動物實驗基本技術(shù)專家講座

動物試驗基本技術(shù)1動物實驗基本技術(shù)第1頁試驗動物抓取與固定試驗動物分組與標(biāo)識試驗動物被毛去除方法試驗動物給藥試驗動物麻醉試驗動物取血試驗動物處死動物試驗基本技術(shù)2動物實驗基本技術(shù)第2頁一、試驗動物抓取與固定目標(biāo)：暴露手術(shù)操作部位小鼠抓取保定大鼠抓取保定豚鼠抓取保定家兔抓取保定3動物實驗基本技術(shù)第3頁1.小鼠抓取保定抓取：右手抓住鼠尾并提起，把小鼠置于籠蓋或其它粗糙面上，向后方輕拉左手拇指和食指捏住其兩耳和頸部皮膚右手拉緊小鼠尾部，拉直鼠身，左手無名指和小指壓緊尾巴和后肢，中指和手掌心夾住背部皮膚，使小鼠呈一直線保定：四肢及門牙用棉線固定在解剖臺上4動物實驗基本技術(shù)第4頁1.小鼠抓取保定抓?。河沂肿プ∈笪膊⑻崞?，把小鼠置于籠蓋或其它粗糙面上，向后方輕拉左手拇指和食指捏住其兩耳和頸部皮膚右手拉緊小鼠尾部，拉直鼠身，左手無名指和小指壓緊尾巴和后肢，中指和手掌心夾住背部皮膚，使小鼠呈一直線保定：四肢及門牙用棉線固定在解剖臺上5動物實驗基本技術(shù)第5頁2.大鼠抓取保定抓?。夯就∈笥沂肿プ∈笪膊⑻崞?，把大鼠置于籠蓋或其它粗糙面上，向后方輕拉左手次序按卡大鼠背部，稍加壓力向頭部滑行，拇指和食指捏住其兩耳和頸部皮膚右手拉緊大鼠尾部，拉直鼠身，左手其余三指固定背部皮膚在大魚際肌上保定：同小鼠6動物實驗基本技術(shù)第6頁3.豚鼠抓取保定抓?。鹤笫州p輕扣、按住豚鼠背部，順勢抓住其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)握頸部右手托住其臀部抓取時必須快、準(zhǔn)、穩(wěn)、柔7動物實驗基本技術(shù)第7頁4.家兔抓取保定抓?。河沂肿プ☆i背部皮膚，提起家兔左手托住其臀部保定：四肢和門牙固定在手術(shù)臺上，其中前肢是交叉固定。8動物實驗基本技術(shù)第8頁4.家兔抓取保定抓?。河沂肿プ☆i背部皮膚，提起家兔左手托住其臀部保定：四肢和門牙固定在手術(shù)臺上，其中前肢是交叉固定。9動物實驗基本技術(shù)第9頁二、試驗動物分組與標(biāo)識1.分組：分組標(biāo)準(zhǔn)--隨機(jī)分組每只動物都有同等機(jī)會被分配到各個試驗組中去，防止人為原因?qū)υ囼炘斐捎绊?。建立對照組10動物實驗基本技術(shù)第10頁分組標(biāo)準(zhǔn)--隨機(jī)分組(1)完全隨機(jī)分組：將全部動物編號從隨機(jī)數(shù)表中任取一段隨機(jī)數(shù)字，給各個動物依次配號按所配數(shù)字奇偶（兩組）或除以組數(shù)后余數(shù)（兩組以上）作為歸入組次分組最終隨機(jī)調(diào)整，使各組動物數(shù)到達(dá)均等11動物實驗基本技術(shù)第11頁完全隨機(jī)分組--如小鼠20只，分甲、乙兩組小鼠編為1號～20號隨機(jī)數(shù)表中取出20個隨機(jī)數(shù)依次分配給1～20號動物設(shè)單數(shù)為甲組，雙數(shù)為乙組（下表），結(jié)果甲組9只，乙組11只動物編號1234567891011121314151617181920隨機(jī)數(shù)0347437386369647366168343013705574307712組別甲甲甲甲乙乙乙甲乙甲乙乙乙甲乙甲乙乙甲乙分組標(biāo)準(zhǔn)--隨機(jī)分組(1)12動物實驗基本技術(shù)第12頁完全隨機(jī)分組--如小鼠20只，分甲、乙兩組小鼠編為1號～20號隨機(jī)數(shù)表中取出20個隨機(jī)數(shù)依次分配給1～20號動物設(shè)單數(shù)為甲組，雙數(shù)為乙組（表1-3-2），結(jié)果甲組9只，乙組11只再查隨機(jī)數(shù)表第21個數(shù)為13，將13÷11＝1余2。則將乙組中第二位（6號動物）取出給甲組。若差數(shù)﹥2，可依次法調(diào)整直至兩組動物數(shù)相等。分組標(biāo)準(zhǔn)--隨機(jī)分組(1)13動物實驗基本技術(shù)第13頁簡化隨機(jī)分組--實際工作中從隨機(jī)數(shù)表中任一數(shù)字開始次序取數(shù)，把取得隨機(jī)數(shù)除以組數(shù)，將所得余數(shù)作為這一輪開始分配組次，從該組開始次序分配一只再取下一個隨機(jī)數(shù)，除以組數(shù)，所得余數(shù)作為下一輪分配開始組次，次序分配每組一只，直到分完為止。分組標(biāo)準(zhǔn)--隨機(jī)分組(2)14動物實驗基本技術(shù)第14頁空白對照--不加任何處理，排除動物本身影響試驗對照--試驗條件對照標(biāo)準(zhǔn)對照--標(biāo)準(zhǔn)值對照（陽性對照）本身對照--本身前后對照相互對照--各試驗組相互對照建立對照組15動物實驗基本技術(shù)第15頁目標(biāo)--將同種動物進(jìn)行區(qū)分，方便于觀察。要求--編號方法不對動物生理或試驗反應(yīng)產(chǎn)生影響，且號碼清楚、易認(rèn)和耐久。慣用方法：染色法耳孔法烙印法掛牌法2.標(biāo)識編號16動物實驗基本技術(shù)第16頁用化學(xué)藥品在試驗動物身體顯著部位涂染，以染色部位、顏色標(biāo)識區(qū)分試驗動物。缺點(diǎn)：長時間使用，染色劑會自行褪色，需不停補(bǔ)充和加深染色--慢性試驗不適用染色劑毒性對試驗動物影響適用動物--大、小鼠染色法17動物實驗基本技術(shù)第17頁3%～5%苦味酸，染成黃色0.5%中性紅或品紅溶液，染成紅色2%硝酸銀溶液，染成咖啡色煤焦油酒精溶液，染成黑色染色法--慣用染色劑18動物實驗基本技術(shù)第18頁單色涂染法：單一顏色染色劑涂染涂染次序：從左到右，從上到下適合用于每組試驗動物不超出10只染色法--染色方法19動物實驗基本技術(shù)第19頁雙色涂染法：兩種顏色同時染色標(biāo)識，一個標(biāo)識為個位數(shù)，另一個標(biāo)識為十位數(shù)涂染方法同單色涂染法可標(biāo)識100位以內(nèi)號碼直接標(biāo)號法：染色劑直接在試驗動物身上編寫號碼試驗動物太小或號碼位數(shù)太多不宜染色法--染色方法20動物實驗基本技術(shù)第20頁用打孔機(jī)直接在試驗動物耳朵上打孔編號，依據(jù)打在動物耳朵上部位和孔多少來區(qū)分試驗動物。打孔后須用消毒過滑石粉抹在打孔局部，以免傷口愈合將耳孔閉合。也可用剪刀在試驗動物耳廓上剪缺口方法來區(qū)分試驗動物。適用動物--家兔耳孔法21動物實驗基本技術(shù)第21頁用打孔機(jī)直接在試驗動物耳朵上打孔編號，依據(jù)打在動物耳朵上部位和孔多少來區(qū)分試驗動物。打孔后須用消毒過滑石粉抹在打孔局部，以免傷口愈合將耳孔閉合。也可用剪刀在試驗動物耳廓上剪缺口方法來區(qū)分試驗動物。適用動物--家兔耳孔法22動物實驗基本技術(shù)第22頁直接把標(biāo)識編號烙印在試驗動物身上，如蓋印章一樣，用來區(qū)分試驗動物。適用動物--犬烙印法23動物實驗基本技術(shù)第23頁將編好號碼烙印在金屬牌上，掛在試驗動物頸部、耳部、肢體或籠具上，用來區(qū)分試驗動物。適用動物--犬、猴和貓掛牌法24動物實驗基本技術(shù)第24頁三、試驗動物被毛去除方法目標(biāo)：去除試驗操作局部被毛，可防止影響試驗操作和觀察。慣用被毛去除方法：拔毛法剪毛法剃毛法脫毛法25動物實驗基本技術(shù)第25頁1.拔毛法方法：固定動物后，用食指和拇指將暴露部位毛拔去。優(yōu)點(diǎn)：刺激局部組織產(chǎn)生擴(kuò)張血管作用采取部位：血管暴露，進(jìn)行采血或動、靜脈穿刺，如兔耳緣靜脈、鼠尾靜脈采血26動物實驗基本技術(shù)第26頁2.剪毛法方法：固定動物后，用水濕潤局部被毛，繃緊局部皮膚，用剪刀緊貼皮膚表面剪去被毛。采取部位：皮膚暴露，進(jìn)行手術(shù)操作需要，如兔和犬頸部手術(shù)，兔胸、腹部手術(shù)注意：剪毛過程中不可提起被毛剪下被毛應(yīng)及時清理27動物實驗基本技術(shù)第27頁3.剃毛法方法：固定動物后，用刷子蘸溫肥皂水將局部被毛濕潤，用剪毛法剪去被毛，然后用剃毛刀逆被毛生長方向剃去殘余被毛。采取部位：皮膚暴露，大動物手術(shù)區(qū)域皮膚術(shù)前準(zhǔn)備注意：剃毛時必須繃緊局部皮膚28動物實驗基本技術(shù)第28頁4.脫毛法方法：剪去局部被毛，用鑷子夾棉球或紗布蘸脫毛劑涂抹在已剪去被毛部位，35min后用溫水洗去脫下毛和脫毛劑，用干紗布擦干后涂上一層油脂。采取部位：皮膚暴露，如大動物無菌手術(shù)、局部皮膚刺激性試驗和局部血液循環(huán)慣用脫毛劑：(鼠和兔用1、2，犬用3)配方1：硫化鈉8g溶于100ml水中配方2：硫化鈉:肥皂粉:淀粉為3:1:7，加水成糊狀配方3：硫化鈉10g和生石灰15g溶于100ml水中29動物實驗基本技術(shù)第29頁四、試驗動物給藥灌胃皮下注射靜脈注射腹腔注射30動物實驗基本技術(shù)第30頁1.灌胃準(zhǔn)備：連接灌胃針注射器吸入待灌藥液31動物實驗基本技術(shù)第31頁1.灌胃準(zhǔn)備：連接灌胃針注射器吸入待灌藥液過程：一手固定動物，并使體位為頭高位一手持注射器，將灌胃針從動物口角插入，并緊貼上腭，經(jīng)咽后壁插入至預(yù)定深度深度：小鼠3cm，大鼠5cm灌胃量：小鼠0.01～0.03ml/g，大鼠0.01～0.02ml/g

32動物實驗基本技術(shù)第32頁1.灌胃準(zhǔn)備：連接灌胃針注射器吸入待灌藥液過程：一手固定動物，并使體位為頭高位一手持注射器，將灌胃針從動物口角插入，并緊貼上腭，經(jīng)咽后壁插入至預(yù)定深度深度：小鼠3cm，大鼠5cm灌胃量：小鼠0.01～0.03ml/g，大鼠0.01～0.02ml/g

33動物實驗基本技術(shù)第33頁2.皮下注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：局部皮膚消毒（背部）一手拇指和中指將背部皮膚提起，食指輕按其皮膚，使其形成一個三角小窩一手持注射器從三角窩下部刺入皮下，輕輕擺動針頭，易搖動表明針尖在皮下，回抽無血后注入藥液拔針時左手捏住針刺部位片刻，預(yù)防藥液流出注射量：小鼠0.01ml/g，大鼠0.01～0.03ml/g

34動物實驗基本技術(shù)第34頁3.靜脈注射（尾靜脈）準(zhǔn)備：全新注射器吸入待注射藥液動物固定在固定器中，并露出尾巴用45℃～50℃溫水浸泡尾部半分鐘或用75%酒精棉球擦拭尾部，使血管擴(kuò)張充血、表皮角質(zhì)軟化35動物實驗基本技術(shù)第35頁3.靜脈注射（尾靜脈）準(zhǔn)備：過程：(1)一手拇指與食指捏住尾部兩側(cè)，中指從下托起尾巴，無名指和小指夾持尾尖部一手持注射器使針頭與靜脈平行（小于30°角）刺入，推進(jìn)藥液無阻力、無皮丘，可注入藥液注射完成后尾部向注射側(cè)彎曲或以消毒棉簽止血36動物實驗基本技術(shù)第36頁3.靜脈注射（尾靜脈）準(zhǔn)備：過程：(1)一手拇指與食指捏住尾部兩側(cè)，中指從下托起尾巴，無名指和小指夾持尾尖部一手持注射器使針頭與靜脈平行（小于30°角）刺入，推進(jìn)藥液無阻力、無皮丘，可注入藥液注射完成后尾部向注射側(cè)彎曲或以消毒棉簽止血37動物實驗基本技術(shù)第37頁3.靜脈注射（尾靜脈）準(zhǔn)備：過程：(2)一手食指與中指從下托起尾巴，無名指和小指夾持尾尖部,拇指輕按尾部38動物實驗基本技術(shù)第38頁3.靜脈注射（尾靜脈）準(zhǔn)備：過程：注射量：0.005～0.01ml/g

39動物實驗基本技術(shù)第39頁4.腹腔注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：一手固定動物，腹部向上，且呈頭低位40動物實驗基本技術(shù)第40頁4.腹腔注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：一手固定動物，腹部向上，且呈頭低位局部皮膚消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，針頭向前推進(jìn)3mm后，注射針頭與皮膚面呈45°角刺入腹肌41動物實驗基本技術(shù)第41頁4.腹腔注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：一手固定動物，腹部向上，且呈頭低位局部皮膚消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，針頭向前推進(jìn)3mm后，注射針頭與皮膚面呈45°角刺入腹肌42動物實驗基本技術(shù)第42頁4.腹腔注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：一手固定動物，腹部向上，且呈頭低位局部皮膚消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，針頭向前推進(jìn)3mm后，注射針頭與皮膚面呈45°角刺入腹肌43動物實驗基本技術(shù)第43頁4.腹腔注射準(zhǔn)備：注射器吸入待注射藥液過程：一手固定動物，腹部向上，且呈頭低位局部皮膚消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，針頭向前推進(jìn)3mm后，注射針頭與皮膚面呈45°角刺入腹肌注射量：0.01～0.02ml/g

44動物實驗基本技術(shù)第44頁五、試驗動物麻醉目標(biāo)：消除動物在手術(shù)或試驗中疼痛，降低掙扎，使試驗便于操作和順利進(jìn)行。關(guān)鍵：選擇麻醉藥和麻醉方法慣用麻醉藥給藥方法和劑量(表)45動物實驗基本技術(shù)第45頁五、試驗動物麻醉麻醉藥品濃度動物給藥方法劑量（g/kg）維持時間（h）備注乙醚各種動物連續(xù)吸入試驗決定戊巴比妥鈉3%兔、狗、貓iv、ip0.032～4sc0.052～42%小鼠、大鼠ip0.042～4豚鼠ip0.042～4硫噴妥鈉5%兔、狗、貓iv0.0215～30min呼吸抑制較嚴(yán)重，注射必須遲緩ip0.0415～30min2%小鼠、大鼠ip0.0415～30min氨基甲酸乙酯20%兔、狗、貓iv、ip1.002～4毒性較小，安全10%小鼠、大鼠ip1.002～4豚鼠ip1.002～4蛙淋巴囊2.002～4氨基甲酸乙酯+氯醛糖10%+1%兔、貓、大鼠iv、ip0.5+0.0556安全，肌松不完全46動物實驗基本技術(shù)第46頁六、試驗動物取血剪尾取血法眼眶動脈和靜脈取血法頸動脈及靜脈、股動脈及靜脈取血法斷頭取血法47動物實驗基本技術(shù)第47頁1.剪尾取血法過程：動物固定并露出尾巴用45℃～50℃溫水浸泡尾部半分鐘或用75%酒精棉球擦拭尾部，使血管擴(kuò)張充血用剪刀剪斷尾尖或尖銳刀片切割一段尾靜脈，即可流出。用手輕輕地從尾根部向尾尖擠捏，可取到更多血液。取血量：0.3～0.5ml/次

48動物實驗基本技術(shù)第48頁2.眼眶動脈和靜脈取血法過程：一手將鼠倒置固定，且用拇指和食指捏緊頭頸部皮膚，使鼠眼球突出。一手持眼科彎鑷或止血鉗，鉗夾一側(cè)眼球根部，將眼球摘出，并用鑷子頭部捅破眼球后包膜，將血滴入玻璃管內(nèi)，直至流血停頓取血量：體重4%～5%血液量

49動物實驗基本技術(shù)第49頁3.頸動靜脈、股動靜脈取血法過程：一手將鼠麻醉仰臥固定，分離暴露出上述血管一手持注射針沿動脈或靜脈走向平行刺入血管，抽取所需血量取血量：小鼠抽血0.6ml/20g

大鼠抽血8ml/300g50動物實驗基本技術(shù)第50頁4.斷頭取血法準(zhǔn)備：試驗者帶上厚手套過程：一手拇指和食指抓緊鼠頸部位皮膚，并將動物頭朝下一手持剪刀，剪掉鼠頸部，讓血流入試管內(nèi)取血量：小鼠抽血0.8～1.2ml

大鼠抽血5～10ml51動物實驗基本技術(shù)第51頁七、試驗動物處死和器官剖解試驗動物處死目標(biāo)：發(fā)揚(yáng)人道主義精神，愛護(hù)和善待動物--試驗結(jié)束后，應(yīng)讓動物無痛苦地死亡或盡可能降低死亡痛苦。小鼠和大鼠處死試驗動物器官剖解小鼠和大鼠器官剖解52動物實驗基本技術(shù)第52頁1.小鼠和大鼠處死頸椎脫臼法：用攝子或用左手拇指與食指向下壓住鼠頭部枕骨處，另一只手抓住鼠尾用力向后拉，使之頸椎脫臼，鼠馬上死亡。斷頭法：在鼠頸部用剪刀快速將鼠頭剪掉，鼠因斷頭和大出血而死。

打擊法：用手抓住鼠尾并提起，將其頭部猛擊地面，或用小木錘用力敲擊鼠頭，使鼠致死。過量麻醉法：快速過量注射麻醉藥（麻醉時30倍）53動物實驗基本技術(shù)第53頁2.小鼠和大鼠器官剖解時間：處死后應(yīng)馬上剖解，越早越好，最好在處死后2～3min內(nèi)解剖器官。

體位：以仰臥位固定動物尸體

次序：先腹腔后胸腔，再腦、脊髓、骨髓和皮膚肌肉等

54動物實驗基本技術(shù)第54頁腹腔器官暴露器官：沿腹部正中線切開腹前壁，再沿最低位肋骨分別向左右兩側(cè)切開側(cè)腹壁至脊柱兩旁，完全暴露腹腔器官。剖取次序：脾、肝、胃、胰、腸、腎和腎上腺等。盆腔器官：剝離相連組織后，將雄性動物兩側(cè)輸尿管、膀胱、睪丸、精囊腺、前列腺一同取出；雌性動物可將兩側(cè)卵巢、輸卵管、子宮角、子宮體一同取出。55動物實驗基本技術(shù)第55頁胸腔器官用鑷子夾住胸骨劍突，剪斷膈肌與胸骨連接，提起胸骨，在胸椎兩側(cè)分別剪斷左、右側(cè)胸壁肋骨，取下整個胸壁，依次取出胸腺和心臟。將下頜兩下頜支內(nèi)側(cè)與舌連接肌肉切斷，將咽、喉、氣管、食管與周圍組織分離，用鑷子夾住氣管向上提起，剪斷肺與胸膜連接韌帶，然后將咽、喉、氣管、食管邊同整個肺一并取出。56動物實驗基本技術(shù)第56頁顱腔及腦小動物：從枕骨剪開顱骨，小心剪去顱頂骨片，暴露大腦、小腦和延髓。大動物：可用弓形鋸沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm連線鋸開，用刀背輕輕將腦從顱底分出，依次切斷各對腦神經(jīng)，借腦本身重量從顱內(nèi)脫出，再切斷延髓和脊髓交界處，用