GB/T 41728-2022 微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通 用準(zhǔn)則（正式版）

微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通用準(zhǔn)則國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T41728—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由中國(guó)石油和化學(xué)工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。本文件由全國(guó)肥料和土壤調(diào)理劑標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC105)歸口。本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所。1GB/T41728—2022微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通用準(zhǔn)則1范圍本文件規(guī)定了微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通用要求、菌種安全性分級(jí)、評(píng)價(jià)程序、試驗(yàn)方法和結(jié)果評(píng)價(jià)。本文件適用于微生物肥料的質(zhì)量安全評(píng)價(jià)。下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文本文件。GB15193.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)GB20287農(nóng)用微生物菌劑GB38400肥料中有毒有害物質(zhì)的限量要求NY/T798復(fù)合微生物肥料NY/T884生物有機(jī)肥NY/T1113微生物肥料術(shù)語(yǔ)NY/T1736微生物肥料菌種鑒定技術(shù)規(guī)范NY/T2066微生物肥料生產(chǎn)菌株的鑒別聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法NY/T3083農(nóng)用微生物濃縮制劑3術(shù)語(yǔ)和定義NY/T1113界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1微生物肥料microbialfertilizer;biofertilizer3.2產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)qualityandsafety3.3受試物testsubstances被測(cè)試的單一成分或混合物。2GB/T41728—20223.4急性經(jīng)口毒性acuteoraltoxicity一次或在24h內(nèi)多次經(jīng)口給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受試物后3.5半數(shù)致死量medianlethaldoseLD?0經(jīng)口一次或24h內(nèi)多次給予受試物后，能夠引起動(dòng)物死亡率為50%的受試物劑量，該劑量為經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)得出的計(jì)算值。其單位是每千克體重所攝入受試物質(zhì)的毫克數(shù)或克數(shù)，即mg/kg或g/kg。4通用要求4.1用于評(píng)價(jià)的微生物肥料其產(chǎn)品質(zhì)量應(yīng)符合GB20287、NY/T884、NY/T798、NY/T3083等相應(yīng)4.2微生物肥料生產(chǎn)用菌種依據(jù)其安全級(jí)別分為四級(jí)管理，菌種安全分級(jí)目錄依據(jù)附錄A;未列入附4.3生產(chǎn)用菌株可通過(guò)分析其基因組中是否存在毒素、溶血素、抗生素等具安全風(fēng)險(xiǎn)的基因及基因簇4.4考慮到微生物肥料生產(chǎn)原料和功能菌吸附載體復(fù)雜多樣，所有微生物肥料產(chǎn)品均采用急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)進(jìn)行其安全評(píng)價(jià)。5菌種安全性分級(jí)——第一級(jí)(見(jiàn)A.1)為免做毒理學(xué)試驗(yàn)的菌種。 第二級(jí)(見(jiàn)A.2)為應(yīng)做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的菌種?！谌?jí)(見(jiàn)A.3)為應(yīng)做致病性試驗(yàn)的菌種?！谒募?jí)(見(jiàn)A.4)為禁用菌種。6評(píng)價(jià)程序6.1.1應(yīng)依據(jù)NY/T1736、NY/T2066等提供微生物肥料生產(chǎn)用菌種的鑒定報(bào)告，包括屬及種的拉丁6.1.2根據(jù)菌種的鑒定信息，按照附錄A的規(guī)定，確定菌種安全級(jí)別以及需要做的毒理學(xué)試驗(yàn)和毒理6.1.3對(duì)于需做毒理學(xué)試驗(yàn)的菌種，生產(chǎn)者需提供試驗(yàn)用純菌種，經(jīng)復(fù)核確認(rèn)與該菌種鑒定資料相符3GB/T41728—20226.2產(chǎn)品評(píng)價(jià)程序7試驗(yàn)方法將試驗(yàn)菌種接種于適宜的培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)一定時(shí)間，用生理鹽水調(diào)整菌液濃度至2.0×10?CFU/mL～2.0×10?CFU/mL,該菌懸液為菌種受試物。按GB15193.3的規(guī)定執(zhí)行。同7.2。按附錄B的規(guī)定執(zhí)行。7.3.3.1.2質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303等。7.3.3.2.1實(shí)驗(yàn)室常用儀器。7.3.3.2.2培養(yǎng)箱。2)h后觀(guān)察有無(wú)溶血環(huán)產(chǎn)生。同時(shí)，用已知陽(yáng)性菌株金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303等作為質(zhì)控菌株。4GB/T41728—20227.3.4.1.1抗菌藥物：可選用頭孢唑啉(CZ)、頭孢哌酮(CFP)、四環(huán)素(TE)、強(qiáng)力霉素(DO素(AM)、丁胺卡那霉素(AN)、環(huán)丙沙星(CIP)、鏈霉素(S)、復(fù)方新諾明(SXT)、慶大霉素(GM)、氯霉素(C)、克林霉素(CLN)、萬(wàn)古霉素(VAN)、甲氟哌酸(PEF)、氟啶酸(ENO)、黃連素(BerberineHydro-chloride)、兩性霉素B(AMB)、氟康唑(FLU)、伊曲康唑(ITC)、益康唑(ECN)、咪康唑(MCL)、酮康唑7.3.4.1.2質(zhì)控菌株：大腸埃希氏菌ATCC25922、釀酒酵母ATCC9763等標(biāo)準(zhǔn)菌株。7.3.4.2.2培養(yǎng)箱。7.3.4.3操作步驟7.3.4.3.1用無(wú)菌棉拭子將受試物均勻涂抹于適宜培養(yǎng)基平板表面，共3次7.3.4.3.2用無(wú)菌棉拭子蘸取濃度為2.0×10?CFU/mL～2.0×10?CFU/mL質(zhì)控菌株菌懸液，均勻涂7.3.4.3.3以無(wú)菌操作取出抗菌藥物紙片分別貼在涂有受試物和質(zhì)控菌株菌懸液的平板培養(yǎng)基表面，每個(gè)平板放4個(gè)～6個(gè)紙片。然后將平板置于適宜溫度下培養(yǎng)，18h～72h后觀(guān)察抗菌藥物紙片周?chē)袩o(wú)抑菌環(huán)，量取并記錄其直徑(包括紙片直徑)大小，單位為毫米(mm)。應(yīng)做3個(gè)平行試驗(yàn)，取其均值。大腸埃希氏菌ATCC25922、釀酒酵母ATCC9763等標(biāo)準(zhǔn)菌株。清潔級(jí)健康成年昆明小鼠(Kunmingmice)或BALB/c小鼠(BALB/cmice)。射受試物。于腹腔注射后第3天、第7天分別取存活的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雌、雄各5只解剖，并做大體病理學(xué)觀(guān)察和病理組織學(xué)檢查。腹腔注射后第14天將剩余實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死、解剖并做大體病理學(xué)觀(guān)察和病理組織學(xué)檢查。5GB/T41728—2022根據(jù)試驗(yàn)周期內(nèi)動(dòng)物有無(wú)死亡及出現(xiàn)的中毒體征、大體病理學(xué)觀(guān)察及病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)病變的程度進(jìn)行分級(jí)判定(見(jiàn)表1)。級(jí)別判定依據(jù)強(qiáng)致病性動(dòng)物出現(xiàn)死亡，死亡動(dòng)物及24h以上存活動(dòng)物在第3天、第7天經(jīng)解剖肉眼檢查和病理組織學(xué)檢查即可發(fā)現(xiàn)臟器的明顯病變?nèi)踔虏⌒詣?dòng)物有中毒體征無(wú)死亡，動(dòng)物第14天經(jīng)解剖肉眼檢查和病理組織學(xué)檢查可發(fā)現(xiàn)臟器的明顯病變無(wú)致病性動(dòng)物無(wú)中毒體征無(wú)死亡，動(dòng)物第14天經(jīng)解剖肉眼檢查和病理組織學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)臟器的明顯病變按附錄C的規(guī)定執(zhí)行。8結(jié)果評(píng)價(jià)凡按附錄D評(píng)價(jià)為有毒或任一致病性試驗(yàn)不通過(guò)的菌種(株),均不應(yīng)作為微生物肥料生產(chǎn)用菌描述由中毒表現(xiàn)初步提示的毒作用特征，根據(jù)LDs。值確定受試物的急性毒性分級(jí)，按附錄D執(zhí)結(jié)果評(píng)價(jià)同8.2。受試菌株應(yīng)對(duì)2種及2種以上的抗菌藥物敏感；否則，應(yīng)放棄使用。6GB/T41728—20227菌種安全分級(jí)目錄AzorhizobiumcaulinodansAzorhizobiumdoebereineraeBradyrhizobiumbetaeBradyrhizobiumdiazoefficiBradyrhizobiumjaponicumBradyrhizobiumBradyrhizobiumBradyrhizobiumBradyrhizobiumBradyrhizobiumyuanmingenseMesorhizobiumhuakuiiMesorhizobiumlotiNeorhizobiumgalegae(Rhizobiumgalegae)RhizobiumfabaeRhizobiumleguminosarumSinorhizobiumfredii菌)華癸中間根瘤菌(華癸中生根瘤菌)百脈根中間根瘤菌(百脈根中生根瘤菌)山羊豆新根瘤菌(山羊豆根瘤菌)豆根瘤菌(菜豆根瘤菌，埃特里根瘤菌)蠶豆根瘤菌豌豆根瘤菌A.1.2自生及聯(lián)合固氮微生物類(lèi)Azorhizophiluspaspali(Azotobacterpaspali)雀稗固氮嗜根菌(雀稗固氮菌)Azospirillumbrasilense巴西固氮螺菌AzospirillumlipoferumAzotobacterbeijerinckiiAzotobactersalinestrisAzotobactervinelandiiBeijerinckiaindica瓦恩蘭德固氮菌(棕色固氮菌)印度拜葉林克氏菌8GB/T41728—2022Blastochlorisviridis(Rhodopseudomonasviridis)Cereibacterazotoformans(Rhodobacterazotofor-mans)Cereibactersphaeroides(Rhodobactersphaeroides,Rhodopseudomonassphaeroides)Magnetospirillumfulvum(Phaeospirillumfulvum,Rhodospirillumfulvum)Marichromatiumgraccapsulatus(RhodopseudomonasRhodobactercapsulatus(Rhodopseudomonascapsulata)Rhodoblastusacidophilus(Rhodopseudomonasacidophila)RhodococcusaetherivoransRhodopilaglobiformis(Rhodopseudomonasglobiformis)Rhodopseudomonaspalustris(Rhodopseudomonasrutila)RhodospirillumrubrumRhodovibriosalinarum(Rhodospirillumsalinarum)Rhodovulumsulfidophilum(Rhodobactersulfidophilus,Rhodopseudomomassulfidophila)Rubrivivaxgelatinosus(Rhodocyclusgelatinosus,Rhodopseudomonasgelatinosa)類(lèi)球蠟桿菌(類(lèi)球紅細(xì)菌，類(lèi)球紅假單胞菌)黃褐磁螺菌(黃褐棕色螺旋菌，黃褐紅螺菌)纖細(xì)海著色菌(纖細(xì)海洋著色菌)莢膜紅細(xì)菌(莢膜紅假單胞菌)嗜酸紅芽菌(嗜酸紅假單胞菌)沼澤紅假單胞菌(血紅紅假單胞菌)鹽場(chǎng)玫瑰弧菌(鹽場(chǎng)紅螺菌)嗜硫小紅卵菌(嗜硫紅細(xì)菌，嗜硫紅假單胞菌)A.1.4促生、分解磷鉀化合物細(xì)菌類(lèi)Acidithiobacillusthiooxidans(Thiobacillusthiooxidans)硫氧化酸硫桿狀菌(硫氧化硫桿菌)BacillusBacillusamyloliquefaciens地衣芽孢桿菌BacillussubtilisBacillusvelezensis(BacillusBrevibacillusBrevibacillusBrevibacillusBrevibacilluslaterosporusparabrevisreuszeri枯草芽孢桿菌methylotrophicus)貝菜斯芽孢桿菌(甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌)側(cè)孢短芽孢桿菌茹氏短芽孢桿菌9GB/T41728—2022Cytobacillusfirmus(Bacillusfirmus)PaenibacilluspolymyxaPaenibacillusxylanilyticusPeribacillussimplex(Bacillussimpler)Priestiamegaterium(Bacillusmegaterium)堅(jiān)強(qiáng)細(xì)胞芽孢桿菌(堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌)嗜熱嗜脂肪地芽孢桿菌(嗜熱脂肪地芽孢桿菌)固氮類(lèi)芽孢桿菌巴西類(lèi)芽孢桿菌堅(jiān)韌類(lèi)芽孢桿菌克里布所類(lèi)芽孢桿菌膠凍樣類(lèi)芽孢桿菌皮爾瑞俄類(lèi)芽孢桿菌多粘類(lèi)芽孢桿菌解木聚糖類(lèi)芽孢桿菌簡(jiǎn)單佩里芽孢桿菌(簡(jiǎn)單芽孢桿菌)巨大普里斯蒂亞菌(巨大芽孢桿菌)凝結(jié)魏茨曼尼亞菌(凝結(jié)芽孢桿菌)A.1.5乳酸菌類(lèi)干酪乳酪桿菌(干酪乳桿菌)類(lèi)干酪乳酪桿菌(類(lèi)干酪乳桿菌)paracasei)Lactiplantibacillusplantarum(Lactobacillus植物乳植桿菌(植物乳桿菌)plantarum)嗜酸乳桿菌德氏乳桿菌瑞士乳桿菌布氏慢生乳桿菌(布氏乳桿菌)Lentilactobacillushilgardii(Lactobacillus希氏慢生乳桿菌(希氏乳桿菌)hilgardii)Lentilactobacillusparabuchneri(Lactobacillus類(lèi)布氏慢生乳桿菌(類(lèi)布氏乳桿菌)Lentilactobacillusparafarraginis(Lactobacillus類(lèi)谷糠慢生乳桿菌(類(lèi)谷糠乳桿菌)Ligilactobacillusacidipiscis(Lactobacillusfermentum)PediococcuspentosaceusA.1.6酵母菌類(lèi)Candidaethanolica短發(fā)酵乳桿菌(短乳桿菌)酸魚(yú)聯(lián)合乳桿菌(酸魚(yú)乳桿菌)發(fā)酵粘乳桿菌(發(fā)酵乳桿菌)戊糖片球菌乙醇假絲酵母GB/T41728—2022CandidamembranifaciensCyberlindnerafabianii(Pichiafabianii)Cyberlindnerajadinii(Candidautilis,Pichiajadinii)Kazachstaniaexigua(Saccharomycesexiguus)KluyveromyceslactisKomagataellapastoris(Pichiapastoris)MetschnikowiafructicolaMeyerozymaguilliermondii(Candidaguillermondii,Pichiaguilliermondii)Millerozymafarinosa(Pichiafarinosa)膜酸假絲酵母葡萄牙棒孢酵母費(fèi)比恩塞伯林德納氏酵母(費(fèi)比恩畢赤酵母)杰丁塞伯林德納氏酵母(產(chǎn)朊假絲酵母，杰丁畢赤酵母)少孢哈薩克斯坦酵母(少孢酵母)乳酸克魯維酵母巴斯德駒形氏酵母(巴斯德畢赤酵母)果生梅奇酵母季也蒙邁耶氏酵母(季也蒙假絲酵母，季也蒙畢赤酵母)粉狀米勒氏酵母(粉狀畢赤酵母)膜酵畢赤酵母Rhodotorulamucilaginosa(Rhodotorularubra)Saccharomycescerevisiaefibuligera(EndomycopsisSaccharomycopsisfibuligera(Endomycopsisfibuliger)Wickerhamomycesanomalus(Pichiaanomala)Yarrowialipolytica(Candidalipolytica)膠紅酵母(深紅酵母)釀酒酵母扣囊復(fù)膜孢酵母(扣囊擬內(nèi)孢霉)異常威克漢姆酵母(異常畢赤酵母)解脂耶羅威亞酵母(解脂假絲酵母)A.1.7叢枝菌根(AM)真菌類(lèi)Funneliformismosseae(Glomusmosseae)摩西管柄囊霉(摩西球囊霉)Rhizophagusintraradices(Glomusintraradices)根內(nèi)根孢囊霉(根內(nèi)球囊霉，根內(nèi)根生囊霉)Rhizophagusirregularis(Glomusirregulare)A.1.8放線(xiàn)菌類(lèi)BrevibacteriumcelereFrankiasp.StreptomycesfradiaeStreptomycesmicroflavusAnabaenaazoticaAuxenochlorellapyreDesertifilumtharenseLeptolyngbyaboryanaMicrocoleusvaginatusTolypothrixtenuisTrichormusvariabilis(Anabaenavariabilis)異形根孢囊霉(異形球囊霉)速生短桿菌弗蘭克氏菌(固氮放線(xiàn)菌)弗氏鏈霉菌細(xì)黃鏈霉菌固氮魚(yú)腥藻蛋白核原始小球藻小球藻(普通小球藻)塔爾沙漠絲藻鮑氏細(xì)鞘絲藻具鞘微鞘藻小單歧藻多變?nèi)x藻(多變魚(yú)腥藻)BacillusaltitudinisBacillusatrophaeusBacillusmycoidesBacilluspumilusBacillusthuringiensBurkholderiarinojensisClostridiumpasteurianumExiguobacteriumprofundumHeyndrickxiasporothermodurans(BacillusHydrogenophagaatypicaHydrogenophagaflavaLysinibacillusfusiformisLysinibacillussphaericus(Bacillussphaericus)LysobacterenzymogenesMesobacillusthioparans(Bacillusthioparans)MethylobacteriumsymbioticumMethylorubrumrhodesianum(MethylobacteriumNialliacirculans(Bacilluscirculans)Peribacillusmuralis(Bacillusmuralis)Priestiaaryabhattai(Bacillusaryabhattai)Priestiaflexa(Bacillusflexus)PseudomonasfluorescensPseudomonasprotegensGB/T41728—2022高地芽孢桿菌深褐芽孢桿菌(萎縮芽孢桿菌)蕈狀芽孢桿菌短小芽孢桿菌沙福芽孢桿菌蘇云金芽孢桿菌泡囊短波單胞菌(泡囊假單胞菌)仁諾吉伯克霍爾德氏菌巴氏梭菌(巴斯德梭菌)深海微小桿菌非典型食氫產(chǎn)水菌(非典型食氫菌)黃色食氫產(chǎn)水菌(黃色食氫菌)糖萊西氏菌(甘蔗蘭希氏菌，甘蔗萊西氏菌)鼠李糖乳酪桿菌(鼠李糖乳桿菌)耐硼賴(lài)氨酸芽孢桿菌紡錘形賴(lài)氨酸芽孢桿菌球形賴(lài)氨酸芽孢桿菌(球形芽孢桿菌)產(chǎn)酶溶桿菌產(chǎn)硫中間芽孢桿菌(產(chǎn)硫芽孢桿菌)共生甲基桿菌扭托甲基紅桿菌(扭托甲基桿菌)羅氏甲基紅桿菌(羅氏甲基桿菌)環(huán)狀尼亞利亞菌(環(huán)狀芽孢桿菌)浸麻類(lèi)芽孢桿菌食丁酸佩里芽孢桿菌(食丁酸芽孢桿菌)壁佩里芽孢桿菌(壁芽孢桿菌)耐鹽發(fā)光桿菌阿氏普里斯蒂亞菌(阿氏芽孢桿菌)彎曲普里斯蒂亞菌(彎曲芽孢桿菌)熒光假單胞菌防御假單胞菌GB/T41728—2022Pseudomonasstutzeri施氏假單胞菌Pseudomonasveronii斡氏假單胞菌Sphingobacteriummultivorum(Flavobacterium多食鞘氨醇桿菌(多食黃桿菌)multivorum)A.2.2放線(xiàn)菌CorynebacteriumglutamicumGlutamicibacterarilaitensis(Arthrobacterarilaitensis)Glutamicibacternicotianae(Glutamicibactermysorens,Arthrobacternicotianae)MicrococcusendophyticusMicromonosporamarinaStreptomycesalbidoflavusStreptomycesalbogrStreptomycesalbonigerStreptomycesalbulusStreptomycesalbusStreptomycesauratusStreptomycesavermitilisStreptomycescaelestisStreptomycesalbovinaceus)StreptomycesStreptomycessalmonis)Streptomycesglobisporus(Streptomycesgriseoincarnatushiroshimensis(StreptomyceslavendulaeStreptomyceslydicusStreptomycesmurinus(Streptomycescostaricanus)StreptomycesmutabilisStreptomycespactumStreptomycespratensis谷氨酸棒桿菌(谷氨酸棒狀桿菌)研究團(tuán)隊(duì)谷氨酸桿菌(研究團(tuán)隊(duì)節(jié)桿菌，阿氏團(tuán)隊(duì)節(jié)桿菌)煙草谷氨酸桿菌(邁索爾節(jié)桿菌，煙草節(jié)桿菌)植物內(nèi)生微球菌海小單孢菌硝基愈創(chuàng)木膠類(lèi)節(jié)桿菌檸檬原小單胞菌微白黃鏈霉菌白淺灰鏈霉菌白黑鏈霉菌小白鏈霉菌白色鏈霉菌金色鏈霉菌阿維菌素鏈霉菌(除蟲(chóng)鏈霉菌)可可鏈霉菌天青鏈霉菌暗灰鏈霉菌纖維素鏈霉菌黃麻鏈霉菌球孢鏈霉菌(白酒紅鏈霉菌)灰肉色鏈霉菌(灰肉紅鏈霉菌)灰略紅鏈霉菌廣島鏈霉菌(鮭色鏈霉菌)淺(淡)紫灰鏈霉菌利迪鏈霉菌鼠灰鏈霉菌(哥斯達(dá)黎加鏈霉菌)易變鏈霉菌密旋鏈霉菌草生鏈霉菌StreptomycestendaeGB/T41728—2022婁徹鏈霉菌(酒紅土褐鏈霉菌)唐德鏈霉菌熱紫鏈霉菌委內(nèi)瑞拉鏈霉菌AspergilluscandidusAspergilluschevalieri(Eurotiumchevalieri)AspergillusjaponicusAspergillusnigerAspergillusoryzaeAspergilluspenicillioidesAspergilluswentiiDipodascusgeotrichum(GeoDominikiairanica(GlomMetacordycepschlamydosporia(VerticilliumMetarhiziumanisopliaePenicilliumbilaiaePenicilliumcitreonigrum(EupenicilliumPenicilliumcorylophilumPenicilliumglabrum(Penicilliumfrequentans)PenicilliumoxalicumPhanerodontiachrysosporium(Phanerochaetechrysosporium)Purpureocilliumlilacinum(PaecilomycesRhizopusarrhizus(Rhizopusoryzae)Rhizopusstolonifer(Rhizopusnigricans)Serendipitaindica(Piriformosporaindica)TalaromycespinophilusTalaromyceswortmanniiThermothelomycesthermophilus(Myceliophthora亮白曲霉謝瓦曲霉(謝瓦散囊菌)黑曲霉帚狀曲霉溫特曲霉球孢白僵菌螺卷毛殼球毛殼伊朗毛殼三側(cè)毛殼伊朗多氏囊霉(伊朗球囊霉)厚孢綠僵蟲(chóng)草菌(厚孢輪枝孢)金龜子綠僵菌拜賴(lài)青霉(比萊青霉)黃暗青霉(平山正青霉)頂青霉草酸青霉黃孢原毛平革菌少根根霉(米根霉)匍枝根霉(黑根霉)印度塞倫迪皮塔霉(印度梨形孢)嗜松籃狀菌沃特曼籃狀菌GB/T41728—2022thermophila,Sporotrichumthermophilum)TrichodermapseudokoningiiA.3第三級(jí)：應(yīng)做致病性試驗(yàn)的菌種denitrificans(AlcaligenesAchromobacterdenitrificans(Alcaligenes棘孢木霉深綠木霉桔(橘)綠木霉加納木霉貴州木霉哈茨木霉康寧木霉長(zhǎng)枝木霉擬康寧木霉里氏木霉綠木霉綠色木霉反硝化無(wú)色小桿菌(反硝化產(chǎn)堿菌)Achromobacterxylosoxidans)xylosoxidans(Alcaligenes木糖氧化無(wú)色小桿菌(木糖氧化產(chǎn)堿菌)AcinetobacterbaumanniiAlcaligenesfaecalisEnterobacterludwigiiEnterococcusfaeciumLactococcuslactis(Streptococcuslactis)Pantoeaagglomerans(Enterobacteragglomerans)Paraburkholderiafungorum(Burkholderiafungorum)鮑氏不動(dòng)桿菌乙酸鈣不動(dòng)桿菌糞產(chǎn)堿菌蠟樣芽孢桿菌缺陷短波單胞菌(缺陷假單胞菌、微小假單胞菌)陰溝腸桿菌路氏腸桿菌屎腸球菌產(chǎn)氣克雷伯氏菌(產(chǎn)氣腸桿菌)乳酸乳球菌(乳酸鏈球菌)成團(tuán)泛菌(成團(tuán)腸桿菌)真菌副伯克霍爾德氏菌(真菌伯克霍爾德氏菌)Pluralibactergergoviae(Enterobactergergoviae)日勾維多桿菌(日勾維腸桿菌)Proteussp.變形菌Pseudomonasalcaligenes產(chǎn)堿假單胞菌Pseudomonasputida惡臭假單胞菌Streptococcussalivarius(Streptococcusthermophilus)唾液鏈球菌(嗜熱鏈球菌)Gordoniaamarae(Nocardiaamarae)Nocardiasp.Nocardiopsissp.StreptomycesgriseusAkanthomyceslecanii(Verticilliumlecanii)AspergillussydowiiAspergillustubingensisClonostachysrosea(Gliocladiumroseum)Issatchenkiaorientalis(Candidakrusei)PythiumoligandrumTalaromycespurpureogenus(Penicilliumpurpureogenum)Agrobacteriumradiobacter(Rhizobiumradiobacter,Agrobacteriumtumefaciens)BacillusanthracisClostridiumbutyricumErwiniasp.KlebsiellaoxytocaKlebsiellapneumoniaePseudomonasmarginalis(Pseudomonassolanacearum)AcremoniumalternatumAlternariasp.AspergillusAspergillusAspergillusAspergillusAspergillusflavusfumigatusnidulansochraceusparasiticus溝戈登氏菌，污泥戈登氏菌(溝諾卡氏菌)諾卡氏菌擬諾卡氏菌灰色鏈霉菌蠟蚧刺束梗孢(蠟蚧輪枝菌)聚多曲霉塔賓曲霉粉紅螺旋聚孢霉(粉紅枝穗霉，粉紅粘帚霉)東方伊薩酵母卷枝毛霉寡雄腐霉產(chǎn)紫籃狀菌(產(chǎn)紫青霉)放射形農(nóng)桿菌(放射桿狀根瘤菌，根癌農(nóng)桿菌)炭疽芽孢桿菌丁酸梭菌歐文氏菌產(chǎn)酸克雷伯氏菌肺炎克雷伯氏菌菠蘿泛菌邊緣假單胞菌丁香假單胞菌交互枝頂孢霉鏈格孢屬煙曲霉構(gòu)巢曲霉赭曲霉寄生曲霉GB/T41728—2022Aspergillusrugulosus細(xì)皺曲霉Aspergillusversicolor雜色曲霉Candidaparapsilosis近平滑假絲酵母熱帶假絲酵母麥角菌Fusariumsp.鐮孢菌(鐮刀菌)Penicilliumaurantiogriseum(Penicilliumcyclopium,Penicilliumviridicatum)產(chǎn)黃青霉桔青霉Penicilliumexpansum擴(kuò)展青霉Penicilliumsimplicissimum簡(jiǎn)青霉Penicilliumsolitum(Penicilliumcrustosum)皮落青霉Talaromycesmarneffei(Penicilliummarneffei)馬爾尼菲藍(lán)狀菌(馬爾尼菲青霉)GB/T41728—2022B.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每次試驗(yàn)至少需要3只皮膚完好的白色健康家兔或豚鼠。B.2操作程序B.2.1涂受試物前，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)的毛去掉，去毛范圍約2.5cm×2.5cm,用75%酒精清注意皮膚破損僅達(dá)表皮，不要傷及真皮。B.2.3分別于去除受試物后1h、24h和48h觀(guān)察皮膚局部反應(yīng)，并按表B.1進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分。注意B.3評(píng)價(jià)要求在各個(gè)觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)，按表B.1對(duì)動(dòng)物的皮膚紅斑與水腫形成情況進(jìn)行評(píng)分，并按時(shí)間點(diǎn)將3只動(dòng)物的評(píng)分相加，除以動(dòng)物數(shù)，獲得不同時(shí)間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分均值(刺激指數(shù))。取其中最高皮膚刺激指數(shù)，按表B.2評(píng)定該受試物對(duì)動(dòng)物皮膚刺激強(qiáng)度的級(jí)別。表B.1皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分要求皮膚刺激反應(yīng)皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分紅斑形成：無(wú)勉強(qiáng)可見(jiàn)明顯紅斑中等至嚴(yán)重紅斑紫紅色紅斑并有焦痂形成01234水腫形成：無(wú)勉強(qiáng)可見(jiàn)皮膚隆起，輪廓清楚水腫隆起不超過(guò)1mm水腫隆起超過(guò)1mm01234GB/T41728—2022皮膚刺激指數(shù)刺激強(qiáng)度級(jí)別0～0.5(不含)0.5～2.0(不含)2.0～6.0(不含)6.0～8.0無(wú)刺激性輕刺激性中等刺激性強(qiáng)刺激性GB/T41728—2022(規(guī)范性)C.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭家兔3只，體重1000g～1500g,試驗(yàn)前檢查家兔雙眼，有異常者不能用于試驗(yàn)。C.2操作程序和21d,肉眼觀(guān)察家兔眼角膜、虹膜和結(jié)膜的損傷與恢復(fù)情況。如果72h內(nèi)未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，或第7天或