(高清版)GBT 40267-2021 植物源產(chǎn)品中左旋多巴的測(cè)定 高效液相色譜法

植物源產(chǎn)品中左旋多巴的測(cè)定高效液相色譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40267—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所、四川大學(xué)、甘肅中商食品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)有限公1GB/T40267—2021植物源產(chǎn)品中左旋多巴的測(cè)定高效液相色譜法本文件描述了植物源產(chǎn)品中左旋多巴含量的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于蠶豆(ViciafabaL.)、狗爪豆[Stizolobiumcochinchinensis(Lour.)TangetWang]、常春油麻藤(MucunasempervirensHemsl.)等植物源干樣品中左旋多巴含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理試樣用2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液超聲提取后，經(jīng)反相色譜柱分離，紫外(或二極管陣列)檢測(cè)器檢5試劑或材料5.1試劑除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1.1磷酸氫二鉀(K?HPO?·3H?O):優(yōu)級(jí)純。5.1.2鹽酸(HCl)。5.1.3磷酸(H?PO?)。5.2溶液配制5.2.12%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液：取鹽酸20mL,加水至1L。5.2.210mmol/L磷酸氫二鉀溶液：稱(chēng)取磷酸氫二鉀2.3g,加水950mL溶解，加磷酸調(diào)節(jié)pH7.0,再用水稀釋至1L。2GB/T40267—20215.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取左旋多巴標(biāo)準(zhǔn)品約20mg(精確至0.1mg),用2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液溶解并定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為2000mg/L的左旋多巴標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃下保存?zhèn)溆?，有效期?個(gè)月。5.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.5mL于100mL容量瓶中，用2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液稀5.4.3低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，用2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液稀釋配制成質(zhì)5.4.4高濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液稀釋配制成質(zhì)6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器(UV)或二極管陣列檢測(cè)器(6.3超聲波發(fā)生器：功率250W,工作頻率40kHz。6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000g。6.5酸度計(jì)：精度為0.01個(gè)pH單位。6.6渦旋混勻器。8試驗(yàn)步驟混勻后超聲提取30min,間隔15min搖勻一次，然后在8000(×g)下離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至3GB/T40267—202125mL容量瓶中。殘?jiān)儆?0mL2%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，用2%(體8.2測(cè)定8.2.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下所示：磷酸氫二鉀溶液=5:95;d)柱溫：20℃;8.2.2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的制作依據(jù)試樣中左旋多巴的含量選擇合適質(zhì)量濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣分析，以左旋多巴色譜峰面積為縱坐標(biāo)，溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖見(jiàn)8.2.3樣品測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀，依據(jù)保留時(shí)間定性，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)得到試樣溶液中左旋多巴的質(zhì)量濃度，應(yīng)使試樣溶液中左旋多巴的質(zhì)量濃度在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)質(zhì)量濃度上限的樣品應(yīng)稀釋后進(jìn)樣分析。典型樣品溶液色譜圖見(jiàn)圖A.2。8.3平行試驗(yàn)按8.1和8.2的規(guī)定對(duì)同一試樣進(jìn)行兩次平行測(cè)定。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中左旋多巴的含量按照式(1)計(jì)算：………….式中：w——試樣中左旋多巴含量，單位為克每百克(g/100g);p——由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)得到的試樣中左旋多巴質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL);f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。4GB/T40267—202110精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。11其他本方法測(cè)定左旋多巴的檢出限為0.000275g/100g,定量限為0.00110