DB1310-T 345-2024 平菇液體菌種制備技術(shù)規(guī)范

65.020.01CCS

B051310 DB

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—2024平菇液體菌種制備技術(shù)規(guī)范廊坊市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)

布DB

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345—2024 本文件按照GB/T

1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。源與規(guī)劃局、廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：周志國(guó)、陳文杰、解春艷、王艷、侯桂森、任思竹、付強(qiáng)、閆訓(xùn)友、史振霞、張瑞青、杜偉娜、王素霞、喬麗秀、李春葉。DB

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345—20241 范圍本文件規(guī)定了平菇液體菌種的基本要求、生產(chǎn)技術(shù)和生產(chǎn)檔案等要求。本文件適用于平菇液體菌種的制備。2規(guī)范性引用文件文件。GB

150 壓力容器GB

5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB

19172 平菇菌種GB

50073 潔凈廠(chǎng)房設(shè)計(jì)規(guī)范GB/T

食品微生物學(xué)檢驗(yàn)

培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB/T

12728食用菌術(shù)語(yǔ)NY/T

食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語(yǔ)和定義GB/T

12728界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。液體菌種在生物發(fā)酵罐中通過(guò)深層培養(yǎng)(液體發(fā)酵)技術(shù)生產(chǎn)的液體形態(tài)的食用菌菌種。母種經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和單位，也稱(chēng)一級(jí)種、試管種。液體菌種菌齡菌種接入培養(yǎng)基開(kāi)始計(jì)算的液體菌種培養(yǎng)時(shí)間。發(fā)酵罐空消對(duì)尚未加水投料的空發(fā)酵罐進(jìn)行高壓滅菌。發(fā)酵罐實(shí)消指對(duì)投料后的發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。DB

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345—2024通氣量單位時(shí)間通入發(fā)酵罐中無(wú)菌空氣體積與發(fā)酵罐體積的比值。菌種活力菌種的生長(zhǎng)、繁殖能力。4 基本要求人員要求工作人員應(yīng)該保持個(gè)人衛(wèi)生，進(jìn)液體菌種發(fā)酵車(chē)間須穿戴經(jīng)滅菌處理的工作服、口罩、鞋、帽。場(chǎng)所要求生產(chǎn)場(chǎng)所符合NY/T

GB

5749要求。廠(chǎng)房及設(shè)施要求廠(chǎng)房設(shè)計(jì)應(yīng)符合

NY/T

要求。潔凈車(chē)間應(yīng)設(shè)有多功能實(shí)驗(yàn)室、菌種保藏室、無(wú)菌接種室、搖瓶室、發(fā)酵罐室，設(shè)計(jì)符合

50073要求。生產(chǎn)設(shè)備要求關(guān)部門(mén)檢驗(yàn)合格，符合GB

150要求。具有備用電源。5 生產(chǎn)技術(shù)工藝流程工藝流程步驟如圖1所示。圖1 工藝流程步驟DB

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345—2024母種活化母種活化配方及操作流程應(yīng)符合NY/T

528要求?；罨竽阜N質(zhì)量應(yīng)符合GB

要求。搖瓶液體菌種生產(chǎn)5.3.1 容器使用無(wú)色或近無(wú)色專(zhuān)用玻璃三角甁做搖瓶,使用硅膠塞或?qū)Ｓ梅饪谕笟饽みM(jìn)行封口。5.3.2 培養(yǎng)基配方生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB

5749要求，培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)符合NY/T

528要求，玉米粉過(guò)目篩。其中，培養(yǎng)基配方根據(jù)成分不同，分為配方1和配方2：——配方

1：葡萄糖

20

g，蛋白胨

5

g，酵母膏

2

g，磷酸二氫鉀

1

g，硫酸鎂

g，維生素

B1

10mg

1

L，pH

6.0～6.5；——配方

2：玉米粉

10

g，葡萄糖

g，酵母膏

5

g，牛肉膏

2

g，磷酸二氫鉀

2

g，硫酸鎂

1

g，維生素

B1

mg，水

1

L，

6.0～6.5。5.3.3 培養(yǎng)基配制2/5～，并用專(zhuān)用封口透氣膜或硅膠塞封口。5.3.4 滅菌將分裝好的搖瓶放入滅菌鍋內(nèi)，采用高壓滅菌，滅菌溫度控制在

℃～122

℃，維持25

～min。5.3.5 接種7塊～83～4）mm3～4）1～2）的母種塊于搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，菌種塊菌絲面朝上。5.3.6 搖瓶菌種培養(yǎng)接種結(jié)束后封口，放入恒溫箱中23

25

24

h，然后置于搖床上震蕩培養(yǎng)，搖床溫度控制在25

℃±1

℃，轉(zhuǎn)速

r/min，搖床培養(yǎng)5

d～6

d。培養(yǎng)全過(guò)程要求無(wú)光或弱光培養(yǎng)。5.3.7 搖瓶菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1h后菌絲體體積不低于整個(gè)培養(yǎng)液體積的，均勻懸浮于液體培養(yǎng)基中不分層。發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.4.1煮罐、空消驟：在發(fā)酵罐中充滿(mǎn)水，通蒸汽加熱到

℃，煮沸1

h，之后冷卻。注意冷卻過(guò)程中保持罐內(nèi)外及夾DB

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345—2024度126

℃，維持40

～

min。5.4.2 發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)基配方生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB

5749要求，培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)符合NY/T

528要求，玉米粉過(guò)目篩。其中，培養(yǎng)基配方根據(jù)成分不同，分為配方1和配方2：——配方

1：玉米粉

8

g，葡萄糖

15

g，酵母膏

3

g，牛肉膏

2

g，磷酸二氫鉀

2

g，硫酸鎂

1

g，維生素

B1

10

，泡敵

0.4

g，水

1

L，

～；——配方

2：玉米粉

10

g，麥麩

20

g（煮汁），葡萄糖

15

g，蛋白胨

3

g，磷酸二氫鉀

2

g，硫酸鎂

1

g，泡敵

g

1

L，pH

～6.5。5.4.3 投料和定容用溫水把玉米粉等原料攪拌均勻，混合后加入罐體，裝液量為罐體容量的～70%，加入敵做為消泡劑，通入空氣鼓氣攪拌1

min～2

，混合均勻，擰緊上料口蓋。5.4.4 發(fā)酵罐實(shí)消0.05MPa0MPa，維持80～30min，其他與外界有流通的閥門(mén)開(kāi)口如取樣口、排污口、接種口等均要通蒸汽30

滅菌。5.4.5 冷卻滅菌結(jié)束，關(guān)閉空氣過(guò)濾器滅菌閥與排氣閥，緩慢打開(kāi)空氣過(guò)濾器排水閥降壓至0

MPa，夾層通入0.01時(shí)通過(guò)空氣過(guò)濾器向培養(yǎng)層內(nèi)通入無(wú)菌空氣，調(diào)整排氣閥，維持罐壓0.04

MPa～0.05

，培養(yǎng)液溫度降至25

℃時(shí)，關(guān)閉夾層進(jìn)水閥。5.4.6 接種‰～175%0.01菌種倒入發(fā)酵罐接種口，蓋上接種口蓋子，去掉火焰圈，擰緊接種口蓋。5.4.7發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)罐壓0.03

～0.05

MPa，培養(yǎng)溫度控制在23

℃～

℃，培養(yǎng)6

d～7

d。5.4.8 發(fā)酵罐液體菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)平菇發(fā)酵罐液體菌種感官見(jiàn)表1。3.5

pH5.3g/mL0.20.250.5

cmDB

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345—2024表1 平菇發(fā)酵罐液體菌種感官要求5.4.9發(fā)酵罐液體菌種檢測(cè)發(fā)酵罐液體菌種檢測(cè)方法如下：——形態(tài)學(xué)觀(guān)察：主要是通過(guò)肉眼觀(guān)察菌球形態(tài)，包括菌液色澤、菌液形態(tài)、通過(guò)鼻嗅檢測(cè)菌液氣味，通過(guò)顯微鏡觀(guān)察菌絲體形態(tài)?！猵H

測(cè)定：通過(guò)

試紙測(cè)定菌液酸堿度。

小于

5

為不正常。——菌絲濕重測(cè)定：檢測(cè)發(fā)酵水平，方法是稱(chēng)取一定體積的培養(yǎng)液，經(jīng)

10000

5min，稱(chēng)重?！N活力檢測(cè)：將液體菌種接種到

平皿中，測(cè)量菌絲日平均生長(zhǎng)速度?！咕鷻z驗(yàn)：按照無(wú)菌操作從取樣閥取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)液，接種于

中規(guī)定的

PDA

培養(yǎng)基中，置于

35

℃～

℃恒溫培養(yǎng)

h，采用顯微鏡和感官觀(guān)察菌絲生長(zhǎng)狀況和有無(wú)雜菌污染；若出現(xiàn)白色以外的雜色者，或