2025屆云南省玉溪市通?？h第二中學高考仿真卷生物試卷含解析

2025屆云南省玉溪市通海縣第二中學高考仿真卷生物試卷注意事項：1．答卷前，考生務必將自己的姓名、準考證號填寫在答題卡上。2．回答選擇題時，選出每小題答案后，用鉛筆把答題卡上對應題目的答案標號涂黑，如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其它答案標號?；卮鸱沁x擇題時，將答案寫在答題卡上，寫在本試卷上無效。3．考試結束后，將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．甲地因森林火災使原有植被消失，乙地因火山噴發(fā)被火山巖全部覆蓋，之后兩地均發(fā)生了群落演替。關于甲、乙兩地群落演替的敘述，錯誤的是A．甲地和乙地發(fā)生的演替類型相同B．若沒有外力干擾，甲地可重現(xiàn)森林C．地衣會比苔蘚更早地出現(xiàn)在乙地火山巖上D．甲、乙兩地隨著時間延長生物多樣性逐漸增多2．某種大型肉食動物遷入一新的生態(tài)系統(tǒng)后，大型肉食動物對當?shù)氐男⌒腿馐硠游锖湍承┲彩承詣游镉胁妒澈万屭s作用。一段時間內，下列情況不會發(fā)生的是（）A．增加物種豐富度導致營養(yǎng)結構更加復雜B．某些生產(chǎn)者的個體數(shù)量增加后保持穩(wěn)定C．使植食性動物之間的竟爭優(yōu)勢發(fā)生改變D．生態(tài)系統(tǒng)各營養(yǎng)級生物同化能量均減少3．下列關于動物細胞培養(yǎng)及融合技術的敘述，正確的是（）A．細胞融合即細胞雜交，指由2個或多個細胞融合成1個細胞的現(xiàn)象B．一個脾細胞和一個骨髓瘤細胞融合而成的雜交細胞稱為雜交瘤細胞C．滋養(yǎng)層細胞可對細胞克隆起到支持生長的作用D．“多莉”克隆過程中，營養(yǎng)限制性培養(yǎng)的目的是使細胞周期同步化，最終有利于重組細胞中核基因表達的分子開關的啟動4．下圖表示獲得玉米多倍體植株采用的技術流程。下列有關說法不正確的是（）A．可用秋水仙素或低溫誘導處理發(fā)芽的種子B．可用顯微鏡觀察根尖細胞染色體數(shù)目的方法鑒定多倍體C．得到的多倍體植株一般具有莖桿粗壯、果穗大等優(yōu)點D．將得到的多倍體植株進行花藥離體培養(yǎng)又可得到二倍體5．下列關于生物學實驗的說法敘述不正確的是（）A．通過熒光標記技術，可以知道基因在染色體上的位置B．預實驗的目的是為了減少實驗誤差C．土壤中小動物類群豐富度的研究常用取樣器取樣的方法進行采集、調查D．鹽酸可用于催化蛋白質、脂肪和淀粉的水解6．據(jù)報道，科研人員選取成人皮膚細胞，將其培育成神經(jīng)干細胞后，放入特制的環(huán)境中，誘導組織進一步生長發(fā)育，最終形成一個豌豆大小的“微型人腦”。這個組織已經(jīng)達到9周胎兒大腦的發(fā)育水平，但尚不能獨立思考。下列描述正確的是A．由成人皮膚細胞培育出微型人腦的過程中，處于分裂期的細胞不進行DNA復制和蛋白質合成B．若培育過程中因感染病毒出現(xiàn)癌變，則癌變細胞的基因組中整合有病毒癌基因以及與致癌有關的核酸序列C．若培育過程中出現(xiàn)細胞凋亡，則酶的活性都下降D．由成人皮膚細胞培育成微型人腦，體現(xiàn)了細胞的全能性7．下列關于進化的敘述，正確的是（）A．自然選擇是進化的前提B．進化發(fā)生的標志是生殖隔離的出現(xiàn)C．遺傳多樣性的下降不利于生物的適應性進化D．若某小鼠接受輻射而基因突變，則該小鼠發(fā)生了進化8．（10分）下列生活中的實例和對應的生物解釋（或原理）錯誤的是（）A．糖尿病患者不能口服胰島素進行治療——口服后蛋白質被水解，失去功效B．礦工職業(yè)病硅肺﹣﹣硅塵破壞吞噬細胞的溶酶體膜，內溶物釋放后破壞細胞結構C．新宰的豬肉放置一段時間再煮更新鮮——這與肌細胞線粒體的活動密切相關D．酷夏時節(jié)，戶外工作人員需要補充鹽汽水——保證體內水鹽平衡二、非選擇題9．（10分）新的研究表明，專性嗜熱菌株的嗜熱酶在處理食品和造紙工業(yè)廢水、芳香族化合物、氰藥、重金屬及其他有機難降解物質等方面具有重要作用。如圖甲所示為降解污染物過程中由該酶催化的反應與未使用該酶的非催化反應的自由能變化情況。請據(jù)圖回答問題：（1）化學反應時必定會經(jīng)過一個過渡態(tài)——活化絡合物。過渡態(tài)具有比反應物分子和生成物分子都要高的勢能。催化劑的實質就是與反應物分子結合，改變過渡態(tài)的勢能，圖甲中a和b中為催化反應活化能的是____________，酶可以很大程度地____________反應活化能。（2）大多數(shù)酶屬于蛋白質，少數(shù)酶屬于____________，影響其活性的因素主要有____________，所有的酶都____________（填“有”或“沒有”）調節(jié)生物體生命活動的作用。（3）細胞中的絕大多數(shù)生理過程靠ATP____________（填“直接”或“間接”）提供能量。但也有例外，如在人體小腸絨毛細胞的細胞膜上，葡萄糖主動運輸載體蛋白在Na+順濃度梯度從細胞外擴散到細胞內時，“捎帶著”把葡萄糖轉運到細胞內（如圖乙）。所以，小腸絨毛細胞以主動運輸?shù)姆绞轿掌咸烟菚r，ATP____________（填“直接”或“間接”）提供能量。10．（14分）某科研小組通過農(nóng)桿菌轉化法將黑麥草的抗旱基因P轉入野生型擬南芥，以驗證基因P的功能，其流程如圖所示。回答下列問題：（1）利用PCR技術從黑麥草的DNA中分離并克隆目的基因P，______________（填“需要”或“不需要”）用限制酶進行預處理，其原因是_________________________。（2）用SmalI和SalI這兩種限制酶分別對含有基因P的DNA和質粒進行雙酶切，然后連接形成①______________。與雙酶切相比，用同一種限制酶對二者進行單酶切的缺點是容易造成基因P或質粒自身環(huán)化、______________。（3）將②的花序浸入農(nóng)桿菌懸浮液以實現(xiàn)轉化，在適宜條件下培養(yǎng)，收獲@的種子，在含潮霉素（一種抗生素）的MS培養(yǎng)基上篩選得到③，這表明質粒載體攜帶的選擇標記是______________。（4）基因P表達的蛋白P是脯氨酸合成過程所需的一種關鍵酶，而脯氨酸在細胞中的積累既可提高植物的抗旱性，又可抑制蛋白P的酶活性。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白P的第128位苯丙氨酸若變?yōu)楸彼?，該抑制作用則顯著降低。請據(jù)此提出進一步提高植物抗旱性的一種簡要思路______________。11．（14分）鴯鹋油提取自澳洲動物鴯鹋（一種當?shù)爻Ｒ婙B類）的背部脂肪，具有很多用途，如促進傷口愈合，緩解關節(jié)炎等，也常與一些抗菌成分混合制成抗菌藥物，近年來受到研究人員的關注。（1）隨著抗菌藥物被廣泛使用，病原菌的抗藥性基因頻率發(fā)生___________（填“定向”或“不定向”）改變，人們迫切希望發(fā)現(xiàn)新結構的抗菌化合物。（2）前期研究發(fā)現(xiàn)鴯鹋油的水溶性較差，所以不能在___________培養(yǎng)基上出現(xiàn)清晰的抑菌圈，故將醇鵲油與乙醇和Tween81（一種乳化劑）混合均勻制成乳液。為確定鴯鹋油的最小抑菌濃度（MIC），研究人員進行了以下實驗：①將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌分別___________到LB培養(yǎng)基中，在37℃搖床條件下培養(yǎng)。搖床振蕩培養(yǎng)的原因是___________。②一段時間后將上述培養(yǎng)基稀釋為一定濃度的菌懸液，加入不同稀釋濃度的鴯鹋油乳液并振蕩混勻，培養(yǎng)21h后測定菌體的存活狀況，結果如下表。鴯鹋油濃度/%菌體生長情況大腸桿菌金黃色葡萄球菌沙門氏菌1+++1．11156+++1．11313+++1．11625-++1．1125--+1．125--+1．15--+注：“+”表示有菌生長；“-”表示無菌生長。上述結果顯示：_______________。（3）常見抗菌藥物青霉素的抗菌機理是抑制細菌細胞壁的合成。有人提出鴯鹋油可增大菌體細胞膜的通透性。已知多數(shù)細菌體內存在β—半乳糖苷酶，可催化乳糖水解生成_________________和半乳糖，鄰硝基酚-β半乳糖苷（ONPG）是一種乳糖類似物，可進入菌體，被β-半乳糖苷酶水解為鄰硝基苯酚（一種黃色物質）。分光光度計可定量檢測溶液中某種物質的含量。為確定鵲油能否增大菌體細胞膜通透性，請你根據(jù)上述原理寫出實驗思路____________。12．蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經(jīng)_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術。②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和_________分別導入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點是_________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、A【解析】

甲地因森林火災使原有植被消失，但原有的土壤條件基本保留，甚至還保留了植物的種子或其他繁殖體，甲地發(fā)生的演替屬于次生演替；乙地因火山噴發(fā)被火山巖全部覆蓋，植被徹底消失，乙地發(fā)生的演替屬于初生演替?！驹斀狻緼、由以上分析可知：甲地發(fā)生的演替屬于次生演替，乙地發(fā)生的演替屬于初生演替，A錯誤；

B、無論是初生演替，還是次生演替，若沒有外力干擾，都可演替到森林階段，B正確；

C、初生演替要依次經(jīng)歷裸巖階段、地衣階段、苔蘚階段、草本植物階段、灌木階段、森林階段，C正確；

D、演替的最終結果使生物多樣性增加，生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性增加，D正確。

故選：A。2、D【解析】

一個完整的生態(tài)系統(tǒng)包括生物部分和非生物部分，非生物部分包括陽光、空氣、水、溫度等，生物部分由生產(chǎn)者、消費者和分解者組成。生態(tài)系統(tǒng)的能量流動和物質循環(huán)都是通過食物鏈和食物網(wǎng)的渠道實現(xiàn)的，物質是能量的載體，使能量沿著食物鏈(網(wǎng))流動，而能量又作為動力，使物質能夠不斷地在生態(tài)系統(tǒng)和無機環(huán)境之間循環(huán)往復?！驹斀狻緼、某種大型肉食動物遷入一新生態(tài)系統(tǒng)后，對當?shù)氐男⌒腿馐硠游锖椭彩承詣游镉胁妒澈万屭s作用，使物種豐富度增加、營養(yǎng)結構更加復雜，與題意不符，A錯誤；B、植食性動物數(shù)量減少，對植物的捕食減弱，會導致某些生產(chǎn)者的個體數(shù)量增加后保持穩(wěn)定，與題意不符，B錯誤；C、根據(jù)題意可知，某種大型肉食性動物遷入到一個新的生態(tài)系統(tǒng)時，對低營養(yǎng)級肉食性動物與植食性動物有捕食和驅趕作用，故某種植食性動物可能在競爭中失去原有競爭優(yōu)勢，與題意不符，C錯誤；D、某種大型肉食動物遷入一新生態(tài)系統(tǒng)后，改變了植食性動物競爭優(yōu)勢狀況，但生態(tài)系統(tǒng)各營養(yǎng)級同化能量變化不能確定，不可能出現(xiàn)各個營養(yǎng)級生物同化量都減少的情況，D正確。故選D。3、D【解析】

細胞融合與細胞雜交細胞融合指兩個或多個細胞融合成一個細胞的現(xiàn)象。細胞融合可以在基因型相同或不同的細胞間進行，其中基因型不同的細胞間的融合就是細胞雜交。由于細胞雜交中染色體容易丟失,動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理相同，誘導動物細胞融合的方法與植物原生質體融合的方法也類似，常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等。提高細胞克隆形成率的措施有：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加血清(胎牛血清最好)、以滋養(yǎng)細胞(如經(jīng)射線照射本身失去增殖力的小鼠成纖維細胞)支持生長、激素(胰島素等)刺激、使用CO2培養(yǎng)箱、調節(jié)pH等?！驹斀狻緼、動物細胞融合是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，一般為兩個細胞的融合，其中基因型不同的細胞間的融合就是細胞雜交，A錯誤；B、抗體生成細胞和瘤細胞的融合叫做雜交瘤技術，據(jù)此可知，一個經(jīng)過免疫的脾細胞與一個骨髓瘤細胞融合而成的雜交細胞稱為雜交瘤細胞，B錯誤；C、滋養(yǎng)細胞可對細胞克隆起到支持生長的作用，不是滋養(yǎng)層細胞支持生長，C錯誤；D、多莉”克隆過程中，營養(yǎng)限制性培養(yǎng)的目的是使細胞周期同步化，最終有利于重組細胞中核基因表達的分子開關的啟動，D正確。故選D。4、D【解析】

多倍體育種是指利用人工誘變或自然變異等，通過細胞染色體組加倍獲得多倍體育種材料，用以選育符合人們需要的優(yōu)良品種。多倍體是指由受精卵發(fā)育而來并且體細胞中含有三個或三個以上染色體組的個體。多倍體育種的原理是染色體畸變。單倍體是具有體細胞染色體數(shù)為本物種配子染色體數(shù)的生物個體。配子發(fā)育來的均為單倍體。【詳解】A、秋水仙素能抑制紡錘絲的形成，可用秋水仙素或低溫誘導處理發(fā)芽的種子，使細胞中的染色體數(shù)目加倍，A正確；B、多倍體細胞中的染色體數(shù)目多，可用顯微鏡觀察根尖細胞染色體數(shù)目的方法鑒定多倍體，B正確；C、得到的多倍體植株含有多套遺傳物質，一般具有莖桿粗壯、果穗大等優(yōu)點，C正確；D、將得到的多倍體植株進行花藥離體培養(yǎng)得到的是單倍體，D錯誤。故選D。5、B【解析】

鹽酸既能催化蛋白質水解，也能催化脂肪和淀粉分解；土壤中小動物類群豐富度的調查常用取樣器取樣法進行采集。對于活動能力強、活動范圍大的個體調查種群密度時適宜用標志重捕法，而一般植物和個體小、活動能力小的動物以及蟲卵等種群密度的調查方式常用的是樣方法?！驹斀狻緼、通過熒光標記技術，可以判斷基因與染色體的位置關系，A正確；B、預實驗的目的是為進一步實驗摸索條件，不是為了減少實驗誤差，B錯誤；C、調查土壤中小動物類群豐富度常用取樣器取樣法，C正確；D、鹽酸既能催化蛋白質水解，也能催化脂肪和淀粉分解，D正確。故選B。6、B【解析】

1、細胞全能性是指已經(jīng)分化的細胞仍具有發(fā)育成完整個體的潛能。細胞全能性以細胞形成個體為標志。

2、細胞凋亡是由基因決定的細胞編程序死亡的過程。細胞凋亡是生物體正常的生命歷程，對生物體是有利的，而且細胞凋亡貫穿于整個生命歷程。

3、細胞分化是指在個體發(fā)育中，由一個或一種細胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)，結構和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。細胞分化的實質：基因的選擇性表達。

4、癌細胞的主要特征：

（1）無限增殖；

（2）形態(tài)結構發(fā)生顯著改變；

（3）細胞表面發(fā)生變化，細胞膜上的糖蛋白等物質減少，易轉移?！驹斀狻緼、處于分裂期的細胞不進行DNA復制，但是有少量蛋白質合成，A錯誤；B、若培育過程中因感染病毒出現(xiàn)癌變，則癌變細胞的基因組中整合有病毒癌基因以及與致癌有關的核酸序列，B正確；C、細胞的凋亡與基因的選擇性表達有關，此過程中與凋亡相關的基因的表達能力上升，與凋亡相關的酶的活性增強，C錯誤；D、由成人皮膚細胞培育成微型人腦，但沒有形成完整個體，因此不能體現(xiàn)細胞的全能性，D錯誤。7、C【解析】

種群是生物進化的基本單位，生物進化的實質是種群基因頻率的改變。突變和基因重組，自然選擇及隔離是物種形成過程的三個基本環(huán)節(jié)，通過它們的綜合作用，種群產(chǎn)生分化，最終導致新物種形成。在生物進化過程中，突變和基因重組產(chǎn)生生物進化的原材料，自然選擇使種群的基因頻率定向改變并決定生物進化的方向，隔離是新物種形成的必要條件?！驹斀狻緼、進化的基本單位是種群，不是個體，生物進化的實質是種群基因頻率發(fā)生改變，某小鼠發(fā)生基因突變，種群基因頻率不一定改變，A錯誤；B、進化發(fā)生的標志是基因頻率的改變，B錯誤；C、遺傳多樣性的下降使可遺傳變異的類型減少，不利于生物的適應性進化，C正確；D、基因突變只是提供了生物進化的原材料，不能決定生物進化方向，D錯誤。故選C?！军c睛】本題考查生物進化的相關知識，意在考查學生的識記能力和對生物進化的原因及過程的理解，把握知識間聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡的能力；能運用所學知識解釋生物學問題的能力。8、C【解析】

1、蛋白質類藥物不能口服，因為口服后被水解；2、溶酶體內有多種水解酶，一旦溶酶體膜破裂被釋放出來，會破壞細胞結構，使細胞死亡；3、動物體剛死時溶酶體不破裂，一段時間后其中的酶會隨其破裂溢出；溶酶體內含有蛋白酶原，能在細胞死亡后被激活成為蛋白酶，催化肌肉細胞間的膠原蛋白水解，使肌肉變得松軟，烹調后更加鮮嫩；4、大量出汗時會帶走體內的水分和無機鹽，因此需要補充鹽汽水以保證體內水鹽平衡?！驹斀狻緼、糖尿病患者不能口服胰島素進行治療，是因為胰島素是蛋白質，口服后被水解，失去功效，A正確；B、硅肺是肺部吸入硅塵后，硅塵被吞噬細胞吞噬，吞噬細胞中的溶酶體缺乏分解硅塵的酶，而硅塵卻能破壞溶酶體膜，使其中的水解酶釋放出來，破壞細胞結構，使細胞死亡，最終導致肺功能受損引起，B正確；C、動物體剛死時溶酶體不破裂，一段時間后其中的酶會隨其破裂溢出，溶酶體內含有蛋白酶原，能在細胞死亡后被激活成為蛋白酶，催化肌肉細胞間的膠原蛋白水解，使肌肉變得松軟，烹調后更加鮮嫩，C錯誤；D、酷夏時節(jié)，戶外工作人員大量出汗，帶走體內的水分和無機鹽，因此需要補充鹽汽水以保證體內水鹽平衡，D正確。故選C。【點睛】本題考查學生運用生物學知識解決實際生活與生產(chǎn)相關問題，相關的知識點有蛋白質的水解、礦工職業(yè)病硅肺的形成原因、溶酶體的功能和體內的滲透壓平衡，一個題目綜合考查了四個知識點，有一定難度。二、非選擇題9、a降低RNA溫度和pH沒有直接間接【解析】

考查識圖能力及圖表中信息提取和處理能力；考查酶的概念、ATP的功能等基本知識【詳解】（1）根據(jù)圖甲可知a表示“和酶結合的過渡態(tài)”，b是沒有酶時的活化能，顯然酶可以很大程度地降低反應活化能。（2）大多數(shù)酶屬于蛋白質，少數(shù)酶屬于RNA，影響其活性的因素主要有溫度、PH等，酶只有催化作用，都沒有調節(jié)生物體生命活動的作用。（3）ATP是直接能源物質，細胞中的絕大多數(shù)需要能量的生理過程靠ATP直接提供能量。根據(jù)“但也有例外”，“捎帶著”等語義可知ATP間接為小腸上皮細胞吸收葡萄糖提供能量?！军c睛】關鍵：圖甲信息的提取，a表示酶與底相結合的活化能，b代表無酶催化的活化能；圖乙“絕大多數(shù)生理過程靠ATP”，“但也有例外”，“捎帶著”等信息的分析。10、不需要使用基因特異性引物可以從模板DNA中擴增出特定基因重組質粒（重組DNA分子）基因P和質粒反向連接潮霉素抗性基因定點誘變改造目的基因P，使其編碼的蛋白P的第128位苯丙氨酸替換為丙氨酸；將改造后的基因轉入受體植物，以期提高受體植物的抗旱性【解析】

基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲??；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與表達。從分子水平上檢測目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術?！驹斀狻浚?）使用基因特異性引物可以從模板DNA中擴增出位于兩個引物之間的特定基因序列，無需限制酶預先切取模板。（2）目的基因和質粒載體的連接物稱為重組質粒或者重組DNA分子。用同一種限制酶對含有目的基因的DNA和質粒進行單酶切，因為獲得的末端相同，所以容易造成目的基因或質粒自身環(huán)化、目的基因和質粒反向連接。（3）MS培養(yǎng)基中添加潮霉素進行篩選，由此可見，質粒載體攜帶的標記基因是潮霉素抗性基因。（4）蛋白P的第128位苯丙氨酸若變?yōu)楸彼幔彼嵋种频鞍譖的酶活性的作用則顯著降低。但是，如何將蛋白P的第128位苯丙氨酸變?yōu)楸彼?，這就必須從根本上相應地改造抗旱目的基因P，將改造后的基因轉入受體植物，以期提高受體植物的抗旱性。【點睛】本題涉及選修模塊3“現(xiàn)代生物科技專題”中基因工程和蛋白質工程等知識，選取真實科研案例作為試題情境，考查考生對PCR的原理和應用、限制酶的作用特點、連接酶的作用、質粒載體的作用及特點，以及蛋白質工程的思路等知識的理解，考查應用所學知識解決實際問題的能力。11、定向固體接種供氧、目的菌與營養(yǎng)物質充分接觸大腸桿菌對鴯鹋油較為敏感，最小抑菌濃度約為1．11625%，對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度約為1．1125%，并且鴯鹋油對沙門氏菌沒有表現(xiàn)出抑菌性葡萄糖將大腸桿菌（或其他細菌）置于培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再加入ONPG和一定濃度（≥MIC）的鴯鹋油，對照組不加鴯鹋油。一段時間后利用分光光度計測量鄰硝基苯酚的量，記錄并比較?！窘馕觥?/p>

微生物的實驗室培養(yǎng)，常用到培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。抑菌圈法又叫擴散法，是利用待測藥物在瓊脂平板中擴散使其周圍的細菌生長受到抑制而形成透明圈，即抑菌圈，根據(jù)抑菌圈大小判定待測藥物抑菌效價的一種方法?！驹斀狻浚?）隨著抗菌藥物被廣泛使用，抗藥性強的病原菌存活，病原菌的抗藥性基因頻率提高，發(fā)生定向改變。（2）鴯鹋油的水溶性較差，所以不能在固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)清晰的抑菌圈。①將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌分別接種到LB培養(yǎng)基中。搖床振蕩培養(yǎng)可以提高溶氧量、增加目的菌與營養(yǎng)物質的接觸。②從表中可知，不同稀釋濃度的鴯鹋油乳液中沙門氏菌均有生長，說明鴯鹋油對沙門氏菌沒有表現(xiàn)出抑菌性。1.11625濃度下，大腸桿菌停止生長，1.1125濃度下，金黃色葡萄球菌停止生長，說明大腸桿菌對鴯鹋油較為敏感，最小抑菌濃度約為1.11625%，對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度約為1.1125%。（3）乳糖由一分子半乳糖和一分子葡萄糖組成。鄰硝基酚-β半乳糖苷（ONPG）是一種乳糖類似物，可進入菌體，被β-半乳糖苷酶水解為鄰硝基苯酚（一種黃色物質）。分光光度計可定量檢測溶液中某種物質的含量。為確定鵲油能否增大菌體細胞膜通透性，自變量是鵲油的有無，因變量是菌體細胞膜的通透性。觀測指標為鄰硝基苯酚的量。因此，實驗可設計為：將大腸桿菌（或其他細菌）置于培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再加入ONPG和一定濃度（≥MIC）的鴯鹋油，對照組不加鴯鹋油。一段時間后利用分光光度計測量鄰硝基苯酚的量，記錄并比較。【點睛】本題以實驗的形式考查微生物的培養(yǎng)與篩選，要求學生對實驗結果有一定的分析處理能力。12、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。3、PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因導入受體細胞1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程。2、常用的轉化方法：