2024年經(jīng)內(nèi)鏡消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤組織取樣及類器官培養(yǎng)專家共識（完整版）

2024經(jīng)內(nèi)鏡消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤組織取樣及類器官培養(yǎng)專家共識(完整版)等4個部分，共15條陳述。療敏感與否[3,4,5,6,7,8]。但這些預測都是間接的，我們更迫切地前者的缺點在于突變的細胞系已無法反映原始腫瘤的特性，后兩者的缺點在于造模時間長、費用高、難以高通量應用，部分模型也難以反應原始腫瘤的特性；而類器官則可較好地彌補這幾者的缺陷[10,11]?；颊邅碓吹哪[瘤類器官(patient-derivedorganoids,PDO)的樣本主要通過外科手術切除、活組織檢查及采集循環(huán)腫瘤細胞等方式獲得[11]。通過外科手術獲取樣本，患者術后需等待較長時間才能得到敏感性檢測結果。而消化內(nèi)鏡可在術前獲取組織樣本用于培養(yǎng)類器官，以利于患者術后及時得到有效的序貫治療。目前，尚缺乏針對基于消化軟式內(nèi)鏡獲取腫瘤活檢樣本及相關類器官培養(yǎng)的技術規(guī)范。因此，本共識在內(nèi)鏡適應證與倫理、內(nèi)鏡取樣、樣本儲存與運輸和類器官培養(yǎng)等方面內(nèi)容形成統(tǒng)一推薦意見，推動腫瘤內(nèi)鏡取樣與類器官培養(yǎng)規(guī)范化，為未本共識由中華醫(yī)學會消化病學分會醫(yī)工交叉協(xié)作組負責撰寫。共識起草“胰腺癌”“超聲內(nèi)鏡”“活檢”“活檢鉗”“organoid”“esophageal/oesophagealcancer”“gastriccancer”“colorectalcancer”“pancreaticcancer”“endoscopicultrasonography”“biopsy”“forceps”“FNA”“FNB”等關鍵詞在PubMed、Embase、索截止日期為2024年3月1日。ofrecommendations,Assessment,DevelopmentandEvaluation,13,14,15]。類器官培養(yǎng)相關文獻證據(jù)質(zhì)量依據(jù)研究方法和文獻質(zhì)量當共識水平>80%時，認定為共識達成。最終，達成4大類15項專家共識(表3)。1.應用場景癌[16,17]、胃癌[18,19,20]、結直腸癌[21],以及胰腺癌[22]果一致。Zu等[24]得到了相似的結論，且一致性在75%以上。胃性測試，但尚未獲得臨床驗證[18]。(3)結直腸癌的相關研究則更廣泛。Ganesh等[25]研究表明，7例直腸癌PDO對5-氟尿嘧啶和[26]還發(fā)現(xiàn)，直腸癌PDO在預測進展期患者對新輔助放化療反應方面的準確性可達84.43%。這一結果在隨后的研究中也得到了驗證[27,28]。Kong等[29]運用基于STRING數(shù)據(jù)庫蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡的Grossman等[31]對建立的12個胰腺癌PDO進行藥物敏感性測試，等[32]用12例胰腺癌PDO全部抗血小板或抗凝藥物[41,42,43]。強；共識水平：100.0%)倫理委員會的審查和監(jiān)督[46,47,48]。審途，以及樣本處理等相關事宜的知情和同意權利[49],其二是保障國共識水平：100.0%)厚，污染的概率越高[52],且此種情況下獲取的樣本在培養(yǎng)過程中也的清潔程度應達到波士頓評分2分及以上[56]。(2)潰瘍型病變，于潰瘍邊緣隆起部位取樣；(3)彌漫浸潤型病變，要求[57]。由于可能導致腫瘤組織獲取潰瘍型腫瘤邊緣的活檢較少受到真菌污染[52],應盡量于潰瘍堤的偏質(zhì)性[58],單一部位取樣可能無法真實反映腫瘤的特性。因此，對于腺癌轉(zhuǎn)移灶(如肝轉(zhuǎn)移)與原發(fā)病灶存在一定異質(zhì)性[59]。針對此類術(endoscopicultrasound-guidedfineneedlebiopsy,EUS-FNB)取樣，無FNB條件時可采用內(nèi)鏡超聲引導下細針穿刺抽吸術(endoscopicultrasound-guidedfine強；共識水平：100.0%)樣本體積要大于卵圓形活檢鉗[74]。鉗頭是響不顯著[73],但帶針是否有助于獲取更深層的組織卻存在爭議[71,卵圓形(帶針)活檢鉗、帶齒鱷口(帶針)活檢鉗、成角(80°)活檢mm,鉗頭直徑有2.0、2.2、2.3、2.4、2.8mm等規(guī)格[71,73,74,2018年，Tiriac等[77]使用22G活檢針，采用“扇面穿刺”“慢拉”類器官的成功率分別為87%(33/38)與66%(25/38),并且FNB2021年，Lee等[78]報道僅使用19G或22G穿刺針，用FNA方率分別為70%(14/20)與60%(12/20),且類器官與活檢樣本經(jīng)全基因組測序顯示有93%的同源性。2022年，Ikezawa等[79]報道了1例采用25G穿刺針行EUS-FNA,但未能成功培養(yǎng)出類器官。而Ishida等[80]研究顯示，25G穿刺針獲得組織性類器官培養(yǎng)成功率有80%(8/10),22G穿刺針的成功率為57%(16/28)。目前尚缺乏項網(wǎng)狀薈萃分析也顯示，22GFNB并不優(yōu)于22GFNA(RR=1.03,95%CI:0.89~1.18),且該結論同樣適用于25GFNB與25GFNA對腫瘤診斷的準確性和獲取的樣本量，穿刺針的粗細(19G、22G和25G)并無顯著影響[82]。目前，臨床常用的是22G穿刺針[83]。存在困難，失敗率較高[84,85]。25G針則對鉤突病變有相對的診斷陳述8:針對食管、胃、結直腸等腫瘤取樣，應至少取3塊2~3mm大了食管癌[88,89,90,91,92,93]、胃癌[94,95]及結直腸癌[34,87,96,97]類器官。但多數(shù)研究并未提及培養(yǎng)所需活檢樣本的數(shù)量與大小。Zhang等[88]注明使用了2~4塊活檢組織，Derouet等[90]選擇高質(zhì)量核心組織條，并在有條件情況下考慮進行快速現(xiàn)場評估推薦強度：強；共識水平：96.6%)當EUS-FNB/FNA用于診斷時，F(xiàn)NB與FNA分別穿刺2~3針與3~4針即可獲得較滿意的診斷效能[67],且額外增加穿刺針數(shù)并無額外診斷獲益[101]。Tiriac等[77]用FNB取1~2根足量組織條進行類器確認組織量是否足夠，最終類器官的成功率為87%(33/38)。Ishida等[80]則先用1條FNB組織的一部分行ROSE,再用剩余的樣本進行類器官培養(yǎng)，最終培養(yǎng)成功率為63.2%(24/38)?？紤]ROSE對操作醫(yī)師的病理知識水平要求較高，不易在基層推廣，可先常規(guī)應用高的診斷準確率，達97.3%~98%[102,103]。經(jīng)薈萃分析，MOSE的總體診斷準確率為91.3%(95%CI:88.6%~93.3%)[104]。一項似的組織量和診斷效能，且所需穿刺針數(shù)更少[105]。而MOSE與ROSE相比，兩者診斷準確率(97.42%比96.78%)差異無統(tǒng)計學意義[106]。但尚無研究對比有無MOSE或ROSE對穿刺數(shù)量及最終類活檢針穿刺1次和2次獲取的樣本，最終培養(yǎng)得到的PO類器官的成功率分別為88%與81%(P=0.52),得到P5類器官的成功率分別為76%培養(yǎng)類器官，成功率僅有54.4%[108]。需要注意的是，增加穿刺次強度：強；共識水平：100.0%)腫瘤組織質(zhì)量的好壞直接影響類器官培養(yǎng)的成功響類器官培養(yǎng)是否成功的重要因素[109,110]。對于內(nèi)鏡下采集污染風險較大的消化道腫瘤樣存液中，以減少血液污染。確保樣本組織完全浸泡于液體后，立即旋緊管蓋，并用封口膜將管蓋和管頸的縫隙密封。注意樣本離體后應盡快放入組織保存液中。樣本在環(huán)境中暴露時間越長，活性越低，受污染的風險也越高。組織樣本在保存液中的正確保存方式見圖2。1.預處理經(jīng)冷鏈運輸?shù)臉颖镜竭_實驗室后，樣本接收人員應首先檢查和確認運輸預處理后細胞活性、類器官是否形成以及是否有污染等。接收后，應賦類器官是否形成等[112]。但需注意，對于存在包裝破損、漏液等污染孔板如6孔板、24孔板等放于37℃培養(yǎng)箱預熱至少2h。視實際情況進行調(diào)整),吸取消化后上清至另一15mL/50mL離心管3次，并用1mL移液器吸頭用力上下吹打10~20次，注意避免吸頭接數(shù)量大于104,且細胞存活率大于90%時，認為組織消化合格。(37℃,5%CO2)中培養(yǎng)。根據(jù)類器官生長情況，每2~3天換液1(6)傳代、凍存和復蘇：根據(jù)類器官生長情況，按照1:1~1:3進行裝于凍存管中，確保每管包含2000~4000個類器官。然后，將凍存處理樣本以消除紅細胞[113,114,115]。類器官培養(yǎng)流程圖見圖3。識水平：100.0%)檢測密切相關[77,116]。培養(yǎng)初期，應每4.類器官鑒定時根據(jù)情況可選擇免疫熒光、基因檢測等其他鑒定方式[116,118]。次進行4%多聚甲醛固定、脫水、石蠟包埋和切片，根據(jù)需求進行HE原始腫瘤一致的重要標志物，如胃癌標志物LGR5[94]、結直腸癌標志物CDX-2、CK7等[26,111]。近年來，Wang等[119]對體內(nèi)組織和體外類器官進行了腫瘤特異性表達基因CEACAM6的免疫熒光與組織病理學相比，基因檢測在類器官鑒定方面具有更高的精準度，已敏感性檢測中靶向藥物療效的分析，亦有助于類器官樣本庫的建立和完善。Sepp?l?等[120]通過對早期類器官培養(yǎng)過程中突變譜的縱向分析，發(fā)現(xiàn)KRAS突變的廣泛存在證實了培養(yǎng)的類器官的確來源于胰腺惡性腫瘤?；谑彻芟侔┙⒌念惼鞴傺芯勘砻?，類器官不僅與原組織在組織學上具有相似性，且在驅(qū)動體細胞突變事件和全基因組突變特征上也具有一致性，包括p53、PIK3CA和CDKN2A突變[16,121,122]。還有研究采用單核苷酸多態(tài)性/短串聯(lián)重復序列(single-nucleotide及微滴式數(shù)字PCR(digital-dropletPCR,ddPCR)評價拷貝數(shù)變異來驗證類器官與親本組織的一致性[111]。然而，基因檢測存在滯后性及普及性欠佳等問題，故暫不推薦其作為類器官藥物敏感性檢測中的的查通量高、預測效果準、出具報告時間短等優(yōu)點