肉制品微生物檢驗(yàn)-建筑設(shè)計(jì)規(guī)劃-

微生物檢驗(yàn)方法的控制技術(shù)中國最龐大的資料庫下載吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心羅雁非摘要:為了更好地加強(qiáng)微生物檢驗(yàn)工作中的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證，我實(shí)驗(yàn)室選用兩種不同的方法來控制沙門氏菌的檢測，來保證檢驗(yàn)方法的實(shí)效性、特異性、可靠性和準(zhǔn)確性。對樣品進(jìn)行沙門氏菌的檢測和樣品中添加沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株后的檢測，來確認(rèn)方法的等同性。結(jié)果表明，選定的兩種不同方法對兩種沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的檢測完全一致，說明兩種不同的方法的等效性。并闡述了檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP），來培養(yǎng)良好的實(shí)驗(yàn)室操作（GLP）和良好的測量操作（GMP）。中國最龐大的資料庫下載一、確定實(shí)驗(yàn)方法的目的和意義隨著我國入世步伐的加快，國際和地區(qū)間的交流日益廣泛，如何提高檢驗(yàn)檢疫數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性以及實(shí)驗(yàn)室如何采取有效的質(zhì)量保證措施，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，愈來愈呈現(xiàn)得重要。質(zhì)量控制是保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的手段之一，其定義:為保證實(shí)驗(yàn)室得到的數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確和精確在已知的概率限度內(nèi)所采取的那些措施。保證報(bào)告和數(shù)據(jù)的質(zhì)量，就是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的目的和目標(biāo)。影響報(bào)告和數(shù)據(jù)質(zhì)量的因素有:數(shù)據(jù)本身的質(zhì)量、方法有關(guān)的質(zhì)量、分析體系的質(zhì)量。據(jù)資料報(bào)道，我國對微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了全面的質(zhì)量控制已有20年的歷史，多年來人們強(qiáng)調(diào)質(zhì)量控制和質(zhì)量評價(jià)，人們越來越清楚地認(rèn)識到質(zhì)量控制是真正提高檢驗(yàn)質(zhì)量，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。而檢驗(yàn)是我們工作和調(diào)查的基礎(chǔ)，檢測質(zhì)量控制也成為我們工作中需要重視的問題，甚至是我們檢驗(yàn)工作者必須認(rèn)真討論的問題。中國最龐大的資料庫下載檢測結(jié)果不僅需要依賴實(shí)驗(yàn)室的儀器、標(biāo)準(zhǔn)菌株以及操作人員的技術(shù)水平等諸多因素,要保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確和可靠要有一種標(biāo)準(zhǔn)方法來實(shí)施,這是我們工作的基礎(chǔ),今天要著重討論的這個(gè)問題。標(biāo)準(zhǔn)方法是權(quán)威機(jī)構(gòu)對某項(xiàng)測試所作的同意規(guī)定的技術(shù)準(zhǔn)則和各個(gè)方面共同遵守的技術(shù)依據(jù)。也是應(yīng)以滿足用戶提出質(zhì)量要求為最終目的并為保證結(jié)果的重復(fù)性、再現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。微生物的種類很多,不同類的微生物的生理特性不同,用于檢測和驗(yàn)證的微生物試驗(yàn)是具有挑戰(zhàn)性和廣泛性的,至少要包括G+菌、G+菌、酵母菌和霉菌類的微生物。這幾類微生物基本包含了樣品中可能存在的各類微生物,另一方面,他們也基本包含了樣品中可能存在防腐劑抑菌效果檢查試驗(yàn)中所要使用的實(shí)驗(yàn)菌株。中國最龐大的資料庫下載在選擇試驗(yàn)方法，必須根據(jù)以下幾個(gè)特點(diǎn)來選擇:準(zhǔn)確性要好；精確，很少離散；特異性好，對樣品中其他成分沒有依賴或干擾；實(shí)用性好，使用的范圍廣和適應(yīng)性寬；可靠性、耐受性、再現(xiàn)性好；靈敏性好；檢查所受的限制少。中國最龐大的資料庫下載二、實(shí)驗(yàn)方法的驗(yàn)證方法選定以后，就是要用現(xiàn)行的方法來驗(yàn)證方法的可行性，必須通過外界組織和實(shí)驗(yàn)室自身來驗(yàn)證，其目的是為了獲得、改進(jìn)、發(fā)展、測試試驗(yàn)方法的統(tǒng)一，正確地進(jìn)行食品分析。其可達(dá)到的目的:方法由資深化驗(yàn)員使用，可達(dá)到預(yù)想的精度和準(zhǔn)度。精度是來衡量波動(dòng)的，精度是實(shí)際樣品分析的準(zhǔn)確程度的。2. 方法的實(shí)用性，簡單、快速、可靠。3. 可用性。4.中國最龐大的資料庫下載微生物的制備和培養(yǎng)決定著細(xì)胞的生理狀況，而這些生理狀況接影響到微生物的測試結(jié)果，只有群體細(xì)胞均勻，試驗(yàn)結(jié)果才能穩(wěn)定。此外，還有需要實(shí)際考慮的方面:快速性、經(jīng)濟(jì)性、簡便程序和客戶要求等等。還有出口商品微生物鑒定時(shí)，基于這一點(diǎn)，微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該對出口國的同種類型食品采用不同種方法，必須考慮食品被出口國所使用的具體分析方法。列如:根據(jù)國家質(zhì)檢總局質(zhì)檢食函[2004]273號文件的要求，我國對禽肉中沙門氏菌的檢測方法要與美國USDA或FDA現(xiàn)行方法等效，我局微生物實(shí)驗(yàn)室盡快采用ISO6579:2002-07-15方法進(jìn)行了對方法的驗(yàn)證。中國最龐大的資料庫下載SN方法:以無菌方式進(jìn)行多點(diǎn)取樣25g+225ml緩沖蛋白胨水，經(jīng)37℃水浴4h培養(yǎng)，進(jìn)行非選擇性增菌；確保瀕于死亡的細(xì)菌進(jìn)行復(fù)活。其后移取10ml轉(zhuǎn)種于盛有100ml四硫磺酸鹽煌綠增菌液，經(jīng)42±1℃培養(yǎng)20±2h，進(jìn)行選擇性的增菌；使目的菌優(yōu)勝出來。將增菌液搖勻，以無菌操作，分別接種DHL和BS平板上于37℃培養(yǎng)24±2h，進(jìn)行分離培養(yǎng)；使目的菌分離出來。觀察每個(gè)平板上的菌落，選取3-5個(gè)菌落接種于TSI或尿素酶瓊脂上，于37℃中培養(yǎng)24±2h，進(jìn)行篩選試驗(yàn)；將符合沙門氏菌特征的TSI中的培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃中培養(yǎng)24±2h，進(jìn)行純化培養(yǎng)；選取單個(gè)菌落，接種于20E微量生化管中，進(jìn)行API生化鑒定；同時(shí)取單個(gè)菌落，在潔凈的玻板上，作血清學(xué)鑒定。中國最龐大的資料庫下載ISO方法:以無菌方式進(jìn)行多點(diǎn)取樣（有代表性的并完好無損）25g+225ml緩沖蛋白胨水，經(jīng)37℃孵育18±2h，進(jìn)行非選擇性增菌；其后移取0.1ml培養(yǎng)液接種到含有10mlRSV的試管中，經(jīng)41.5±1℃培養(yǎng)24±3h，另取1ml接種到含有10mlMKTTn的試管中，經(jīng)37±1℃培養(yǎng)20±3h，進(jìn)行選擇性的增菌。將兩種增菌液搖勻，以無菌操作，分別接種兩種選擇性平板，XLD和DHL或BS平板，于37℃培養(yǎng)24±3h，進(jìn)行分離培養(yǎng)；觀察每個(gè)平板上的菌落，選取2-5個(gè)菌落接種于TSI或尿素瓊脂上，于37℃中培養(yǎng)24±2h，進(jìn)行篩選試驗(yàn)；將符合沙門氏菌特征的TSI中的培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃中培養(yǎng)24±2h，進(jìn)行純化培養(yǎng)；選取單個(gè)菌落，接種于20E微量生化管中，進(jìn)行API生化鑒定；同時(shí)取單個(gè)菌落，在潔凈的玻板上，作血清學(xué)鑒定。中國最龐大的資料庫下載我們采用的樣品是由吉林德大有限公司提供的出口的熟禽肉制品,經(jīng)過加工處理后,再經(jīng)過檢測,并用上述兩種方法進(jìn)行確認(rèn)無沙門氏菌存在,在其中添加兩種標(biāo)準(zhǔn)沙門氏菌菌株50013和50041再用上述兩種方法進(jìn)行檢測和確認(rèn),其檢測結(jié)果見表1,中國最龐大的資料庫下載表1下載樣品號采用方法檢測樣品的數(shù)量陽性樣品的數(shù)量陽性樣品的百分比（%）采用的標(biāo)準(zhǔn)菌株號備注1-25SN250026-50ISO25001-25SN250026-50ISO25001-25SN250050041添加的標(biāo)準(zhǔn)菌株26-50ISO252510050041添加的標(biāo)準(zhǔn)菌株1-25SN250050071添加的標(biāo)準(zhǔn)菌株26-50ISO2525中國最100龐大的資料庫50071添加的標(biāo)準(zhǔn)菌株結(jié)果分析，從表中可以看出，用SN0172-1992和ISO6579:2002-07-15兩種方法對沙門氏菌的檢測的結(jié)果完全一致，在無沙門氏菌的情況下，檢測結(jié)果是一致的，在不同樣品添加標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測的結(jié)果仍然是相同的。得出結(jié)論是SN0172-1992和ISO6579:2002-07-15兩種方法對沙門氏菌的檢測是等效的。中國最龐大的資料庫下載我們實(shí)驗(yàn)室的SOP:沙門氏菌是腸桿菌科中的一個(gè)重要的菌屬，是最常見的食源性細(xì)菌病原體。近幾年來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)近2000個(gè)血清型。年幼兒童、虛弱者、年長老人、免疫缺陷者等視為易感人群。沙門氏菌的污染源主要是人和家畜的糞便，沙門氏菌常存在于動(dòng)物中，特別是禽類和豬，從水、土壤、昆蟲中；從工廠生產(chǎn)車間的表面和動(dòng)物糞便中已發(fā)現(xiàn)該類細(xì)菌。生肉，禽肉及其制品，奶制品和蛋，魚，蝦和田雞腿，酵母，椰子、醬油和沙拉調(diào)料，蛋糕粉，奶油夾心甜點(diǎn)，頂端配料，干明膠，花生露，橙汁，可可和巧克力以及供動(dòng)物的飼料等均可被沙門氏菌污染。中國最龐大的資料庫下載我國現(xiàn)行檢測沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)主要為:“SN0172-1992出口食品中沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗(yàn)方法”和“GB/T4789.4-2003沙門氏菌檢測”，但以上方法與美國農(nóng)業(yè)部的檢測方法（USDAFSISMLG4.02inMicrobiologyLaboratoryGuidebook,3rd1998）在樣品制備、目標(biāo)菌的分離鑒定等方面存在很大的區(qū)別，為完善實(shí)驗(yàn)室的檢測方法體系，為使操作人員完全按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行操作，滿足客戶的特殊檢測要求，特參考采用美國農(nóng)業(yè)部的檢測方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)操作程序。在保證操作人員的健康的前提下，本標(biāo)準(zhǔn)操作程序詳細(xì)描述了檢測各類肉類、肉制品、蛋、蛋制品及環(huán)境中漂洗液樣品中沙門氏菌的方法。本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的最低檢測限是25g樣品中含有至少一個(gè)菌。使用本標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢出的菌株菌需用生化試驗(yàn)和血清學(xué)方法進(jìn)行確認(rèn)。中國最龐大的資料庫下載吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心生物檢測實(shí)驗(yàn)室的所有承擔(dān)食源致病微生物檢測的人員必須按照本標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行各類肉類、肉制品、蛋、蛋制品及環(huán)境中漂洗液樣品中沙門氏菌的檢測工作。沙門氏菌為腸道傳染病的病原體。實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守SPSCMOT008中關(guān)于二級生物安全防護(hù)的要求。為保證操作人員的身體健康,作好防范工作,易被其感染的年幼兒童、虛弱者、年長老人、免疫缺陷者必須遠(yuǎn)離進(jìn)行沙門氏菌分離、鑒定和確認(rèn)的實(shí)驗(yàn)室。生物安全柜II級的高效過濾網(wǎng)被用來防止致病菌引起的氣溶膠。中國最龐大的資料庫下載口罩、手套和眼罩的保護(hù)是必須的并且所有的工作區(qū)的表面在工作前后必須馬上消毒或進(jìn)行一次性的無害化處理。所有的代謝物,要經(jīng)過高壓滅菌無害化處理,來保證人員和環(huán)境的不污染。檢測所用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑以及微生物的生產(chǎn)商必須提高提供相關(guān)的有效的安全數(shù)據(jù)。在所有檢測過程中至少包含三種控制方法,即包括H2S陰性沙門氏菌、H2S陽性沙門氏菌和培養(yǎng)基空白對照。質(zhì)控菌株需要接種到肉或正在分析的肉中。在相同的條件下同樣的程序同時(shí)分析質(zhì)控樣品于樣品待驗(yàn)樣品。確保從每個(gè)陽性控制樣品中能檢出至少一個(gè)菌落。中國最龐大的資料庫下載在生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)需要使用適當(dāng)?shù)膶φ諄碜C實(shí)結(jié)果的正確性。在本標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嵤┻^程中的陽性質(zhì)控菌株為兩株沙門氏菌（ATCC50013和ATCC50041）和一株亞利桑那菌株（ATCC47001）,陰性質(zhì)控菌株為一株枸櫞酸鹽桿菌（ATCC48001）、大腸艾希氏菌（ATCC63301）。一旦估計(jì)待檢樣品為沙門氏菌陰性,合并樣品可以節(jié)省時(shí)間、人力和物力。有好幾種合并樣品的方法。如果估計(jì)檢出沙門氏菌的可能性很高,或如果已檢出陽性菌株,但沒有必要知道其被污染的具體樣品時(shí),在非選擇性前增菌時(shí)合并樣品是合適的。中國最龐大的資料庫下載在選擇性平板中各選取2-3個(gè)可疑菌落,（避免接觸到瓊脂,因?yàn)檫@些強(qiáng)選擇性瓊脂培養(yǎng)基會抑制許多微生物的生長,如果在平板上有典型的菌落,但沒有很好的分離純化,應(yīng)選擇典型的菌落直接重新在選擇性平板上接種劃線?；蛘哂媒臃N環(huán)挑取生長物接種到試管裝的TTB,然后重新在選擇性平板上劃線。）接種于TSI、賴氨酸脫羧酶瓊脂、或尿素酶瓊脂上,于37℃中培養(yǎng)24±2h,記錄高層和斜面的顏色、培養(yǎng)基變黑、有氣泡或培養(yǎng)基開裂顯示產(chǎn)氣以及斜面劃線處的菌落生長。檢查直立培養(yǎng)的TSI和U瓊脂。丟棄或重新劃線分離任何最初培養(yǎng)時(shí)生長過于密集的試管。丟棄所有在U瓊脂斜面上顯紅色的試管。分離顯示典型沙門氏菌翻譯感的菌株,檢疫分離沙門氏菌反應(yīng)不典型的菌株,需要結(jié)合生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。動(dòng)力試驗(yàn)是非強(qiáng)制性的。中國最龐大的資料庫下載將可疑