鄰二氮菲分光光度法測定鐵

鄰二氮菲分光光度法測定鐵

實(shí)驗(yàn)九紫外-可見吸收光譜法又稱紫外-可見分光光度法，是以溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外和可見光譜區(qū)輻射能的選擇性吸收為基礎(chǔ)而建立起來的一類分析方法。紫外光：200-400nm可見光：400-780nm，可被人們的眼睛所感覺特點(diǎn)：帶光譜分子光譜應(yīng)用：定性分析-最大吸收波長定量分析-朗伯-比爾定律（標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法）定性分析原理吸收曲線：以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖4定量分析原理：朗伯—比耳定律

吸光度A：表征物質(zhì)對光吸收程度的量。

A=lgIi/It=-lgT=

bc當(dāng)入射光波長λ及光程b一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比。A--吸光度

--摩爾吸光系數(shù)C--被測物濃度Ii--入射光強(qiáng)T--透過率

b--液層厚度（光程長度）

It--透射光強(qiáng)

工作曲線的繪制與樣品濃度的測量：配制一組含有不同濃度被測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按濃度由低到高的順序測定吸光度值。繪制吸光度對濃度的校準(zhǔn)曲線。在與標(biāo)準(zhǔn)系列測定完全相同的條件下測定試樣的吸光度，從校準(zhǔn)曲線上用內(nèi)插法求出被測元素的含量。工作曲線標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法儀器組成部件各種類型的紫外-可見分光光度計(jì)，如下圖所示，從總體上來說是由五個(gè)部分組成，即光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示記錄裝置。光源檢測器信號顯示記錄裝置吸收池單色器

鎢燈或鹵鎢燈——可見光源350~1000nm氫燈或氘燈——紫外光源200~360nm1）光源：2）吸收池：玻璃——能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū)石英——不吸收紫外光，適用于紫外和可見光3）單色器：光源輻射的復(fù)合光分解為單色光

棱鏡分光-721

光柵分光-722鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)確定實(shí)驗(yàn)條件的方法，掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的方法原理。掌握721,722型分光光度計(jì)的正確使用方法，并了解此儀器的主要構(gòu)造。

根據(jù)朗伯－比耳定律：A=εbc，當(dāng)入射光波長λ及光程b一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比。只要繪出以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出試液的吸光度，就可以由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得對應(yīng)的濃度值，即未知樣的含量。用分光光度法測定試樣中的微量鐵，目前一般采用鄰二氮菲法，該法具有高靈敏度、高選擇性，且穩(wěn)定性好，干擾易消除等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)原理

在pH=2～9的溶液中，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲(phen)生成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能與鄰二氮菲生成3∶1配合物，呈淡藍(lán)色，lgK穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應(yīng)用鹽酸羥胺(NH2OH·HCl)將Fe3+還原為Fe2+，其反應(yīng)式如下：

2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-

測定時(shí)控制溶液的酸度為pH≈5較為適宜。用鄰二氮菲可測定試樣中鐵的總量。實(shí)驗(yàn)操作步驟1．10ug/mL鐵標(biāo)準(zhǔn)使用液和水樣的配制用移液管移取100ug/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)儲備液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入2mL6mol∕LHCl，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。2．標(biāo)準(zhǔn)系列的配制用刻度移液管分別移取上一步驟配制的鐵標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10ug/mL）：0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL依次放入6只50mL容量瓶中，分別加入10%鹽酸羥胺溶液1.0mL，稍搖動放置2分鐘，再加入鄰二氮菲溶液2.0mL及NaAc溶液5mL，稀釋至刻度，充分搖勻。實(shí)驗(yàn)操作步驟3.測量條件實(shí)驗(yàn)——吸收曲線的測繪：取上述標(biāo)準(zhǔn)系列中鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液用量為6.0mL的顯色溶液，在分光光度計(jì)上，從波長440nm開始，以含鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液為0.0mL的試液為參比，每隔20nm測定一次吸光度A值。當(dāng)臨近最大吸收波長附近時(shí)應(yīng)每間隔5～10nm測定一次A值。以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制出吸收曲線，從吸收曲線上確定最大吸收波長（

max).A

4.鐵含量的測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：10mg/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液參比2ml4ml6ml8ml10ml以不加鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的試液為參比液，上一步驟所選擇的最大吸收波長為測定波長，依次測定標(biāo)準(zhǔn)系列中各溶液的吸光度A值。以鐵的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5．試樣微量鐵的測定準(zhǔn)確移取5mL-10mL（以所測吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)為宜）未知試樣溶液，按同樣步驟和方法測定吸光度A值。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出所含鐵的濃度，計(jì)算水樣中鐵的含量。

1.以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，選擇測量的最適宜波長條件。2.以鐵濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出試樣中鐵的含量（以μg/mL表示。數(shù)據(jù)記錄和處理附：721，722型分光光度計(jì)使用方法1.打開電源開關(guān)，儀器預(yù)熱20分鐘2.“波長調(diào)節(jié)器”設(shè)置想要的分析波長，如340nm。3.潤洗比色皿，依次裝入?yún)⒈热芤汉蜏y量溶液4.打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋。注意：一般情況下，參比樣品放在樣品架的第一個(gè)槽位中；儀器所附的比色皿，其透視率是經(jīng)過測試匹配的，未經(jīng)匹配處理的比色皿將影響樣品的測試精度；比色皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕跡。5.參比溶液于光路中，透射比模式下同時(shí)調(diào)0和100%6.在吸光度模式下，測定測量溶