《水中微生物含量的測(cè)定三磷酸腺苷（ATP）生物發(fā)光法》

水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)中的“微生物”是指具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微生物，如細(xì)菌、真菌、藻類(lèi)和原生動(dòng)物等。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的生物發(fā)光法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于以水為基質(zhì)的樣品，包括地表水、水源水、工藝過(guò)程水、生活飲用水、直

飲水和瓶裝水等。

當(dāng)制備試樣的樣品體積為50mL時(shí)，方法檢出限為0.17pg/mL，測(cè)定下限為0.68pg/mL。

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于溶解性總固體＞10000mg/L的水樣，也不適用于含高濃度有機(jī)物、重

金屬等干擾物質(zhì)的水樣。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用

于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T5750.2—2023生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法第2部分：水樣的采集與保存

HJ1000—2018水質(zhì)細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定平皿計(jì)數(shù)法

ASTMD4012—23aStandardTestMethodforAdenosineTriphosphate(ATP)Contentof

MicroorganismsinWater（美國(guó)材料與試驗(yàn)協(xié)會(huì)ASTMD4012—23a水中微生物的三磷酸

腺苷（ATP）含量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法）

3術(shù)語(yǔ)和定義

以下術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1三磷酸腺苷adenosinetriphosphate(ATP)

由腺嘌呤、核糖和磷酸基團(tuán)連接而成，是生物細(xì)胞內(nèi)主要的能量來(lái)源，又稱(chēng)腺嘌呤核苷

三磷酸、腺苷三磷酸。

3.2熒光素luciferin

生物體內(nèi)的發(fā)光生物色素。

3.3熒光素酶Luciferase

能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng)。

3.4裂解lysis

溶解和破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)致胞內(nèi)物質(zhì)釋放的過(guò)程。

3.5相對(duì)光單位relativelightunit(RLU)

描述發(fā)光強(qiáng)度或亮度的相對(duì)值。

注：RLU非SI單位。

3.6光度計(jì)luminometer

1

測(cè)量光物質(zhì)所發(fā)出光信號(hào)的儀器。

4方法原理

ATP是高等植物細(xì)胞、高等動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞的主要組成部分，通過(guò)測(cè)定活性細(xì)胞

內(nèi)的ATP濃度，可以快速反映水中活性微生物的含量。測(cè)定過(guò)程中，ATP和熒光素、熒光

素酶等快速反應(yīng)產(chǎn)生光，經(jīng)由ATP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)的光度計(jì)測(cè)定RLU，根據(jù)公式計(jì)算最終得

到ATP濃度。

5試劑和材料

除非另有說(shuō)明，使用的分析純?cè)噭┗蛏镌噭?yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾

水、超純水或去離子水。

5.1裂解液：用量為1mL，用于破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)后釋放ATP。

5.2提取液：使用1mL裂解液（5.1）提取ATP后的混合液。

5.3稀釋液：用量為9mL，用于稀釋和定容提取液（5.2）。

5.4ATP保存液：1mL提取液（5.2）和9mL稀釋液（5.3）的混合物。

5.5熒光素-熒光素酶干粉：含有熒光素和熒光素酶的粉劑。

5.6緩沖液：用于溶解和稀釋熒光素-熒光素酶干粉（5.5）的試劑。

5.7熒光素-熒光素酶試劑：將熒光素-熒光素酶干粉（5.5）溶解于緩沖液（5.6）后配制成

的試劑。

5.8單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液：濃度為1000pg/mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。

5.9校準(zhǔn)曲線標(biāo)液：濃度為10pg/mL、100pg/mL、1000pg/mL、10000pg/mL和100000pg/mL

的ATP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。

5.10無(wú)菌水：經(jīng)121℃高壓蒸汽持續(xù)滅菌20min的實(shí)驗(yàn)用水，冷卻備用。

6儀器和設(shè)備

不應(yīng)將一次性耗材經(jīng)高壓滅菌后重復(fù)使用，不應(yīng)使用含有熒光物質(zhì)的記號(hào)筆。

6.1光度計(jì)：使用光電倍增管，波長(zhǎng)范圍至少覆蓋530±20nm，測(cè)量結(jié)果為RLU。

6.2微量移液器：固定式100μL和1000μL，可調(diào)式100～1000μL。

6.3高壓蒸汽滅菌器：121℃可調(diào)，用于實(shí)驗(yàn)用水等的滅菌。

6.4干熱滅菌器：160℃～180℃可調(diào)，用于玻璃采樣容器和無(wú)菌瓶等的滅菌。

6.5采樣容器：帶螺旋蓋的無(wú)菌瓶或無(wú)菌袋，容積＞100mL，玻璃、PP和HDPE等材質(zhì)。

6.6注射器：容積刻度≥50mL，具活塞，無(wú)針頭，魯爾接口，PP材質(zhì)，無(wú)菌獨(dú)立包裝，

一次性使用。

6.7測(cè)光管：尺寸和光度計(jì)（6.1）適配，PP材質(zhì)，無(wú)菌包裝，一次性使用。

6.8測(cè)光管架：尺寸和測(cè)光管（6.7）適配。

6.9微量移液器吸頭：200μL和1000μL，與微量移液器（6.2）適配，PP材質(zhì)，必須為無(wú)

菌原盒包裝，一次性使用。

6.10針頭過(guò)濾器：濾盤(pán)直徑≤35mm，孔徑0.45μm，魯爾接口與注射器（6.6）適配，水

系混合纖維素酯（MCE）、玻璃纖維等材質(zhì)，無(wú)菌包裝，一次性使用。

6.11實(shí)驗(yàn)室常用儀器、設(shè)備和器材。

2

7個(gè)人防護(hù)用品

7.1醫(yī)用外科口罩：無(wú)紡布材質(zhì)，無(wú)菌包裝，一次性使用。

7.2手套：乳膠、丁腈和PE等材質(zhì)，一次性使用。

7.3醫(yī)用防塵帽：無(wú)紡布材質(zhì)，無(wú)菌包裝，一次性使用。

7.4消毒用品：70%～75%酒精棉或酒精消毒濕巾。

8實(shí)驗(yàn)環(huán)境

操作人員應(yīng)佩戴個(gè)人防護(hù)用品（7.1～7.3），對(duì)實(shí)驗(yàn)桌面和儀器進(jìn)行表面消毒（7.4），

減少環(huán)境對(duì)實(shí)驗(yàn)全過(guò)程的污染。無(wú)菌室不是必須的。

9樣品

9.1樣品的采集

樣品的采集應(yīng)符合GB/T5750.2和HJ1000的規(guī)定。

采樣前應(yīng)對(duì)采樣龍頭進(jìn)行消毒，采樣過(guò)程應(yīng)避免污染樣品、試劑和無(wú)菌耗材，采樣容器

（6.5）不得用樣品洗滌。樣品量一般為采樣容器的80%左右，不得裝滿(mǎn)。采樣容器上標(biāo)注

樣品信息。

9.2樣品的運(yùn)輸與保存

樣品應(yīng)盡快完成試樣制備，否則，應(yīng)在4℃～10℃冷藏保存但不超過(guò)3h。

9.3試樣的制備

試樣的制備可在樣品采集現(xiàn)場(chǎng)完成，其余分析步驟宜在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。

9.3.1過(guò)濾

預(yù)先將樣品和無(wú)菌水穩(wěn)定至同一室溫。

若樣品清潔，可使用同一套過(guò)濾器材重復(fù)過(guò)濾步驟以增加過(guò)濾體積，過(guò)濾體積宜為50

mL的整數(shù)倍，記錄過(guò)濾體積；若樣品渾濁，可適當(dāng)減少過(guò)濾體積至注射器最小刻度的整數(shù)

倍，或用無(wú)菌水稀釋樣品后再過(guò)濾，記錄過(guò)濾體積和稀釋倍數(shù)；若已倒入注射器內(nèi)的樣品無(wú)

法濾完，記錄已過(guò)濾體積，棄去注射器內(nèi)剩余的樣品。過(guò)濾步驟如下：

1）擰緊采樣容器（6.5）蓋，將樣品用力振搖至少20次，充分混勻后擰松但不取下采

樣容器蓋。

2）撕開(kāi)注射器（6.6）外包裝，取出注射器，拔出活塞，將活塞放回注射器外包裝內(nèi)。

3）取出針頭過(guò)濾器（6.10），與注射器的魯爾接口對(duì)接旋緊。

4）打開(kāi)采樣容器蓋，將樣品緩慢地倒入豎立的注射器內(nèi)至50mL刻度。

5）將活塞插入注射器，緩慢地推動(dòng)活塞直至樣品全部濾完，棄去濾液。

6）將裝有活塞和針頭過(guò)濾器的注射器放回注射器外包裝內(nèi)。

9.3.2提取和保存

預(yù)先將試劑穩(wěn)定至同一室溫。提取和保存步驟如下：

1）擰緊裂解液（5.1）瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后擰松但不取下

瓶蓋。

2）擰緊稀釋液（5.3）瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后擰松但不取下

3

瓶蓋。

3）確認(rèn)微量移液器（6.2）調(diào)至1000μL。

4）取出過(guò)濾（9.3.1）時(shí)放回注射器外包裝內(nèi)的裝有活塞和針頭過(guò)濾器的注射器，必須

先取下針頭過(guò)濾器，再拔出活塞，將活塞放回注射器外包裝內(nèi)，而后將針頭過(guò)濾器重新與注

射器的魯爾接口對(duì)接旋緊；手握注射器，使針頭過(guò)濾器朝下。

5）打開(kāi)稀釋液瓶蓋，將朝下的針頭過(guò)濾器插入稀釋液瓶口，針頭過(guò)濾器不應(yīng)接觸稀釋

液。

6）打開(kāi)裂解液瓶蓋，在微量移液器上裝上吸頭，準(zhǔn)確移取1000μL裂解液至注射器內(nèi)，

移液時(shí)應(yīng)避免液體掛壁。

7）再次取出注射器外包裝內(nèi)的活塞，緩慢地推動(dòng)活塞至注射器底部，將1mL提取液

全部過(guò)濾轉(zhuǎn)移至稀釋液瓶?jī)?nèi)，蓋上并擰緊瓶蓋，混均后即為ATP保存液（5.4）。

8）標(biāo)注試樣信息，完成試樣的制備。

9.4空白試樣的制備

以無(wú)菌水（5.10）替代樣品，重復(fù)步驟9.3。

10分析步驟

預(yù)先將儀器、樣品和試劑穩(wěn)定至同一室溫。為避免頻繁進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)，宜將試樣集中分

析。

10.1光度計(jì)的使用

連接光度計(jì)（6.1）電源和數(shù)據(jù)線，開(kāi)啟設(shè)備，按光度計(jì)說(shuō)明書(shū)要求確認(rèn)技術(shù)參數(shù)是否

正常，穩(wěn)定運(yùn)行10min后方可進(jìn)行后續(xù)測(cè)定。

10.2熒光素-熒光素酶試劑的配制

熒光素-熒光素酶試劑（5.7）一般現(xiàn)配現(xiàn)用，若有剩余，應(yīng)4℃～10℃冷藏保存。熒光

素-熒光素酶試劑的配制步驟如下：

1）確認(rèn)微量移液器調(diào)至1000μL。

2）擰緊緩沖液（5.6）瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后擰松瓶蓋。

3）打開(kāi)熒光素-熒光素酶干粉（5.5）瓶蓋，在1000μL微量移液器上裝上吸頭，將緩沖

液全部轉(zhuǎn)移至熒光素-熒光素酶干粉瓶中。

4）擰緊瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，至少靜置5min。

5）標(biāo)注試劑信息，完成熒光素-熒光素酶試劑的配制。

10.3單點(diǎn)校準(zhǔn)

測(cè)定當(dāng)日，在開(kāi)展試樣測(cè)定前，必須進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)；若新配制熒光素-熒光素酶試劑，

必須進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)。單點(diǎn)校準(zhǔn)步驟如下：

1）確認(rèn)微量移液器調(diào)至100μL。

2）將測(cè)光管（6.7）插入光度計(jì)孔槽內(nèi)，蓋上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀取測(cè)光管本底

RLU0，若RLU0＞10，應(yīng)更換測(cè)光管或采取措施降低RLU0。

3）從孔槽內(nèi)取出測(cè)光管，插入測(cè)光管架（6.8）內(nèi)。

4）擰緊單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液（5.8）瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后打開(kāi)瓶

蓋，在100μL微量移液器上裝上吸頭，準(zhǔn)確移取100μL單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液至測(cè)光管底部，蓋上

4

瓶蓋，棄去微量移液器吸頭。

5）擰緊熒光素-熒光素酶試劑瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后打開(kāi)瓶

蓋。

6）更換微量移液器吸頭，準(zhǔn)確移取100μL熒光素-熒光素酶試劑至已加過(guò)單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)

液的測(cè)光管中，輕柔地振搖測(cè)光管5次，插入光度計(jì)孔槽內(nèi)，蓋上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀

取并記錄單點(diǎn)校準(zhǔn)結(jié)果RLUC1；立即將此測(cè)光管取出，再次輕柔地振搖5次，插入光度計(jì)孔

槽內(nèi)，蓋上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀取并記錄單點(diǎn)校準(zhǔn)結(jié)果RLUC2；此步驟的2次重復(fù)測(cè)定

應(yīng)在1min內(nèi)完成。

7）蓋上熒光素-熒光素酶試劑瓶蓋，棄去微量移液器吸頭，棄去測(cè)光管，蓋上遮光蓋。

8）RLUC1和RLUC2均必須≥5000，且RLUC1和RLUC2的相對(duì)偏差RVC應(yīng)≤5%，否則，

應(yīng)查找原因并重新進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)，RVC按照公式（1）計(jì)算。

（）

????1?????2

???=×100%1

式中：????1+????2

RVC單點(diǎn)校準(zhǔn)重復(fù)測(cè)定2個(gè)結(jié)果的相對(duì)偏差，%；

RLUC1單點(diǎn)校準(zhǔn)重復(fù)測(cè)定的第1次測(cè)定結(jié)果；

RLUC2單點(diǎn)校準(zhǔn)重復(fù)測(cè)定的第2次測(cè)定結(jié)果。

10.4試樣測(cè)定

試樣測(cè)定步驟如下：

1）確認(rèn)微量移液器調(diào)至100μL。

2）將測(cè)光管插入光度計(jì)孔槽內(nèi)，蓋上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀取測(cè)光管本底R(shí)LU0，

若RLU0＞10，應(yīng)更換測(cè)光管或采取措施降低RLU0。

3）取出測(cè)光管，插入測(cè)光管架內(nèi)。

4）擰緊試樣ATP保存液（5.4）瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后打開(kāi)

瓶蓋，在100μL微量移液器上裝上吸頭，準(zhǔn)確移取100μL試樣至測(cè)光管底部，蓋上瓶蓋，

棄去微量移液器吸頭。

5）擰緊熒光素-熒光素酶試劑瓶蓋，輕柔地上下顛倒混合至少5次，充分混勻后打開(kāi)瓶

蓋。

6）更換微量移液器吸頭，準(zhǔn)確移取100μL熒光素-熒光素酶試劑至已加過(guò)試樣的測(cè)光

管中，輕柔地振搖測(cè)光管5次，插入光度計(jì)孔槽內(nèi)，蓋上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀取并記錄

試樣測(cè)定結(jié)果RLUS1；立即將此測(cè)光管取出，再次輕柔地振搖5次，插入光度計(jì)孔槽內(nèi)，蓋

上遮光蓋，按下測(cè)量鍵，讀取并記錄試樣測(cè)定結(jié)果RLUS2；此步驟的2次重復(fù)測(cè)定應(yīng)在1min

內(nèi)完成。

7）蓋上熒光素-熒光素酶試劑瓶蓋，棄去微量移液器吸頭，棄去測(cè)光管，蓋上遮光蓋。

8）當(dāng)RLUS1和RLUS2均≤100時(shí)，重復(fù)測(cè)定極差RS應(yīng)＜20，RS按照公式（2）計(jì)算；

當(dāng)RLUS1和RLUS2中至少有一個(gè)值＞100時(shí)，RLUS1和RLUS2的相對(duì)偏差RVS應(yīng)≤10%；否

則，應(yīng)查找原因并重新進(jìn)行試樣測(cè)定，RVS按照公式（3）計(jì)算。

（）

??=????1?????22

（）

????1?????2

???=×100%3

????1+????2

5

式中：

RS試樣重復(fù)測(cè)定2個(gè)結(jié)果之差的絕對(duì)值；

RVS試樣重復(fù)測(cè)定2個(gè)結(jié)果的相對(duì)偏差，%；

RLUS1試樣重復(fù)測(cè)定的第1次測(cè)定結(jié)果；

RLUS2試樣重復(fù)測(cè)定的第2次測(cè)定結(jié)果。

10.5空白試樣測(cè)定

以無(wú)菌水替代試樣，重復(fù)步驟10.4。

11結(jié)果計(jì)算與表示

11.1結(jié)果計(jì)算

樣品中ATP的質(zhì)量濃度ρ（pg/mL），按照公式（4）計(jì)算：

（）

????1+????21000×10×?

?=×4

式中：????1+????2?

ρ樣品中微生物ATP的濃度，反映活性微生物的含量，pg/mL；

RLUS1試樣重復(fù)測(cè)定的第1次測(cè)定結(jié)果；

RLUS2試樣重復(fù)測(cè)定的第2次測(cè)定結(jié)果；

RLUC1單點(diǎn)校準(zhǔn)重復(fù)測(cè)定的第1次測(cè)定結(jié)果；

RLUC2單點(diǎn)校準(zhǔn)重復(fù)測(cè)定的第2次測(cè)定結(jié)果；

1000單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液的濃度，pg/mL；

10ATP保存液體積，mL；

f樣品稀釋倍數(shù)；

V樣品過(guò)濾體積，mL。

11.2結(jié)果表示

測(cè)定結(jié)果的表示方式見(jiàn)表1；若將測(cè)定結(jié)果轉(zhuǎn)換成以10為底的對(duì)數(shù)表示時(shí)，應(yīng)保留2

位小數(shù)。

ATP測(cè)定原始記錄格式見(jiàn)附錄A。

表1ATP測(cè)定結(jié)果表示

測(cè)定結(jié)果濃度區(qū)間（pg/mL）保留小數(shù)位數(shù)舉例（pg/mL）

ATP＜12～3＜0.17、0.25、0.182、0.630、0.99

1≤ATP＜1021.00、2.43、9.99

10≤ATP＜100110.0、17.5、99.9

ATP≥1000100、365、999、2408

12精密度和準(zhǔn)確度

5個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)不同類(lèi)型的試樣重復(fù)測(cè)定5次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.60%～17.5%，其

中，不同ATP濃度區(qū)間的精密度見(jiàn)表2。在不同類(lèi)型的試樣中加入50μL單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液，回

收率范圍為105.7%～125.8%。對(duì)校準(zhǔn)曲線標(biāo)液進(jìn)行測(cè)定，相對(duì)誤差范圍為94.3%～110.4%。

6

表2不同ATP濃度區(qū)間的精密度

ATP濃度區(qū)間（pg/mL）樣品濃度范圍（pg/mL）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）

ATP＜10.102～0.6474.0～16.8

1≤ATP＜102.67～7.972.3～14.9

10≤ATP＜10016.7～73.82.2～15.3

ATP≥100108～14140.60～17.5

13質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

13.1空白實(shí)驗(yàn)

每批（或20個(gè)）樣品應(yīng)對(duì)1個(gè)空白試樣（9.4）進(jìn)行全程序空白實(shí)驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果應(yīng)＜方

法檢出限。

13.2單點(diǎn)校準(zhǔn)

完成當(dāng)日所有試樣測(cè)定后，宜進(jìn)行一次單點(diǎn)校準(zhǔn)，評(píng)估當(dāng)日測(cè)定數(shù)據(jù)的有效性。

13.3準(zhǔn)確度

13.3.1校準(zhǔn)曲線

定期使用校準(zhǔn)曲線標(biāo)液（5.9）繪制校準(zhǔn)曲線以評(píng)估光度計(jì)性能，濃度系列為0pg/mL、

10pg/mL、100pg/mL、1000pg/mL、10000pg/mL和100000pg/mL，校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r

應(yīng)≥0.99。校準(zhǔn)曲線回歸方程不應(yīng)作為計(jì)算樣品ATP濃度的依據(jù)。

13.3.2加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

定期開(kāi)展試樣加標(biāo)回收率測(cè)定，試樣加標(biāo)回收率應(yīng)在90%～130%之間。

14廢物處理

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢物應(yīng)分類(lèi)收集，集中保管，并做好相應(yīng)標(biāo)識(shí)，委托有資質(zhì)的單位處

理。

15說(shuō)明事項(xiàng)

參考本標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定微生物培養(yǎng)液的ATP濃度時(shí)，宜用無(wú)菌水稀釋后再過(guò)濾。

參考本標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定游離于細(xì)胞外的ATP濃度時(shí)，應(yīng)將樣品濾液（9.3.5）作為試樣，按照

步驟10.4進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算ATP濃度時(shí)應(yīng)刪除公式（4）中的10和V。

7

附錄A

（資料性附錄）

ATP測(cè)定原始記錄格式

表A.1ATP測(cè)定原始記錄

項(xiàng)目名稱(chēng)：測(cè)定日期：年月日

測(cè)定方法校準(zhǔn)曲線標(biāo)液

測(cè)定方法標(biāo)液濃度

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)(pg/mL)

光度計(jì)

RLU

品牌、型號(hào)

ATP濃度

光度計(jì)編號(hào)

(pg/mL)

裂解液校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)

品牌、批號(hào)回歸方程r

稀釋液?jiǎn)吸c(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)液第1次第2次相對(duì)偏差

品牌、批號(hào)品牌、批號(hào)、濃度RLUC1RLUC2RVC

緩沖液熒光素-熒光素酶干粉

品牌、批號(hào)品牌批號(hào)

相對(duì)偏差

過(guò)濾體積稀釋倍數(shù)測(cè)光管第1次第2次RVSATP濃度

樣品編號(hào)備注

V(mL)fRLU0RLUS1RLUS2或極差(pg/mL)

RS

空白試樣

備注

實(shí)驗(yàn)人員：審核人員：

8

《水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法

（征求意見(jiàn)稿）》編制說(shuō)明

《水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法》

標(biāo)準(zhǔn)編制組

二〇二四年一月

項(xiàng)目名稱(chēng)：水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法

項(xiàng)目承擔(dān)單位：上海浦東水務(wù)（集團(tuán)）有限公司、東方國(guó)際集團(tuán)上海環(huán)境科技有限

公司、上海南匯自來(lái)水有限公司

編制組主要成員：蔣增輝、李梅、張華軍、馬順君、唐玉霖、雷斌

編制單位：上海浦東水務(wù)（集團(tuán)）有限公司、東方國(guó)際集團(tuán)上海環(huán)境科技有限

公司、上海南匯自來(lái)水有限公司、哈希水質(zhì)分析儀器（上海）有限

公司、同濟(jì)大學(xué)、天津泰達(dá)水業(yè)有限公司、上海青浦自來(lái)水有限公

司、上海市松江自來(lái)水有限公司、上海市自來(lái)水奉賢有限公司、沈

陽(yáng)水務(wù)水質(zhì)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展有限公司、衡陽(yáng)市清源水質(zhì)檢測(cè)有限公

司、廈門(mén)理工學(xué)院、廈門(mén)市水資源利用與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、昆山市

自來(lái)水集團(tuán)有限公司

Ⅰ

目錄

1項(xiàng)目背景......................................................................................................................1

1.1任務(wù)來(lái)源...................................................................................................................1

1.2工作過(guò)程...................................................................................................................1

2標(biāo)準(zhǔn)制訂的必要性分析..............................................................................................2

2.1三磷酸腺苷（ATP）................................................................................................2

2.2飲用水微生物指標(biāo)現(xiàn)狀...........................................................................................2

2.3ATP測(cè)定的優(yōu)勢(shì).......................................................................................................3

3國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法研究..........................................................................................3

3.1國(guó)外相關(guān)分析方法和應(yīng)用.......................................................................................3

3.2國(guó)內(nèi)相關(guān)分析方法和應(yīng)用.......................................................................................4

3.3國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法研究結(jié)論...............................................................................7

4標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則和技術(shù)路線..............................................................................7

4.1標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則...............................................................................................7

4.2標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)路線...................................................................................................8

5方法研究報(bào)告..............................................................................................................9

5.1方法研究目標(biāo)...........................................................................................................9

5.2方法原理...................................................................................................................9

5.3試劑和材料...............................................................................................................9

5.4儀器和設(shè)備...............................................................................................................9

5.5個(gè)人防護(hù)用品.........................................................................................................10

5.6實(shí)驗(yàn)環(huán)境.................................................................................................................10

5.7樣品.........................................................................................................................10

5.8分析步驟..................................................................................................................11

5.10方法檢出限和測(cè)定下限.......................................................................................14

5.11精密度和準(zhǔn)確度....................................................................................................14

5.12正確度...................................................................................................................15

6方法驗(yàn)證....................................................................................................................16

6.1方法驗(yàn)證方案.........................................................................................................16

6.2方法驗(yàn)證過(guò)程及結(jié)論.............................................................................................17

7與開(kāi)題報(bào)告的差異說(shuō)明............................................................................................19

8參考文獻(xiàn)....................................................................................................................19

附件1方法驗(yàn)證報(bào)告...................................................................................................21

Ⅱ

《水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法（征求意見(jiàn)稿）》

編制說(shuō)明

1項(xiàng)目背景

1.1任務(wù)來(lái)源

2018年1月4日，上海市政府發(fā)布了《上海市城市總體規(guī)劃（2017-2035年）報(bào)告》[1]，

要求“全市供水水質(zhì)達(dá)到國(guó)際先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)，滿(mǎn)足直飲需求”。2022年8月30日，住建部辦公

廳等部門(mén)聯(lián)合下發(fā)了《關(guān)于加強(qiáng)城市供水安全保障工作的通知》（建辦城〔2022〕41號(hào)）[2]，

要求“全面、系統(tǒng)加強(qiáng)城市供水工作，推動(dòng)城市供水高質(zhì)量發(fā)展，持續(xù)增強(qiáng)供水安全保障能

力；到2025年，建立較為完善的城市供水全流程保障體系和基本健全的城市供水應(yīng)急體系。”

為積極落實(shí)上述要求，提升突發(fā)污染應(yīng)對(duì)能力，加強(qiáng)水廠精細(xì)化管理，保障供水生物安全，

拓展水質(zhì)微生物指標(biāo)和測(cè)定分析能力，上海市凈水技術(shù)學(xué)會(huì)組織上海浦東水務(wù)（集團(tuán)）有限

公司、東方國(guó)際集團(tuán)上海環(huán)境科技有限公司和上海南匯自來(lái)水有限公司等單位，開(kāi)展《水中

微生物含量的測(cè)定三磷酸腺苷（ATP）生物發(fā)光法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)編制項(xiàng)目，并于2023年4月

10日正式立項(xiàng)。編制過(guò)程中，為精準(zhǔn)表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)意義和測(cè)定指標(biāo)，編制組將標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)由《水

中微生物含量的測(cè)定三磷酸腺苷（ATP）生物發(fā)光法》調(diào)整為《水中微生物三磷酸腺苷（ATP）

的測(cè)定生物發(fā)光法》。

1.2工作過(guò)程

1.2.1成立標(biāo)準(zhǔn)編制組

2023年3月，由上海浦東水務(wù)（集團(tuán)）有限公司、東方國(guó)際集團(tuán)上海環(huán)境科技有限公

司、上海南匯自來(lái)水有限公司、哈希水質(zhì)分析（上海）有限公司和同濟(jì)大學(xué)等單位成立標(biāo)準(zhǔn)

編制組，確定標(biāo)準(zhǔn)編制組成員，分配項(xiàng)目工作任務(wù)。

1.2.2國(guó)內(nèi)外資料調(diào)研

2023年3月～6月，標(biāo)準(zhǔn)編制組成員查詢(xún)了國(guó)內(nèi)外水質(zhì)ATP測(cè)定方法和應(yīng)用的相關(guān)標(biāo)

準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料，在整理借鑒的基礎(chǔ)上進(jìn)行歸納和總結(jié)，對(duì)方法中涉及的樣品前處理、測(cè)定步

驟等內(nèi)容進(jìn)行了研究和探討，制訂了初步的實(shí)驗(yàn)方案。

1.2.3立項(xiàng)評(píng)審

2023年3月30日，上海市凈水技術(shù)學(xué)會(huì)組織召開(kāi)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《水中微生物含量的測(cè)定三

磷酸腺苷（ATP）生物發(fā)光法》立項(xiàng)專(zhuān)家評(píng)審會(huì)，經(jīng)審閱文件材料、聽(tīng)取技術(shù)匯報(bào)和現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)

詢(xún)討論，專(zhuān)家組一致同意團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目立項(xiàng)。

1.2.4建立標(biāo)準(zhǔn)方法

2023年4月～7月，標(biāo)準(zhǔn)編制組開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究工作，明確技術(shù)路線，對(duì)方法的各項(xiàng)技術(shù)

參數(shù)和條件進(jìn)行優(yōu)化，確定標(biāo)準(zhǔn)方法技術(shù)細(xì)節(jié)、檢出限、測(cè)定下限、精密度和正確度等方法

指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)要求。

1.2.5方法驗(yàn)證工作

1

2023年7月～2024年1月，標(biāo)準(zhǔn)編制組組織5家驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法的適用性進(jìn)行

方法驗(yàn)證，統(tǒng)一了前處理方法、測(cè)定步驟、樣品性質(zhì)、濃度范圍和數(shù)據(jù)單位等，規(guī)范了驗(yàn)證

報(bào)告格式。

1.2.6標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿和編制說(shuō)明

標(biāo)準(zhǔn)編制組匯總分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，修改完善材料文本，經(jīng)內(nèi)部反復(fù)討論，于2024年1月

30日完成了《〈水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法〉（征求意見(jiàn)稿）》

和《〈水中微生物三磷酸腺苷（ATP）的測(cè)定生物發(fā)光法〉（編制說(shuō)明）》。

1.2.7標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿審查會(huì)

待補(bǔ)充。

2標(biāo)準(zhǔn)制訂的必要性分析

2.1三磷酸腺苷（ATP）

三磷酸腺苷（ATP）又稱(chēng)腺嘌呤核苷三磷酸、腺苷三磷酸，由1分子腺嘌呤、1分子核

糖和3個(gè)磷酸基團(tuán)連接而成，化學(xué)式為C10H16O13N5P3，結(jié)構(gòu)式（見(jiàn)圖1）也可簡(jiǎn)寫(xiě)成A-P～

P～P，“～”代表高能磷酸鍵，當(dāng)高能磷酸鍵水解時(shí)可釋放大量能量。ATP是生物細(xì)胞內(nèi)

主要的能量來(lái)源，在生命活動(dòng)中起著傳遞能量的作用。

圖1.三磷酸腺苷（ATP）結(jié)構(gòu)式

ATP廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)，包括高等動(dòng)物細(xì)胞、高等植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞等，且細(xì)胞

內(nèi)ATP的濃度相對(duì)恒定。通過(guò)測(cè)定ATP的濃度可以快速反映水中活性微生物的污染水平，

并為估算微生物純培養(yǎng)物中的活性細(xì)胞數(shù)量提供方法依據(jù)。

2.2飲用水微生物指標(biāo)現(xiàn)狀

微生物指標(biāo)是反映飲用水衛(wèi)生安全的重要指標(biāo)，相比理化指標(biāo)，微生物指標(biāo)偏少，《生

活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749—2022）[3]中規(guī)定的微生物指標(biāo)僅有菌落總數(shù)、總大腸菌群、

大腸埃希氏菌、腸球菌、賈第鞭毛蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌等7項(xiàng)。菌落總數(shù)

雖是反映水中細(xì)菌總量的指標(biāo)，但由于培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和好氧條件等限制，實(shí)際僅能檢測(cè)

出水中很小一部分以細(xì)菌為主的微生物，無(wú)法全面評(píng)價(jià)飲用水的生物安全。藻類(lèi)和放線菌并

未列入目前的飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，而這兩類(lèi)微生物恰恰是造成水源污染和嗅味事件的重要指標(biāo)。

《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法第12部分：微生物指標(biāo)》（GB/T5750.12—2023）[4]中主要采

用培養(yǎng)、富集、染色和鏡檢等傳統(tǒng)分析方法，步驟復(fù)雜、工作量大、成本高、培養(yǎng)廢棄物多，

而且往往需要等待1～2d才能得到結(jié)果，既無(wú)法適應(yīng)水廠精細(xì)化管理的要求，也無(wú)法實(shí)現(xiàn)

2

應(yīng)急快速檢測(cè)的需求?？傊?，為了保障供水全流程的生物安全和去除效果，亟需引入既能實(shí)

施便捷測(cè)定，又能快速得到結(jié)果，還能反映水中微生物總體污染程度的水質(zhì)指標(biāo)。

2.3ATP測(cè)定的優(yōu)勢(shì)

2.3.1快速便捷

與培養(yǎng)法1～2d的冗長(zhǎng)時(shí)間相比，ATP測(cè)定十分便捷快速，從樣品過(guò)濾到ATP提取再

到熒光測(cè)定僅需5～15min，既大幅度減輕了操作人員的工作強(qiáng)度，也大幅度提升了檢測(cè)效

率，為城鎮(zhèn)供水廠及時(shí)應(yīng)對(duì)和工藝調(diào)整提供了快速便捷的水質(zhì)分析手段。

2.3.2濃度跨度大

在制水全流程中，微生物ATP含量變化非常大，水源水可超過(guò)1×102pg/mL，藻類(lèi)暴

發(fā)時(shí)更高，砂濾池反沖洗水可達(dá)1×103pg/mL，后臭氧消毒接觸池出水則可降至1×10-2

pg/mL，出廠水普遍為1×10-1pg/mL，部分水齡長(zhǎng)的管網(wǎng)末梢水接近1×101pg/mL，如此大

的濃度跨度均可使用相同的ATP測(cè)定方法。

2.3.3解決關(guān)鍵水質(zhì)問(wèn)題

供水源頭方面，湖庫(kù)藻類(lèi)暴發(fā)污染十分頻繁，ATP測(cè)定可以快速獲得生物總量結(jié)果，

還可以通過(guò)對(duì)藻類(lèi)的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)預(yù)判藻華發(fā)展趨勢(shì)。供水末端方面，由于城市供水水質(zhì)的整體

提升，理化指標(biāo)已相對(duì)穩(wěn)定，與化學(xué)污染不同，微生物污染常具有增殖性、次生性和傳染性

等特性[5]，從而成為影響二次供水乃至直飲水水質(zhì)的關(guān)鍵問(wèn)題。由于ATP的方法檢出限低

于1pg/mL，通過(guò)增加富集水量還可降至飛克（fg）級(jí)別，這為研究二次供水和直飲水的生

物安全提供了快速、精準(zhǔn)和有效的手段。

3國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法研究

3.1國(guó)外相關(guān)分析方法和應(yīng)用

自1963年W.D.McElroy[6]等揭示了使ATP發(fā)出熒光的方法原理，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家相繼

采用生物發(fā)光法測(cè)定水中ATP濃度的歷史已超過(guò)半個(gè)世紀(jì)，積累了大量的實(shí)踐應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，

涉及領(lǐng)域包括：水源藻類(lèi)暴發(fā)預(yù)警、凈水工藝過(guò)程中的微生物變化、氧化和消毒效果評(píng)估、

供水管網(wǎng)生物安全性評(píng)估等。

在ATP分析方法技術(shù)方面，ATP測(cè)定常與經(jīng)典平板法菌落總數(shù)、異養(yǎng)菌平板計(jì)數(shù)（HPC）

和流式細(xì)胞技術(shù)（FCM）等微生物檢測(cè)方法進(jìn)行比較，研究各種方法之間的相關(guān)性[7]；在水

源水藻類(lèi)暴發(fā)預(yù)警方面，通過(guò)聯(lián)合測(cè)定藻密度、葉綠素a和OD730吸光度等指標(biāo)，ATP測(cè)

定可作為藻類(lèi)暴發(fā)的早期預(yù)警信號(hào)[8]；在凈水工藝方面，通過(guò)工藝過(guò)程進(jìn)、出水中ATP濃

度變化，計(jì)算工藝對(duì)微生物的去處效率和生物泄漏程度，探討濾池反沖洗頻率的合理性，評(píng)

價(jià)氯消毒效果[9-11]；在管網(wǎng)水方面，ATP測(cè)定結(jié)果可反映不同管網(wǎng)中的基準(zhǔn)微生物含量隨采

樣位置與水廠距離的變化情況（水齡）[12]；在污水方面，ATP測(cè)定可快速獲得由不同種類(lèi)

微生物構(gòu)成的復(fù)雜活性污泥的真實(shí)活性，可表征污水消毒過(guò)程中糞大腸菌群的滅活效果，可

彌補(bǔ)經(jīng)紫外線消毒后培養(yǎng)法無(wú)法生長(zhǎng)成菌落的方法不足[13]；在再生回用水方面，通過(guò)ATP

測(cè)定，可反映可同化有機(jī)物（AOC）水平，從而評(píng)價(jià)回用水的生物穩(wěn)定性[14]。

為規(guī)范水中微生物（包括水樣、廢水樣品、微生物培養(yǎng)液、水中浮游植物和浮游動(dòng)物樣

品等）的ATP測(cè)定方法，美國(guó)材料與試驗(yàn)協(xié)會(huì)（ASTM）于2015年制訂了分析方法標(biāo)準(zhǔn)：

“StandardTestMethodforAdenosineTriphosphate(ATP)ContentofMicroorganismsinWater

3

(D4012—15)”[15]（《水中微生物的三磷酸腺苷（ATP）含量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法》（D4012—15））；

2023年，ASTM對(duì)該方法進(jìn)行了修訂：“StandardTestMethodforAdenosineTriphosphate(ATP)

ContentofMicroorganismsinWater(D4012—23a)”[16]。

注：美國(guó)材料與試驗(yàn)協(xié)會(huì)（AMERCANSOCIETYFORTESTINGANDMATERIALS，簡(jiǎn)稱(chēng)ASTM）成

立于1896年，是世界上最大的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展機(jī)構(gòu)之一，ASTM的會(huì)員約34000個(gè)，其中約4000個(gè)來(lái)自美國(guó)以

外的上百個(gè)國(guó)家，ASTM已制定10000多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。

通過(guò)國(guó)外文獻(xiàn)和分析方法標(biāo)準(zhǔn)可以發(fā)現(xiàn)：①ATP測(cè)定應(yīng)用已有較長(zhǎng)歷史，在國(guó)外得到了

廣泛應(yīng)用；②權(quán)威機(jī)構(gòu)ASTM于2015年發(fā)布了測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，并在2023年進(jìn)行了修訂?？傊?，

通過(guò)測(cè)定ATP濃度來(lái)反映水中微生物含量的方法是一項(xiàng)成熟、標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法，已被廣泛

應(yīng)用。

3.2國(guó)內(nèi)相關(guān)分析方法和應(yīng)用

3.2.1國(guó)內(nèi)水行業(yè)的應(yīng)用

國(guó)內(nèi)采用生物發(fā)光法測(cè)定水中ATP濃度的研究應(yīng)用時(shí)間不長(zhǎng)，但應(yīng)用范圍較廣，包括

原水、城鎮(zhèn)供水廠工藝過(guò)程水、管網(wǎng)水、二次供水、分質(zhì)供水、現(xiàn)制現(xiàn)售水、再生水、工業(yè)

處理工藝過(guò)程水、口腔治療用水、石油采出水、空間站循環(huán)水和細(xì)菌培養(yǎng)液等（見(jiàn)表1）。

表1.水中ATP測(cè)定相關(guān)國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)

文獻(xiàn)名樣品類(lèi)型文獻(xiàn)主要研究?jī)?nèi)容

配制菌落總數(shù)濃度梯度樣品，將平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌落總數(shù)和ATP

ATP發(fā)光技術(shù)快速檢測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較：①ATP測(cè)定快速、簡(jiǎn)便，使細(xì)菌檢查的工作量

測(cè)飲用水中菌落總數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)液大幅度減輕；②ATP測(cè)定結(jié)果與菌落總數(shù)在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)，

[17]兩者對(duì)數(shù)值的相關(guān)性r=0.98525；③革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌

都可以用ATP測(cè)定確定細(xì)菌數(shù)量。

對(duì)住宅小區(qū)和自動(dòng)售水機(jī)水樣進(jìn)行ATP測(cè)定：①ATP測(cè)定結(jié)果合

飲用水（二

ATP生物發(fā)光法在快格率為84.3%（＞50RLU/mL），菌落總數(shù)合格率為89.4%（＞

次供水、分

速檢測(cè)飲用水菌落總100CFU/mL）；②ATP測(cè)定和菌落總數(shù)有較好相關(guān)性（R2=0.804，

質(zhì)供水、現(xiàn)

數(shù)中的應(yīng)用[18]P＜0.05)，通過(guò)ATP測(cè)定可以間接反映出細(xì)菌的數(shù)量；③ATP測(cè)定

制現(xiàn)售水）

5min內(nèi)可完成，儀器攜帶方便，可實(shí)現(xiàn)及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)取樣監(jiān)測(cè)。

將ATP測(cè)定用于工業(yè)水供水系統(tǒng)：①ATP測(cè)定簡(jiǎn)便、快速；②可

ATP技術(shù)用于工業(yè)水用于評(píng)估工業(yè)水供水系統(tǒng)的運(yùn)行狀況；③紅蟲(chóng)蟲(chóng)卵可能是造成工藝

工業(yè)處理工

廠微生物監(jiān)測(cè)的研究段和儲(chǔ)存段ATP升高的原因之一；④ATP測(cè)定有助于水處理系統(tǒng)

藝過(guò)程水

[19]*在微生物大量滋生時(shí)采取及時(shí)的防范措施，對(duì)工藝段藥劑的投加量

具有一定的指導(dǎo)意義。

對(duì)空間站水循環(huán)處理系統(tǒng)中微生物的測(cè)定進(jìn)行比較：①ATP測(cè)定不

空間站水循環(huán)處理系

空間站循環(huán)需要復(fù)雜設(shè)備、稀釋和培養(yǎng)，操作簡(jiǎn)便，與傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法有較

統(tǒng)中微生物的檢測(cè)技

水好的相關(guān)性；②比色固相萃取法測(cè)碘和銀離子濃度法快速、精確、

術(shù)[20]

簡(jiǎn)便，也解決了殺菌劑選擇的問(wèn)題。

對(duì)飲用水和再生水進(jìn)行ATP測(cè)定，使用異養(yǎng)菌平板計(jì)數(shù)法（HPC）

ATP生物發(fā)光法在飲

和流式細(xì)胞技術(shù)（FCM）驗(yàn)證：①ATP測(cè)定方法快速、靈敏度高，

用水和再生水活菌生飲用水、再

操作簡(jiǎn)便，可和其他方法結(jié)合用于水中微生物的測(cè)定及現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)監(jiān)

物量快速檢測(cè)中的應(yīng)生水

測(cè)；②ATP測(cè)定檢測(cè)限為0.001nM；③水樣中活菌ATP濃度與FCM

用[21]

活細(xì)胞數(shù)相關(guān)性良好（R2=0.87，P＜0.05），但與HPC菌落數(shù)之間

4

相關(guān)性較差（R2=0.64，P＜0.05）；③水樣平均每個(gè)細(xì)胞ATP濃度

為1.39×10-11nM。

對(duì)48家相同規(guī)模的醫(yī)療機(jī)構(gòu)口腔科共720份治療用水進(jìn)行ATP測(cè)

ATP生物熒光技術(shù)在

定：①ATP測(cè)定和菌落總數(shù)結(jié)果相關(guān)性較好（R2=0.819，P=0.00）；

口腔治療用水污染狀口腔治療用

②參照生活飲用水中菌落總數(shù)限制（≤100CFU/mL），ATP測(cè)定

況現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中的水

限值RLU為787；③ATP測(cè)定口腔治療用水污染狀況，可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)

應(yīng)用初探[22]

場(chǎng)快速檢測(cè)和篩查，提高監(jiān)督執(zhí)法效率。

對(duì)20家口腔醫(yī)療單位的60臺(tái)牙科綜合治療臺(tái)的176份椅旁水樣，

牙科綜合治療臺(tái)出水采用ATP測(cè)定和細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行比較：①細(xì)菌總數(shù)范圍為0～

口腔治療用

端水質(zhì)調(diào)查及檢測(cè)方2.3×106CFU/mL，僅有29.55%達(dá)標(biāo)；②ATP測(cè)定和平板計(jì)數(shù)法的

水

法[23]相關(guān)系數(shù)為0.60；③ATP測(cè)定可作為快速椅旁水質(zhì)監(jiān)測(cè)的方法之

一。

采用ATP測(cè)定和平板計(jì)數(shù)法測(cè)定單一細(xì)菌、混合細(xì)菌、生活熱水

ATP法測(cè)水中細(xì)菌數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)和飲用水：①對(duì)生活熱水和飲用水進(jìn)行ATP測(cè)定與R2A培養(yǎng)基平

目效果評(píng)價(jià)及預(yù)警限液、生活熱板計(jì)數(shù)的相關(guān)性R2為0.8436和0.7254，可作為評(píng)價(jià)水質(zhì)的初篩方

值研究[24]水、飲用水法；②針對(duì)生活熱水和飲用水限值100CFU/mL，對(duì)應(yīng)的ATP測(cè)定

限值為1000RLU和1400RLU。

ATP生物發(fā)光檢測(cè)法比較ATP測(cè)定與現(xiàn)行絕跡稀釋法為基礎(chǔ)評(píng)價(jià)油田采出水殺菌劑的

在油田采出水中的應(yīng)石油采出水殺菌效果：①ATP測(cè)定可準(zhǔn)確測(cè)出殺菌劑的殺菌率，并將檢測(cè)評(píng)價(jià)

用[25]*時(shí)間由原來(lái)的7d縮短至2h。

采用ATP測(cè)定和異養(yǎng)菌平板計(jì)數(shù)法（HPC）對(duì)麗水市新建鎮(zhèn)自來(lái)水

不同季節(jié)山區(qū)飲用水城鎮(zhèn)供水廠廠進(jìn)行分析：①處理系統(tǒng)微生物量和活性隨季節(jié)變化，春季>夏季>

處理系統(tǒng)微生物多樣原水、工藝冬季>秋季；②砂層微生物活性＞活性炭顆粒層活性，生物量＜活

[26]

性和時(shí)空分布特征過(guò)程水性炭層生物量；③微生物多樣性受pH值、CODMn和濁度等影響；

④微生物活性和生物量之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。

使用細(xì)菌培養(yǎng)液、飲用水、純水研究ATP測(cè)定準(zhǔn)確性的影響因素：

水中細(xì)菌ATP熒光檢細(xì)菌培養(yǎng)①在25℃條件下，采用5s間隔連續(xù)讀數(shù)，記錄最大值作為測(cè)試結(jié)

測(cè)影響因素實(shí)驗(yàn)研究液、飲用水、