針的每滴抗原量是10μL，或符合100±2滴/mL的技術(shù)要5WS/T491—20247.4.4VDRL實(shí)驗(yàn)用于血清檢測(cè)時(shí)，滴針的每滴抗原量是17μL，或符合59±1滴/mL的技術(shù)要求。7.4.5VDRL實(shí)驗(yàn)用于CSF檢測(cè)時(shí)，滴針的每滴抗原量是10μL，或符合100±2滴/mL的技術(shù)要求。8實(shí)驗(yàn)操作步驟8.1概述應(yīng)遵照本標(biāo)準(zhǔn)和商品試劑盒說(shuō)明書(shū)，編寫(xiě)SOP，并驗(yàn)證檢測(cè)性能有效。檢測(cè)時(shí)嚴(yán)格按SOP進(jìn)行操作。所有實(shí)驗(yàn)都應(yīng)在反應(yīng)板上做好唯一性標(biāo)記。8.2RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)8.2.1定性實(shí)驗(yàn)-血清/血漿/CSF標(biāo)本RPR/TRUST定性實(shí)驗(yàn)用于梅毒非特異性抗體的檢測(cè)。操作步驟如下：a)吸取50μL待檢血清/血漿/CSF標(biāo)本、對(duì)照品或質(zhì)控物，每個(gè)標(biāo)本置于直徑18mm反應(yīng)板上的一個(gè)圓圈中；b)將標(biāo)本均勻涂布于整個(gè)反應(yīng)圓圈內(nèi)；c)滴加抗原前，輕輕顛倒確?？乖靹?，再用滴針輕緩地吹吸數(shù)次，直至抗原充分懸浮，吸入滴管；d)棄去針管中第一滴抗原，從第二滴開(kāi)始向每個(gè)標(biāo)本圈中滴加1滴抗原（血清和血漿標(biāo)本加17μL抗原；CSF標(biāo)本加10μL抗原）；e)滴加抗原后，立刻將反應(yīng)板傾斜30°左右旋轉(zhuǎn)數(shù)周，使抗原和標(biāo)本快速混合；f)將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀夾槽內(nèi)，一鍵啟動(dòng)儀器的反應(yīng)程序（100r/min，8min）；g)當(dāng)儀器停止工作后，3min內(nèi)肉眼觀察結(jié)果；h)按本標(biāo)準(zhǔn)第9.1條給出的定性實(shí)驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷。注2：混勻抗原懸液時(shí)勿劇烈吹吸。保持垂直狀態(tài)，以自由落體方式滴加抗原。勿使用滴針內(nèi)的第一滴和最后一滴注3：實(shí)驗(yàn)反應(yīng)結(jié)束應(yīng)立刻觀察。否則液體蒸發(fā)后會(huì)注4：定性實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本進(jìn)行梯度倍比稀釋后注5：大樣本比對(duì)實(shí)驗(yàn)顯示：采用RPR/TRUST-血清相同的實(shí)驗(yàn)程序用于CSF檢測(cè)時(shí)，RPR/TRUSR-CSF與VDRL-CSF檢測(cè)結(jié)果的符合率為97％。在無(wú)法獲得VDRL試劑或該試劑沒(méi)有獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)證的情況下，可采用8.2.2半定量實(shí)驗(yàn)-血清/CSF標(biāo)本RPR/TRUST半定量實(shí)驗(yàn)用于判定梅毒非特異性抗體相對(duì)濃度和（或）排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a)吸取50μL生理鹽水，分別加至直徑18mm反應(yīng)板上數(shù)個(gè)連續(xù)的圓圈內(nèi)；b)吸取50μL待檢血清/CSF標(biāo)本、對(duì)照品、質(zhì)控物，與反應(yīng)板上第一個(gè)圓圈內(nèi)的生理鹽水充分混合，稀釋過(guò)程中，標(biāo)本與生理鹽水應(yīng)反復(fù)吹吸混勻≥6次，避免產(chǎn)生氣泡，不應(yīng)將標(biāo)本吹出反應(yīng)圓圈；c)吸取第一個(gè)圓圈中倍比稀釋的標(biāo)本50μL，與反應(yīng)板上第二個(gè)圓圈內(nèi)的生理鹽水充分混合；d)重復(fù)吸取前一個(gè)圓圈的50μL稀釋標(biāo)本與后一個(gè)圓圈中生理鹽水混合的操作，至最后一個(gè)生理鹽水的圓圈充分混合后，吸出50μL的稀釋標(biāo)本，棄去；e)從高稀釋度往低稀釋度方向，逐一將稀釋標(biāo)本均勻地涂滿整個(gè)圓圈；）；g)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1e)項(xiàng)和第8.2.1f)項(xiàng)給出的描述和步驟啟動(dòng)反應(yīng)程序；h)當(dāng)儀器停止工作后，3min內(nèi)肉眼觀察出現(xiàn)凝集反應(yīng)。對(duì)最高稀釋度凝聚反應(yīng)圓圈的檢測(cè)結(jié)果，以“＋”或“±”表示（即本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.3條或第9.1.4條反應(yīng)結(jié)果的描述）。6WS/T491—20248.3VDRL實(shí)驗(yàn)8.3.1配制抗原工作液在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)新鮮配制VDRL抗原工作液。操作步驟如下：a)配制抗原工作液前應(yīng)測(cè)定抗原緩沖液的酸堿度，確保pH=6.0±0.1；b)吸取VDRL抗原緩沖液0.4mL，加入容量為30mL的帶蓋、底部直徑35mm的平底玻璃瓶，緩慢傾斜小瓶使VDRL抗原緩沖液覆蓋整個(gè)瓶底；c)吸取VDRL抗原0.5mL，一邊平緩地沿水平方向轉(zhuǎn)動(dòng)玻璃瓶（以180r/min的速度繞5cm的圓周直徑旋轉(zhuǎn)），一邊在位于玻璃瓶的上1/3處，在6s內(nèi)連續(xù)地將0.5mLVDRL抗原逐滴滴加到抗原緩沖液中；d)最后一滴抗原滴加后，再持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)玻璃瓶10s；e)吸取抗原緩沖液4.1mL，沿瓶壁加入（不應(yīng)直接滴至抗原中）；f)蓋上瓶蓋，10s內(nèi)上下顛倒30次，抗原呈均勻懸浮后，即為抗原工作液；g)每次實(shí)驗(yàn)時(shí)平緩地旋轉(zhuǎn)含抗原工作液的小瓶，讓抗原均勻懸浮。8.3.2VDRL定性實(shí)驗(yàn)—血清標(biāo)本VDRL定性實(shí)驗(yàn)對(duì)血清檢測(cè)梅毒非特異性抗體時(shí)，操作步驟如下：a)血清標(biāo)本應(yīng)滅活處理（56℃,30min）。若已經(jīng)做滅活處理的血清標(biāo)本超過(guò)4h檢測(cè)，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前重新快速滅活處理（56℃,10min）；b)吸取50μL血清，在直徑14mm專用反應(yīng)板上均勻地涂滿整個(gè)反應(yīng)圓圈；c)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1c)項(xiàng)和第8.2.1d)項(xiàng)給出的描述和步驟滴加抗原（17μL）；d)將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，一鍵啟動(dòng)儀器的反應(yīng)程序（180r/min，4min）；e)當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察凝集狀態(tài)（10倍目鏡，10倍物鏡）；f)按本標(biāo)準(zhǔn)第9.1條關(guān)于定性實(shí)驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出結(jié)果判斷。8.3.3VDRL半定量實(shí)驗(yàn)—血清標(biāo)本半定量實(shí)驗(yàn)用于判定血清中梅毒非特異性抗體相對(duì)濃度和（或）排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.3.2a)項(xiàng)處理血清標(biāo)本；b)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.2a)項(xiàng)至第8.2.2e)項(xiàng)給出的步驟，在直徑14mm專用反應(yīng)板上稀釋標(biāo)本；c)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1c)項(xiàng)和第8.2.1d)項(xiàng)給出的描述和步驟滴加抗原（17μL）；d)將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，一鍵啟動(dòng)儀器的反應(yīng)程序（180r/min，4min）；e)當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察出現(xiàn)凝集反應(yīng)。對(duì)最高稀釋度凝聚反應(yīng)圓圈的檢測(cè)結(jié)果，以“＋”或“±”表示（即本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.3條或第9.1.4條反應(yīng)結(jié)果的描述）。8.3.4VDRL定性實(shí)驗(yàn)—CSF標(biāo)本VDRL定性實(shí)驗(yàn)對(duì)CSF檢測(cè)梅毒非特異性抗體時(shí)，CSF標(biāo)本不需滅活處理。操作步驟如下：a)將上述VDRL抗原工作液與10％濃度氯化鈉溶液按照1:1比例混合后，配制成VDRL-CSF抗原工作液，至少靜置5min以上才可使用，2h內(nèi)有效；b)吸取50μLCSF，加入直徑16mm專用反應(yīng)板上的反應(yīng)圓圈；c)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1c)項(xiàng)和第8.2.1d)項(xiàng)給出的描述和步驟滴加VDRL-CSF抗原工作液（10μLd)將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，一鍵啟動(dòng)儀器的反應(yīng)程序（180r/min，8min）；e)當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察凝集狀態(tài)（10倍目鏡，10倍物鏡）；f)按本標(biāo)準(zhǔn)第9.1條給出的定性實(shí)驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出結(jié)果判斷。8.3.5VDRL半定量實(shí)驗(yàn)—CSF標(biāo)本7WS/T491—2024半定量實(shí)驗(yàn)用于判定CSF中梅毒非特異性抗體相對(duì)濃度和/或排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.2a)項(xiàng)至第8.2.2e)項(xiàng)給出的步驟，在直徑16mm專用反應(yīng)板上稀釋標(biāo)本；b)按本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1c)項(xiàng)和第8.2.1d)項(xiàng)給出的描述和步驟滴加抗原（10μL）；c)將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，一鍵啟動(dòng)儀器的反應(yīng)程序（180r/min，8min）；d)當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察出現(xiàn)凝集反應(yīng)。對(duì)最高稀釋度凝聚反應(yīng)圓圈的檢測(cè)結(jié)果，以“＋”或“±”表示（即本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.3條或第9.1.4條反應(yīng)結(jié)果的描述）。9結(jié)果描述和表示9.1定性實(shí)驗(yàn)9.1.1強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）顯見(jiàn)團(tuán)塊狀絮狀凝集物，懸液背景清亮，以符號(hào)“＋”或“”表示；9.1.2陽(yáng)性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）顯見(jiàn)比較小絮狀凝集物，懸液背景較清亮，以符號(hào)“＋9.1.3弱陽(yáng)性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）可辨細(xì)小散在絮狀凝集物，懸液背景渾濁，以符號(hào)9.1.4臨界陽(yáng)性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）可辨較粗糙抗原顆粒，懸液背景渾濁，以符號(hào)“±”表示；9.1.5陰性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）抗原顆粒均勻分布，以符號(hào)“－”或“陰性”表示。注：采用分級(jí)方式表示免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱差異。用符號(hào)“-”表示陰性反應(yīng)；用符號(hào)“＋”表示陽(yáng)性9.2半定量實(shí)驗(yàn)9.2.1大部分患者僅用定性實(shí)驗(yàn)分級(jí)方式不能精細(xì)地表示免疫反應(yīng)狀態(tài)，以及細(xì)微變化的差異，通過(guò)對(duì)標(biāo)本梯度倍比稀釋的方式放大免疫反應(yīng)的指示效應(yīng)。半定量實(shí)驗(yàn)的滴度指呈現(xiàn)弱陽(yáng)性反應(yīng)或臨界陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)。9.2.2滴度以1:N+或1:N±格式表示（其中N為稀釋倍數(shù)值）。9.3報(bào)告格式梅毒非特異性抗體水平與免疫反應(yīng)凝集的強(qiáng)弱程度呈正相關(guān)，反映患者特定的病程狀態(tài)。梅毒的發(fā)生發(fā)展和臨床表現(xiàn)異常復(fù)雜，治療效果監(jiān)測(cè)周期長(zhǎng)，其檢測(cè)報(bào)告應(yīng)精準(zhǔn)地提示患者免疫特征和變化趨勢(shì)，比如“前帶現(xiàn)象”等。9.3.1陰性反應(yīng)的檢測(cè)報(bào)告應(yīng)有“實(shí)驗(yàn)方法”（如RPR或TRUST或VDRL）和“結(jié)果表示”兩部分組成。注：“實(shí)驗(yàn)方法”為RPR；原始標(biāo)本定性實(shí)驗(yàn)符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.3.2陽(yáng)性反應(yīng)的檢測(cè)報(bào)告應(yīng)有“實(shí)驗(yàn)方法”、“定性”（原始樣本）結(jié)果和“半定量”結(jié)果（樣本滴度）共三個(gè)部分組成。注1：“實(shí)驗(yàn)方法”為RPR；原始標(biāo)本“定性實(shí)驗(yàn)”符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.1條給出的細(xì)節(jié)；度倍比稀釋至1:128符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.5條給出的細(xì)節(jié)，而1:64符合本標(biāo)準(zhǔn)第9實(shí)驗(yàn)強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，無(wú)前帶現(xiàn)象，呈高滴度狀態(tài)，半定量實(shí)驗(yàn)已注2：“實(shí)驗(yàn)方法”為T(mén)RUST；原始標(biāo)本“定性實(shí)驗(yàn)”符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.5條給出的細(xì)節(jié)；“半梯度倍比稀釋至1:512符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.5條給出的細(xì)節(jié)，而1:256符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.3條給出的細(xì)節(jié)。提示：8WS/T491—202410質(zhì)量控制10.1基本要求10.1.1總則應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)第2章的總體要求。10.1.2溫度和濕度10.1.2.1VDRL/RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)區(qū)域溫度不應(yīng)低于16℃,過(guò)低可增加假陰性。不應(yīng)高于30℃,過(guò)高可增加假陽(yáng)性。10.1.2.2所有從低溫環(huán)境下取出的標(biāo)本、試劑、對(duì)照品、質(zhì)控物等，應(yīng)放置在室溫至少30min才可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。10.1.2.3VDRL/RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)區(qū)域濕度宜＞65％至＜85％。10.1.3生物安全本標(biāo)準(zhǔn)涉及傳染性生物標(biāo)本，應(yīng)在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開(kāi)展相關(guān)操作，配備相應(yīng)的個(gè)人防護(hù)用品。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)符合GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求。10.1.4隱私保護(hù)本標(biāo)準(zhǔn)涉及性傳播感染，應(yīng)保護(hù)患者信息和實(shí)驗(yàn)結(jié)果等個(gè)人隱私。10.1.5技術(shù)人員10.1.5.1技術(shù)人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)和/或檢驗(yàn)和/或生物專業(yè)教育背景，取得檢驗(yàn)或相關(guān)衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格，上崗前應(yīng)通過(guò)性病實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)和考核。10.1.5.2按要求在崗人員定期參加專業(yè)機(jī)構(gòu)組織的性病實(shí)驗(yàn)技術(shù)復(fù)訓(xùn)。10.1.5.3作為手工操作和肉眼判讀的檢測(cè)項(xiàng)目，如多人從事該檢測(cè)項(xiàng)目，定期對(duì)崗位技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部能力評(píng)估。可采用人員比對(duì)、專業(yè)測(cè)評(píng)、檢測(cè)特定標(biāo)本或外部質(zhì)控物等方式進(jìn)行。標(biāo)本構(gòu)成至少選擇2份陰性標(biāo)本(含1份其它標(biāo)志物陽(yáng)性標(biāo)本)、3份陽(yáng)性標(biāo)本(含2份弱陽(yáng)性標(biāo)本)進(jìn)行比對(duì)，評(píng)價(jià)比對(duì)結(jié)果的可接受性一般為≤±1個(gè)滴度預(yù)期值。當(dāng)4份標(biāo)本符合檢測(cè)誤差范圍內(nèi)的檢測(cè)結(jié)果，評(píng)估為合格。出現(xiàn)不一致檢測(cè)結(jié)果時(shí)，應(yīng)分析原因，并采取必要的糾正指施，確保評(píng)估糾正指施的有效性。保存相應(yīng)的記錄。能力評(píng)估頻次宜不低于一年一次。10.1.5.4對(duì)缺乏判讀反應(yīng)結(jié)果經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員，可將高滴度的標(biāo)本進(jìn)行梯度倍比稀釋，觀察每個(gè)反應(yīng)圓圈中的抗原抗體絮狀凝集的狀態(tài)，根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)第9.1條給出的描述細(xì)節(jié)，掌握辨別弱陽(yáng)性結(jié)果的能力。10.2試劑檢測(cè)性能驗(yàn)證10.2.1首次啟用檢測(cè)試劑前應(yīng)做性能驗(yàn)證。按照GB/T22576.5分析性能驗(yàn)證內(nèi)容至少應(yīng)包括符合率，適用時(shí)，還應(yīng)包括檢出限、靈敏度、特異性等指標(biāo)。應(yīng)保存驗(yàn)證數(shù)據(jù)記錄。10.2.2應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中第5.3.2.3條的要求。新批號(hào)試劑和（或）同批號(hào)但不同批次送達(dá)實(shí)驗(yàn)室的試劑，應(yīng)與已使用或正在使用的舊批號(hào)試劑平行檢測(cè)以保證患者結(jié)果的一致性。比對(duì)方案應(yīng)至少利用一份已知陽(yáng)性、一份已知弱陽(yáng)性和一份已知陰性的患者標(biāo)本。不同批號(hào)或者不同批次的試劑不得混用。10.2.3判斷合格標(biāo)準(zhǔn)：定性實(shí)驗(yàn)的陰陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)一致，半定量實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果≤±1個(gè)滴度誤差范圍。10.3對(duì)照品9WS/T491—202410.3.1對(duì)照品應(yīng)隨試劑盒保存，不應(yīng)凍存。10.3.2不同試劑盒中的對(duì)照品不應(yīng)混用。10.3.3對(duì)照品不應(yīng)作為監(jiān)測(cè)檢測(cè)質(zhì)量穩(wěn)定性的質(zhì)控物。10.3.4應(yīng)記錄每次對(duì)照品的檢測(cè)結(jié)果，并保存記錄。10.3.5每一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)隨待檢標(biāo)本同步檢測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)和陰性反應(yīng)的2種對(duì)照品。10.3.6對(duì)照品檢測(cè)符合預(yù)期結(jié)果，說(shuō)明本次檢測(cè)有效；對(duì)照品檢測(cè)不符合預(yù)期結(jié)果，說(shuō)明本次檢測(cè)無(wú)效，應(yīng)分析原因，進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，直至符合預(yù)期結(jié)果；如重復(fù)檢測(cè)仍然不符合預(yù)期結(jié)果，提示該試劑盒失效，應(yīng)更換新試劑盒。10.4質(zhì)控物10.4.1質(zhì)控物適用于梅毒非特異性抗體的定性和半定量實(shí)驗(yàn)。10.4.2可選用商品化或自制質(zhì)控物。質(zhì)控物為已知陽(yáng)性和陰性反應(yīng)的血清制品各1支。陽(yáng)性反應(yīng)質(zhì)控10.4.3若使用自制質(zhì)控物，需確認(rèn)其他感染性標(biāo)志物結(jié)果為陰性，避免交叉反應(yīng)，并驗(yàn)證其穩(wěn)定性。10.4.4每一個(gè)批次質(zhì)控物至少滿足一年的使用計(jì)劃，有效期應(yīng)≥1年。10.4.5質(zhì)控物應(yīng)保存在帶密封膠圈的螺口凍存管中于-20℃或更低溫度儲(chǔ)存。根據(jù)使用頻次確定分裝體積，每支分裝量≥150μL，并標(biāo)記質(zhì)控物名稱、定值、分裝時(shí)間、有效期、分裝人等信息。10.4.6連續(xù)5個(gè)檢測(cè)日內(nèi)使用的質(zhì)控物，應(yīng)置于2℃~8℃保存，避免反復(fù)凍融。10.4.7應(yīng)記錄每次實(shí)驗(yàn)時(shí)質(zhì)控物的指定值、批號(hào)、失效日期、當(dāng)日檢測(cè)結(jié)果，并保存記錄。10.4.8每個(gè)檢測(cè)日應(yīng)隨待檢標(biāo)本和對(duì)照品同步檢測(cè)質(zhì)控物一次。如當(dāng)日發(fā)生更換試劑批號(hào)，應(yīng)增加一次室內(nèi)質(zhì)控。10.4.9質(zhì)控物的檢測(cè)符合預(yù)期結(jié)果，表明檢測(cè)系統(tǒng)在控，檢測(cè)結(jié)果有效?？砂l(fā)送臨床檢測(cè)報(bào)告。10.4.10質(zhì)控物的檢測(cè)不符合預(yù)期結(jié)果，本次檢測(cè)失控，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。不應(yīng)發(fā)送臨床檢測(cè)報(bào)告。查找并糾正失控原因。且室內(nèi)質(zhì)控合格后，重新檢測(cè)標(biāo)本，結(jié)果審核后，方可發(fā)送報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)評(píng)估失控之前的臨床標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果的有效性。10.5反應(yīng)板10.5.1反應(yīng)板正面為標(biāo)本的反應(yīng)區(qū)，避免直接接觸和污染。10.5.2RPR/TRUST試劑盒開(kāi)封后，紙質(zhì)反應(yīng)板應(yīng)放置于密封袋內(nèi)防止污染或損壞，并存儲(chǔ)在干燥室溫下，不應(yīng)置于冰箱保存。10.5.3反應(yīng)板應(yīng)整體保持平坦，在儲(chǔ)藏和檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)確保其不會(huì)凸起或凹陷。10.5.4紙質(zhì)反應(yīng)板表面因覆蓋塑料涂層而具有適當(dāng)?shù)谋砻鎻埩Γ挂后w在反應(yīng)圓圈內(nèi)既不會(huì)自由流動(dòng)，也不會(huì)呈荷葉上露滴狀。如標(biāo)本不能均勻地涂布標(biāo)本到整個(gè)圓圈，應(yīng)更換反應(yīng)板。10.5.5VDRL專用反應(yīng)板重復(fù)使用前應(yīng)潔凈處理。10.6抗原滴針10.6.1宜使用符合本標(biāo)準(zhǔn)第7.4條滴量要求的滴針。WS/T491—202410.6.2如遇到試劑盒中配套滴針不符合本標(biāo)準(zhǔn)第7.4條滴量要求，應(yīng)另外購(gòu)買(mǎi)合格的滴針，或使用微量移液器。10.6.3試劑用盡后，隨新試劑更換新的滴針。10.6.4初次使用的滴針，應(yīng)驗(yàn)證是否符合本標(biāo)準(zhǔn)第7.4條給出的要求。保存相關(guān)記錄。10.6.5當(dāng)日檢測(cè)完成后，應(yīng)使用蒸餾水或去離子水沖洗針管后自然晾干。勿擦拭針頭，避免磨損硅涂層影響滴加抗原的準(zhǔn)確性。10.7結(jié)果判定10.7.1應(yīng)在明亮的光線下用肉眼觀察RPR/TRUST結(jié)果，不應(yīng)使用顯微鏡觀察。10.7.2應(yīng)在顯微鏡下觀察VDRL實(shí)驗(yàn)結(jié)果。10.7.3少數(shù)標(biāo)本在檢測(cè)后，其反應(yīng)圓圈周邊出現(xiàn)均勻懸浮的細(xì)小絮狀凝集，而中心部位呈現(xiàn)陰性反應(yīng)?？蓪⒎磻?yīng)板傾斜30°輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)周，有助于辨別臨界陽(yáng)性反應(yīng)。10.7.4“臨床診斷”提示“一期梅毒”、“二期梅毒”、現(xiàn)癥“晚期梅毒”的病例，或標(biāo)本的梅毒特異性抗體反應(yīng)陽(yáng)性，即使定性實(shí)驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，也應(yīng)將標(biāo)本進(jìn)行梯度倍比稀釋到1:16進(jìn)行半定量實(shí)驗(yàn)，排除前帶現(xiàn)象的可能。10.7.5當(dāng)判斷為前帶現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步稀釋標(biāo)本進(jìn)行半定量實(shí)驗(yàn)，報(bào)告最終滴度。10.8室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)10.8.1室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)應(yīng)同時(shí)包含定性和半定量檢測(cè)二項(xiàng)指標(biāo)。10.8.2應(yīng)開(kāi)展梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制。質(zhì)控物要求詳見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第10.4條。10.8.3應(yīng)每年至少1次參加由專業(yè)管理機(jī)構(gòu)組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。每次能力驗(yàn)證物品或質(zhì)評(píng)物構(gòu)成至少5份，包含定性實(shí)驗(yàn)呈陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，以及半定量實(shí)驗(yàn)呈不同滴度。10.8.4單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：定性實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果與預(yù)期值一致，為合格。半定量實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果≤±1滴度預(yù)期值的范圍，為合格。10.8.5當(dāng)5份標(biāo)本中有4份標(biāo)本和預(yù)期值一致（80％檢測(cè)結(jié)果與預(yù)期值一致本次室間質(zhì)量評(píng)價(jià)判斷為合格。10.8.6描述有關(guān)回報(bào)結(jié)果的分析、不合格結(jié)果的糾正措施、系統(tǒng)偏倚的預(yù)防措施等內(nèi)容。11臨床意義11.1檢測(cè)策略11.1.1由于梅毒疾病的復(fù)雜性和特殊性，應(yīng)根據(jù)診療需求、檢測(cè)數(shù)量、技術(shù)能力、公共衛(wèi)生任務(wù)和財(cái)政政策等因素，采用多種技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)，提高臨床診療服務(wù)和衛(wèi)生資源效率、降低誤診和漏診、減少醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)、提高公共衛(wèi)生安全。11.1.2臨床診療過(guò)程需要梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)和梅毒特異性抗體實(shí)驗(yàn)兩類抗體聯(lián)合檢測(cè)，才能提高鑒別、診斷的效率。11.1.2.1伴有皮膚粘膜潰瘍或皮膚損害的疑似患者，宜進(jìn)行病原體+非特異性抗體+特異性抗體檢測(cè)的聯(lián)合篩查。11.1.2.2沒(méi)有皮膚粘膜異常表現(xiàn)的疑似患者，宜進(jìn)行非特異性抗體+特異性抗體檢測(cè)的聯(lián)合篩查。11.1.3梅毒特異性抗體實(shí)驗(yàn)的敏感性和特異性均高于梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)。無(wú)論哪一類抗體實(shí)驗(yàn)，對(duì)不同病程患者的檢測(cè)都存在局限性。要評(píng)估二類抗體試劑的檢測(cè)性能。WS/T491—202411.1.3.1篩選一種RPR試劑或者TRUST試劑，作為日常梅毒非特異性抗體檢測(cè)試劑。選擇敏感性高的試劑。11.1.3.2篩選一種化學(xué)發(fā)光法、或酶聯(lián)免疫法、或明膠顆粒法、或免疫層析法、或免疫熒光吸收法等的試劑，作為日常梅毒特異性抗體檢測(cè)試劑。儲(chǔ)備一種與日常特異性抗體檢測(cè)試劑同等靈敏度的試劑，當(dāng)待檢標(biāo)本處于臨界/灰區(qū)值、或者梅毒非特異性抗體陰性時(shí)，進(jìn)行復(fù)測(cè)和確認(rèn)。11.1.4要慎重實(shí)施單一的采用梅毒非特異性抗體檢測(cè)、或者梅毒特異性抗體檢測(cè)的篩查策略。11.1.4.1當(dāng)首選的一類抗體試劑對(duì)標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)補(bǔ)充另外一類抗體檢測(cè)。11.1.4.2當(dāng)首選的一類抗體試劑對(duì)標(biāo)本檢測(cè)陰性時(shí)，視臨床診療需求，補(bǔ)充另外一類抗體檢測(cè)。11.1.5檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該如實(shí)反映檢測(cè)結(jié)果。前帶現(xiàn)象的檢測(cè)單報(bào)告，不可將定性實(shí)驗(yàn)“陰性”修改為“陽(yáng)性”。無(wú)論采用聯(lián)合還是單一方法檢測(cè)策略，都會(huì)遇到個(gè)別標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果無(wú)法解釋的極端個(gè)案。11.1.5.1梅毒診斷涉及病史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果三個(gè)要素。檢測(cè)結(jié)果不是唯一診斷梅毒的依據(jù)。11.1.5.2在確保實(shí)驗(yàn)質(zhì)量穩(wěn)定、檢測(cè)結(jié)果可靠的情況下，與臨床醫(yī)生密切溝通。11.1.5.3根據(jù)臨床需要，即刻或隨訪再次采集樣本進(jìn)行復(fù)測(cè)。根據(jù)抗體的構(gòu)成、濃度水平和變化趨勢(shì)等指標(biāo)特征，綜合判斷，提高診斷梅毒準(zhǔn)確性。11.2輔助診斷11.2.1感染梅毒螺旋體后，人體產(chǎn)生抗類脂物質(zhì)的抗體。梅毒非特異性抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，與活動(dòng)性梅毒有關(guān)，是判斷“現(xiàn)癥感染”的指標(biāo)。結(jié)合臨床資料和梅毒特異性抗體檢測(cè)結(jié)果可確診梅毒。11.2.2由于超過(guò)10％的靜脈藥癮者的梅毒非特異性抗體的滴度＞1:8，部分早期梅毒和潛伏梅毒、晚期梅毒的滴度＜1:8。應(yīng)重視低滴度值的鑒別診斷。11.2.3VDRL-CSF是傳統(tǒng)的神經(jīng)梅毒的診斷方法，有較高的特異性。大樣本臨床比對(duì)數(shù)據(jù)顯示：VDRL較RPR/TRSUT有更高的敏感性。RPR/TRUST代替VDRL用于CSF檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性反應(yīng)具有與VDRL相同臨床價(jià)值；陰性反應(yīng)的患者不能排除神經(jīng)梅毒。11.2.4在梅毒特異性抗體檢測(cè)陽(yáng)性的前提下，RPR/TRUST/VDRL以下結(jié)果可作為判斷先天梅毒的參考依據(jù)：a)出生時(shí)，新生兒的血清、CSF梅毒非特異性抗體水平高于同期母親2個(gè)滴度；b)或新生兒CSF-VDRL呈陽(yáng)性反應(yīng)；c)或出生后3個(gè)月內(nèi)，血清、CSF梅毒非特異性抗體由陰轉(zhuǎn)陽(yáng)，或者抗體水平比出生時(shí)增加2個(gè)滴度。11.3療效監(jiān)測(cè)11.3.1對(duì)同一個(gè)病例治療效果的監(jiān)測(cè)，應(yīng)采用與初次檢測(cè)相同的方法和試劑。不同實(shí)驗(yàn)方法的半定量結(jié)果不能直接比較。11.3.2在抗梅毒治療前，應(yīng)掌握初診患者定性和半定量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將每次隨訪的定性和半定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別與前一次和/或初診時(shí)的滴度水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)的比較，給予臨床合理解釋。11.3.3在連續(xù)的療效監(jiān)測(cè)過(guò)程中，抗體滴度水平和變化趨勢(shì)有著不同的臨床意義：a)抗體下降≥2個(gè)滴度（例：從1:64下降至1:16），判斷治療有效。b)抗體下降≥2個(gè)滴度，并且連續(xù)2個(gè)監(jiān)測(cè)周期的定性實(shí)驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，判斷治愈。c)抗體滴度下降或上升＜2個(gè)滴度，在排除再感染和實(shí)驗(yàn)技術(shù)性誤差的情況下繼續(xù)隨訪監(jiān)測(cè)。WS/T491—2024d)抗體上升≥2個(gè)滴度（例：從1:16上升至1:64），或定性實(shí)驗(yàn)從陰性反應(yīng)轉(zhuǎn)變成陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)史和臨床體征，可判斷復(fù)發(fā)、再感染、治療失敗。注：最新臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梅毒非特異性抗體水平的變至轉(zhuǎn)陰，可能與療效判斷無(wú)關(guān)。這需要更多的12局限性12.1概述雖然VDRL、RPR和TRUST的檢測(cè)原理基本相同，但因采用的抗原原料和生產(chǎn)工藝的不同，各種方法和試劑敏感性和特異性存在系統(tǒng)性差異。任何2種方法的定性和半定量結(jié)果，相互間不應(yīng)直接比較。當(dāng)梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)用作梅毒篩查用途時(shí)，應(yīng)選擇敏感性高的方法或試劑。12.2假陽(yáng)性反應(yīng)12.2.1技術(shù)性假陽(yáng)性主要由真空采血管添加劑成分引起干擾檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)選擇符合本標(biāo)準(zhǔn)附錄A和附錄B要求的采血管。12.2.2生物學(xué)假陽(yáng)性是指與梅毒螺旋體感染無(wú)關(guān)的其他因素，也可使梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)。如急性和慢性疾病、自然組織損傷等；常見(jiàn)的疾病因素有系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻風(fēng)病、瘧疾、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、腫瘤、其他螺旋體疾病等；常見(jiàn)的生理性因素有孕婦和老年等。注：臨床發(fā)現(xiàn)非梅毒患者的梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性（生物學(xué)假陽(yáng)性），對(duì)診斷其他疾病有重要的提示12.3假陰性反應(yīng)12.3.1機(jī)體感染梅毒螺旋體后，免疫應(yīng)答需要一定時(shí)間，當(dāng)抗類脂質(zhì)抗體濃度尚處于實(shí)驗(yàn)方法的檢出限以下，梅毒非特異性抗體實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，稱為窗口期。在此階段可發(fā)生假陰性反應(yīng)。12.3.2少數(shù)早期梅毒和神經(jīng)梅毒以及部分晚期梅毒，可發(fā)生RPR/TRUST定性實(shí)驗(yàn)假陰性反應(yīng)。注：有關(guān)前帶現(xiàn)象導(dǎo)致的假陰性反應(yīng)的處理，詳見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第10.7.4條和第10.7.5條。12.4血漿標(biāo)本12.4.1僅在特殊情況下（如血庫(kù)、無(wú)離心機(jī)的實(shí)驗(yàn)室、無(wú)法獲得血清標(biāo)本的狀況），血漿標(biāo)本方可用于RPR/TRUST定性實(shí)驗(yàn)。12.4.2血漿中的抗體濃度顯著高于血清，同一個(gè)患者血清與血漿的檢測(cè)結(jié)果不應(yīng)直接比較。12.4.3用血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在標(biāo)本類型中注明“血漿”。12.4.4血漿標(biāo)本不用于VDRL實(shí)驗(yàn)。WS/T491—2024（規(guī)范性）抗干擾性能初步評(píng)估A.1干擾物質(zhì)來(lái)源A.1.1內(nèi)源性干擾物質(zhì)常見(jiàn)于血紅素、膽紅素和脂質(zhì)。A.1.2外源性干擾物質(zhì)常見(jiàn)于標(biāo)本處理過(guò)程中的添加物（抗凝劑、促凝劑等以及采集和處理過(guò)程中接觸標(biāo)本的物質(zhì)（標(biāo)本收集容器及塞子等）。A.2獲取抗干擾信息方式A.2.1向真空采集器生產(chǎn)商了解添加劑的成分及其對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目的抗干擾性能。主要添加劑成分不明確的真空采集器，應(yīng)謹(jǐn)慎選擇。A.2.2向試劑生產(chǎn)商，了解其梅毒非特異性抗體檢測(cè)試劑對(duì)常見(jiàn)干擾物質(zhì)的抗干擾性能。A.2.3從國(guó)家和地區(qū)質(zhì)量管理控制部門(mén)，獲得試劑盒和真空采集器抗干擾實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量評(píng)估信息。WS/T491—2024（規(guī)范性）抗干擾性能評(píng)估—驗(yàn)證廠家聲明B.1基本要求B.1.1應(yīng)使用新鮮標(biāo)本進(jìn)行抗干擾性能評(píng)估。B.1.2應(yīng)選擇具有溯源性的標(biāo)準(zhǔn)干擾物質(zhì)，進(jìn)行抗干擾性能評(píng)估。包括：游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、血紅蛋白和乳糜微粒。B.2驗(yàn)證真空采集器的抗干擾能力B.2.1選擇10例健康人和10例不同病程的梅毒病例（包含3份臨界水平、3份低滴度、4份高滴度的標(biāo)本）。B.2.2使用1種無(wú)添加劑的潔凈玻璃管作對(duì)照。B.2.3被評(píng)估的真空采集器和對(duì)照管同時(shí)采集一個(gè)受檢者靜脈血，分離血清或血漿。B.2.4分別進(jìn)行梅毒非特異性抗體檢測(cè)的定性和半定量實(shí)驗(yàn)。B.2.5比較檢測(cè)結(jié)果，判斷真空采集器的抗干擾能力。B.3驗(yàn)證試劑的抗干擾能力B.3.1選擇被評(píng)估試劑。B.3.2標(biāo)本選擇符合本標(biāo)準(zhǔn)第B.2.1條規(guī)定。B.3.3靜脈抽血，分離血清或者血漿備用。B.3.4干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)物復(fù)溶后，按照最高人體生理濃度水平，與待檢的血清或血漿標(biāo)本混合。B.3.5對(duì)添加干擾物前后的血清或血漿標(biāo)本，分別進(jìn)行定性和半定量實(shí)驗(yàn)。B.3.6比較同一個(gè)受檢者標(biāo)本添加干擾物前后檢測(cè)結(jié)果。B.3.7綜合判斷該試劑對(duì)感染物質(zhì)的抗干擾能力。B.4判斷標(biāo)準(zhǔn)B.4.1比較對(duì)照管標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，含添加劑真空采集器的標(biāo)本，其梅毒非特異性抗體定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致；半定量實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果在預(yù)期值≤±1滴度的范圍。判斷真空采集器具有抗干擾能力。B.4.2比較不添加干擾物的原始標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，含干擾物的血清或血漿標(biāo)本，其梅毒非特異性抗體定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致；半定量實(shí)驗(yàn)的結(jié)果≤±1滴度。判斷該試劑具有抗干擾能力。WS/T491—2024（規(guī)范性）水平旋轉(zhuǎn)儀關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)C.1基本參數(shù)C.1.1水平旋轉(zhuǎn)儀應(yīng)具備機(jī)械旋轉(zhuǎn)部件、反應(yīng)板托架、電子控制集成器、數(shù)字顯示、蜂鳴報(bào)警、參數(shù)調(diào)控按鈕等組成。C.1.2標(biāo)本反應(yīng)板托盤(pán)附設(shè)有固定反應(yīng)板的夾槽，避免反應(yīng)板在旋轉(zhuǎn)時(shí)滑動(dòng)。水平托盤(pán)應(yīng)帶有上蓋，減少外界溫度和濕度的干擾。C.1.3轉(zhuǎn)速：100±2r/min（RPR/TRUST）或180±2r/min（VDRL）。C.1.4偏心回轉(zhuǎn)直徑：19mm±1mm。C.1.5電子數(shù)字定時(shí)：60s±1s。C.1.6蜂鳴和倒計(jì)時(shí)數(shù)字顯示雙重提示。C.1.7一鍵式反應(yīng)程序的按鍵。C.2組合反應(yīng)程序C.2.1RPR/TRUST實(shí)驗(yàn)反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速100±2r/min；8min±8s；C.2.2VDRL-CSF標(biāo)本的反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速180±2r/min；8min±8s；C.2.3VDRL-血清標(biāo)本的反應(yīng)程序：轉(zhuǎn)速180±2r/min；4min±4s。WS/T491—2024參考文獻(xiàn)[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).性病防治管理辦法（衛(wèi)生部令第89號(hào)）.2012-12-31[2]顧偉鳴,趙根明,楊陽(yáng),等.先天梅毒患兒的血清學(xué)隨訪.中華傳染病雜志.2007,25(2):117-119.[3]顧偉鳴,楊陽(yáng),金月蘭,等.梅毒血清學(xué)檢測(cè)質(zhì)量亟需提高.中華皮膚科雜志.2009,42(5):50-51.[4]楊陽(yáng),顧偉鳴,金月蘭,等.上海市梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).2009,24(12):922-926.[5]楊陽(yáng),吳磊,顧偉鳴,等.梅毒非特異性類脂質(zhì)反應(yīng)素抗體實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的建立及應(yīng)用評(píng)價(jià).中華皮膚科雜志.2011,44(5):336-338.[6]顧偉鳴,楊陽(yáng),吳磊,等.梅毒血清學(xué)試劑性能評(píng)估方案的優(yōu)化及應(yīng)用.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn).201429(11):1169-1174.[7]童曼莉,劉莉莉,林麗蓉,等．梅毒實(shí)驗(yàn)診斷程序研究進(jìn)展.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志.2017,40(11):898-903.[8]尹躍平.性傳播疾病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南.北京:人民衛(wèi)生出版社.2019.[9]LarsenSA,SteinerBM,RudolphAH.LaboratoryDiagnosisandInterpretationoftestsforSyphilis.ClinMicrobiolRev.1995,8(1):1-21.[10]KennedyEJ,CreightonET.VenerealDiseaseResearchLaboratory(VDRL)slidetest;Amanualoftestsforsyphilis.AmericanPublicHealthAssociation,WashingtonD.C.1998.[11]GeusauA,KittlerH,HeinU,etal.Biologicalfalse-positivetestscompriseahighproportionofVenerealDiseaseResearchLaboratoryreactionsinananalysisof300,000sera.IntJSTDAIDS.2005,16(11):722-726.[12]PatrickRM,EllenJB,JamesHJ,etal.Chapter:TreponemaandOtherHumanHost-AssociatedSpirochetes.Manualofclinicalmicrobiology,9thedition,WashingtonD.C.Americansocietyformicrobiology.2007:987-1003.[13]CastroR.,PrietoES,daLuzMartinsPereiraF.Nontreponemaltestsinthediagnosisofneurosyphilis:AnevaluationoftheVenerealDiseaseR