基于多指標定量指紋圖譜和化學計量學的淫羊藿質(zhì)量標準提高研究

背景介紹現(xiàn)代研究表明，淫羊藿具有抗腫瘤、抑菌、改善老年癡呆等多種顯著的生物活性，因此淫羊藿早已被廣泛應用于醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域。淫羊藿主要化學成分有黃酮類、酚酸類、木脂素類、多糖等化合物，其中黃酮類化合物為主要次生代謝產(chǎn)物，尤以8-異戊烯基黃酮苷含量最高，淫羊藿苷作為最具代表性的8-異戊烯基黃酮苷，更是成為歷版藥典中淫羊藿質(zhì)量控制的指標成分。目前鮮有對淫羊藿苷代謝產(chǎn)物淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ同時進行研究，并對比中國藥典中4個品種淫羊藿的差異，淫羊藿的質(zhì)量標準有待進一步提高。文章亮點1.進一步完善淫羊藿質(zhì)量評價體系，提高淫羊藿質(zhì)量標準；2.以6種8-異戊烯基黃酮苷作為指標成分，通過HPLC對4個品種、共24批次淫羊藿開展多指標定量指紋圖譜的研究，并結(jié)合聚類分析、主成分分析和正交偏最小二乘法判別分析化學計量學方法進行質(zhì)量評價；3.

建立的多指標定量指紋圖譜分析方法穩(wěn)定、可靠，結(jié)合化學計量學可更加全面、快速對淫羊藿進行質(zhì)量評價，為今后提高淫羊藿的質(zhì)量標準提供了科學依據(jù)。內(nèi)容介紹1

實驗部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實驗方法1.2.1

供試品溶液制備精密稱取24批淫羊藿藥材粉末各0.20g，分別置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL后密塞，稱重后超聲提取1h，待冷卻至室溫后再次稱定總重并補足失重，搖勻后8000r/min離心處理5min，取少許上清液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。1.2.2

標準品溶液制備分別精密稱取10.65、10.39、10.05、9.80、10.63、10.43mg朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ標準品于250mL容量瓶中，用70%甲醇溶液超聲溶解后稀釋定容至刻度，混勻后作為標準品儲備液，5℃冰箱保存。1.2.3

色譜條件2

結(jié)果與討論2.1

指紋圖譜方法學考察2.2

指紋圖譜的建立及相似度評價經(jīng)多點校正后全譜峰匹配，得到24批淫羊藿樣品的疊加圖譜見圖1，共標定9個共有峰。如圖2所示，經(jīng)與混合對照品溶液HPLC圖譜比對，確認1號峰為朝藿定A、2號峰為朝藿定B、3號峰為朝藿定C、5號峰為淫羊藿苷、8號峰為淫羊藿次苷Ⅰ、9號峰為寶藿苷Ⅰ。2.3

化學計量學分析使用SPSS26.0版軟件，以24批淫羊藿指紋圖譜的9個共有峰峰面積為變量，采用組間平均連接法，以平方歐氏距離作為測量度，對24批藥材采用系統(tǒng)聚類分析法進行模式識別分析，結(jié)果見圖3。使用SIMCA14.1統(tǒng)計軟件對S1～S24淫羊藿樣品的9個共有峰峰面積進行正交偏最小二乘法分析，從而揭示不同品種淫羊藿之間的主要差異成分（圖4）。如圖5所示，變量重要性指標(VariableImportanceinProjection，VIP)值大于1的成分共有5個，表明這5類成分為不同品種淫羊藿之間的主要差異性成分。2.4

多指標定量方法學考察2.5

樣品含量測定各取0.20gS1～S24批淫羊藿樣品，按照1.2.1方法制備供試品溶液，以1.2.3的色譜條件進樣分析，每個樣品分別檢測3次，得到各峰峰面積并計算淫羊藿苷等6種指標成分的含量。2.6

討論2.6.1

精密度實驗本研究以2020版中國藥典中淫羊藿的總黃酮醇苷項的含量檢測方法為基礎(chǔ)，分別考察了超聲提取時提取溶劑（水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇）和提取時間（30、60、90min）對實驗的影響，確定了淫羊藿指紋圖譜的最佳分析條件，能夠較為全面地體現(xiàn)出淫羊藿中的化學成分信息。2.6.2

精密度實驗本研究增加了淫羊藿苷的活性代謝物淫羊藿次苷I、寶霍苷I作為指標成分，基于HPLC分析方法建立了4個藥典品種淫羊藿的多指標定量指紋圖譜，并結(jié)合化學計量學綜合評價淫羊藿藥材，從而完善淫羊藿質(zhì)量控制和評價體系。3

結(jié)論本實驗通過多指標定量指紋圖譜與化學計量學結(jié)合的方式建立淫羊藿質(zhì)量評價體系，對不同產(chǎn)地的4個藥典品種淫羊藿進行研究，探究其質(zhì)量差異的潛在規(guī)律性，