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赤霉素處理對甜柿貯藏性的影響實證研究摘要研究了赤霉素處理對甜柿果實采后保鮮效果的影響。以采后成熟前期的次郎果實為實驗材料,在室溫下,使用300mg/L赤霉素(GA3)溶液,300mg/L無水乙醇溶液處理甜柿果實,研究了貯藏過程中與甜柿果實成熟軟化相關(guān)的生理指標和營養(yǎng)成分的變化,以闡明赤霉素(GA3)處理對甜柿果實在貯藏中保鮮效果的影響。結(jié)果表明:與對照組果實對比,赤霉素處理后的次郎果實可以有效減少果實質(zhì)量的損失,保持果實硬度,降低果實黃變程度;在生化反應(yīng)方面對保持VC的含量、延緩類胡蘿卜素的積累、維持可滴定酸的含量、減少類黃酮和總酚含量的積累、延緩CAT和POD的活性上有一定的作用。綜上所述,赤霉素處理能有效延緩了采后的次郎果實衰老進程,可以保持甜柿在采后貯藏期的果實品質(zhì)。關(guān)鍵詞:甜柿;赤霉素(GA3);貯藏品質(zhì)目錄1577 前言次郎甜柿為中國引進的日本品種,表現(xiàn)出極強的適應(yīng)性,從南至北均適宜栽培。1976年保山市首次引進甜柿樹種次郎,經(jīng)多年的篩選培育,選育出適應(yīng)保山本地的氣候條件和地理環(huán)境的保山甜柿,且不需配置授粉樹,成熟時期較早,果實豐滿肥碩,果皮色澤明亮鮮艷,口感脆甜可口;樹種的抗逆性強,環(huán)境適應(yīng)性優(yōu),產(chǎn)量豐碩。次郎甜柿在采收后于0~3℃低溫條件冷藏下,貯藏期限可達3個月以上。作為植物體內(nèi)五大內(nèi)源激素之一的赤霉素REF_Ref23511\r\h[1],在植物生長發(fā)育的各個階段都有著無法替代的調(diào)節(jié)和控制作用。在火龍果REF_Ref9121\r\h[2],南果梨REF_Ref9252\r\h[3],甜櫻桃REF_Ref9308\r\h[4],香蕉REF_Ref9379\r\h[5],枸杞REF_Ref9445\r\h[6],芒果REF_Ref9487\r\h[7],葡萄REF_Ref9530\r\h[8]等果實上的采后生理研究表明,赤霉素對采后果實的處理可以延緩果實的后熟衰老進程,對果實的采后貯藏具有良好的的保鮮作用。最近幾年,用赤霉素處理采后蔬菜、水果的保鮮貯藏方面的研究頗多,但對柿子的研究大多是像潘軍REF_Ref9575\r\h[9],朱仁勝REF_Ref9608\r\h[10]等,通過采前噴施赤霉素,探究赤霉素對柿子的生長發(fā)育及品質(zhì)形成的影響;而運用赤霉素處理的采后保鮮效果方面,付潤山REF_Ref10891\r\h[11]的實驗表明了用赤霉素處理能有效延緩柿果實在貯藏期的后熟及軟化,延長了富平尖柿的貯藏時間?,F(xiàn)今,赤霉素在柿果實采后保鮮方面研究鮮少,特別是甜柿。因此,本實驗以成熟前的次郎甜柿為材料,通過研究在常溫下赤霉素處理對次郎貯藏品質(zhì)的相關(guān)生理和生化變化的相關(guān)關(guān)系,為采后甜柿的貯藏保鮮技術(shù)提供理論支持,延長甜柿的貨架期,以獲得更高的收益。2材料與方法2.1實驗材料及儀器試驗材料為保山市隆陽區(qū)蒲縹鎮(zhèn)當年9月中下旬收獲的成熟前期的次郎甜柿。人工進行采摘,并選取沒有病蟲害,果面無機械損傷,成熟度相似,果實色澤、果形大小基本一致的柿果。在柿果的指標測定過程中需要使用的主要儀器:-18℃冰箱,日本島津UV-19OOi紫外分光光度計,TGL-20高速冷凍離心機,GY-4水果硬度計,恒溫水浴鍋,電子分析天平。2.2實驗設(shè)計選擇赤霉素化學(xué)試劑,配置成濃度300mg/L的GA溶液,再用無水乙醇配置300mg/LCK溶液。150個柿果分為三組,GA組和CK組的柿果用噴壺噴濕,放在墊了濾紙的桌面,空白對照組(Blank)不做任何處理,處理當天開始取樣,每隔三天取一次樣,分別于0d,3d,6d,9d,12d,15d對樣品進行質(zhì)量的稱重,硬度的測定,色差的對比,且每一處理每次隨機取樣,進行三個生物學(xué)重復(fù),取好的樣品放置于-18°C的冰箱中冷凍保存,以便后期的實驗。2.3指標測定及實驗步驟2.2.1生理指標測定果實重量測定:用電子分析天平進行稱量。果實色差測定:用比色卡進行比色測定。果實硬度測定:每次測定硬度時隨機取六個柿果,用GY-4水果硬度計在柿果赤道部進行測定,每個單果四面測定,結(jié)果取平均值。2.2.2生化指標測定1)Vc、可滴定酸含量的測定:可滴定酸的含量測定--酸堿滴定法,Vc的含量測定--2,6-二氯靛酚滴定法。2)利用紫外分光光度計測定總糖(蒽酮比色法),類胡蘿卜素,類黃酮,總酚的含量,以及過氧化氫酶和過氧化物酶的活性。2.2.3營養(yǎng)成分測定的實驗步驟測定VC含量:稱取10g柿果樣品,放入研缽中,加入10g偏磷酸溶液,迅速研磨成勻漿。然后稱取勻漿樣品10g,用偏磷酸溶液于100毫升容量瓶中定容并搖勻,過濾備用。準確吸取10毫升濾液置于錐形瓶中,用標定過的2,6-二氯靛酚溶液進行滴定,直至溶液呈粉紅色,且15s不褪色為滴定終點。同時進行空白試驗。測定VA含量:稱取0.5g柿果樣品,加入5毫升浸提液,30min避光浸提,12000r·min離心10min,吸取上清液到25毫升容量瓶中,再次加5毫升無水乙醇于沉淀物中,重復(fù)以上操作,直到橙紅色果肉樣品變成白色即可。最后用浸提溶劑定容,用紫外分光光度計測定提取液在450nm處的吸光值。測定可滴定酸含量:準確稱取柿果樣品10.0g,放入研缽中研磨,將磨碎的樣品轉(zhuǎn)移到100毫升容量瓶中,用蒸餾水沖洗研缽2至3次,一并轉(zhuǎn)入到容量瓶中,并用蒸餾水定容至刻度,搖勻,待靜置30min后過濾并收集濾液。吸取20毫升濾液至三角瓶中,加入2滴1%的酚酞指示劑,用已標定的氫氧化鈉溶液進行滴定反應(yīng)。滴定到溶液呈粉色,且在30s內(nèi)溶液不褪色時為滴定終點(pH=8.1~8.3),記錄氫氧化鈉滴定時的用量,進行三次平行實驗。同時以蒸餾水代替濾液進行空白對照實驗。測定類黃酮和總酚含量:準確稱取2.0g甜柿樣品,加入少量經(jīng)預(yù)冷處理的1%鹽酸-甲醇溶液,置于研缽中研磨勻漿后,轉(zhuǎn)入20毫升的刻度試管中。再用1%鹽酸-甲醇溶液沖洗研缽1至2次,一并轉(zhuǎn)移到刻度試管中,定容至刻度,搖勻后,在4℃冰箱中避光提取20min。期間需數(shù)次搖動。然后過濾并收集濾液待用。分光光度計測定時用1%鹽酸-甲醇溶液作空白調(diào)零,取濾液分別于波長280nm、325nm處測定溶液的吸光度值,重復(fù)三次。以每克樣品組織在波長280nm處吸光度值表示總酚含量,即OD280/gFW;在波長325nm處吸光度值表示類黃酮物質(zhì)含量,即OD325/gFW??偺堑臏y定:準確稱取0.5g甜柿樣品,加入約3毫升蒸餾水,置于研缽中磨成勻漿,轉(zhuǎn)入100毫升三角燒瓶中,用約12毫升的蒸餾水沖洗研缽2~3次,將洗滌液轉(zhuǎn)移到三角燒瓶中,攪拌均勻,在沸水浴中水解30min,冷卻,用蒸餾水定容至刻度線,過濾,吸取10毫升濾液置于錐形瓶中,用蒸餾水定容至100毫升,稀釋成1000倍的總糖水解液。測定還原糖的含量:吸取1毫升總糖水解液置于試管中,于冰浴中浸泡冷卻,然后加入4毫升的蒽酮試劑,在沸水浴中準確加熱10min,取出后用自來水冷卻,于波長620nm處測定吸光度值,其他條件與做標準曲線相同,計算樣品的含糖量以測得的吸光度值由標準曲線查算得出。測定過氧化氫酶活性:打開離心機電源,設(shè)定4℃進行機器預(yù)冷。準確稱取0.3g的甜柿樣品,置于研缽中,加人經(jīng)4℃下預(yù)冷的pH=7.8磷酸緩沖液7毫升后研磨成漿,在4000r/min的條件下離心15min(4℃),離心管中上清液即為CAT粗提液。取三支10毫升的樣品管,其中兩支是樣品測定管(S1、S2),一支是空白對照管(S0),按順序?qū)⑷г嚬苤幸来渭尤胍韵略噭篊AT粗提液0.2毫升、pH=7.8磷酸緩沖液1.5毫升、蒸餾水1.0毫升,先將SO試管置于100℃的水浴鍋中加熱煮沸1min,以徹底殺死酶活性并冷卻至室溫。然后三支試管一同放入25℃的水浴鍋中同時預(yù)熱,接著逐管加入0.3毫升0.1mol/L的過氧化氫溶液,每加完1管立即計時,并迅速倒入石英比色皿中,在240nm處測定吸光度值,且每隔1min讀數(shù)1次,共測定4次,待三支試管全部測定結(jié)束后,計算CAT活性。測定過氧化物酶活性:準確稱取0.3g甜柿樣品,并加入8毫升0.05mol/L磷酸緩沖液(pH=5.5)于研缽中研磨成勻漿,將所有勻漿液全部轉(zhuǎn)入到10毫升的離心管中進行離心(3000r/min,10min),離心管中上清液即POD粗提液。在試管中依次加入2.9毫升0.05mol/L磷酸緩沖液(pH=5.5)、1.0毫升2%過氧化氫溶液、1.0毫升0.05mol/L愈創(chuàng)木酚、0.1毫升粗提酶液。以經(jīng)過5min加熱煮沸的酶液為對照,反應(yīng)體系中加入酶液后,馬上在34℃的溫水浴中3min保溫反應(yīng),然后迅速稀釋成同體積大小,在470nm波長下測定吸光度值,隔1min記錄1次吸光度A470,共記錄5次,以每分鐘內(nèi)A470變化0.01為1個酶活性單位(U)。3結(jié)果及分析3.1赤霉素處理對次郎生理變化的影響3.1.1對柿果重量的影響由圖1可見,隨著在常溫下貯藏時間的延長,次郎果實的重量呈現(xiàn)出下降的趨勢。采后的甜柿經(jīng)過的GA、CK、Blank三個處理后,隨著貯藏時間的推移,次郎甜柿的質(zhì)量都呈現(xiàn)下降趨勢,但GA組的質(zhì)量下降速度明顯低于CK組和Blank組,但無明顯差異性。說明采后GA處理能對次郎果實質(zhì)量隨時間的延長而降低有抑制作用。圖1赤霉素處理對次郎質(zhì)量的影響圖1赤霉素處理對次郎質(zhì)量的影響3.1.2對柿果硬度的影響能夠反映果實品質(zhì)和貯藏性的重要指標之一是果實硬度。隨著貯藏時間的延長,甜柿果實在呼吸代謝作用下,甜柿硬度呈下降趨勢,果肉軟化,儲藏性能下降。由圖2可見,其中,CK組和Blank組的果實硬度下降比較快,從圖中可以看出CK組和Blank組的硬度與GA組相比,果實硬度明顯低于經(jīng)赤霉素處理的GA組,各處理之間無明顯差異。結(jié)果表明,赤霉素處理對甜柿果實保持硬度有良好的效果。圖2赤霉素處理對次郎硬度的影響圖2赤霉素處理對次郎硬度的影響3.1.3對柿果色差的影響次郎甜柿在室溫下貯藏時葉綠素會隨時間的推延而不斷降解,果皮顏色會漸漸轉(zhuǎn)黃加深,果蒂也會褐變干枯。由圖3可見,各處理組的甜柿果皮色差都在不斷上升,果皮轉(zhuǎn)黃度不斷增大,但經(jīng)赤霉素處理的GA組果實色差明顯低于CK和Blank兩組,果皮轉(zhuǎn)黃速度也低于另外兩組。可見,赤霉素處理能降低次郎果實果皮轉(zhuǎn)黃的速度,提高果實的保鮮率。作為植物內(nèi)源激素之一的赤霉素具有生長調(diào)節(jié)作用,它具有很強的生物活性,在抑制果蔬色澤改變上,青花菜REF_Ref8743\r\h[12]、辣椒REF_Ref8801\r\h[13]上的研究表明,赤霉素對延緩葉綠素的分解起作用,與本實驗結(jié)果相似。圖3赤霉素處理對次郎色差的影響圖3赤霉素處理對次郎色差的影響3.2赤霉素處理對次郎生化變化的影響3.2.1赤霉素處理對甜柿VC含量的影響次郎甜柿富含豐富的維生素C,而維生素C是人類所需營養(yǎng)中最重要的一種,且比普通水果高出一至兩倍。由圖4可見,三個處理組果實的維生素C含量在貯藏期間均呈現(xiàn)下降的趨勢,其中GA組的維生素C含量最高,其他兩個處理的維生素C含量較低。相對于GA組,CK和Blank兩組的維生素C含量下降得的較快,根據(jù)在香蕉REF_Ref9379\r\h[5],甜櫻桃REF_Ref9308\r\h[4]上的研究結(jié)果,表明赤霉素處理可以在一定程度上保持采后甜柿果實貯藏過程中的維生素C的含量,保證貯藏的果實品質(zhì)。圖圖4赤霉素處理對次郎維生素C的影響3.1.2赤霉素處理對甜柿類胡蘿卜素含量的影響果實所表現(xiàn)出的色澤是由底色部分及表色部分構(gòu)成,底色主要由葉綠素、類胡蘿卜素等決定的,通常表現(xiàn)為綠色或黃色;表色主要決定于花青素,一般表現(xiàn)為紅色。隨著次郎果實的發(fā)育成熟,葉綠素逐漸降解,類胡蘿卜素、花青素逐漸積累成為優(yōu)勢底色。隨著貯藏時間的延長,各處理果皮類胡蘿卜素含量總體呈上升趨勢如圖5所見,三個處理組的類胡蘿卜素都呈上升的趨勢,但其中GA組的類胡蘿卜素相較于CK組和Blank組上升速度趨勢較低,表明采后赤霉素處理對果實內(nèi)部類胡蘿卜的生成起抑制作用,延緩了類胡蘿卜素的積累,致使果實轉(zhuǎn)黃速度慢,推遲了果實的成熟衰老。另一方面表明采后赤霉素處理對果實貯藏有明顯的保鮮效果。圖5圖5赤霉素處理對次郎類胡蘿卜素的影響3.1.3赤霉素處理對甜柿可滴定酸含量的影響次郎果實是甜柿品種,果肉內(nèi)的可滴定酸含量會隨果實的生長發(fā)育而不斷降低,采后的次郎果實在貯藏過程中,果實內(nèi)部所含有機酸作為呼吸底物會被逐漸消耗,有一部分有機酸會轉(zhuǎn)化為糖類。由圖6可見,果實內(nèi)的可滴定酸含量隨貯藏期延長會逐漸減少,呈明顯的下降趨勢,但GA組的含酸量明顯高于CK組和Blank組,由此可看出赤霉素處理對果實內(nèi)部有機酸的含量具有保持作用。圖5赤霉素處理對次郎可滴定酸圖5赤霉素處理對次郎可滴定酸的影響3.1.4赤霉素處理對甜柿類黃酮和總酚含量的影響植物體內(nèi)存在著大量酚類物質(zhì),這些酚類物質(zhì)是重要的次級代謝物,一方面它具有一定的抗氧化能力,可以修復(fù)自身傷害,另一方面作為酶促褐變反應(yīng)的底物,參與酶促褐變反應(yīng)。圖6和圖7所示為赤霉素處理對甜柿類黃酮和總酚含量的影響。如圖6所示,三個處理組的果實中類黃酮含量隨著貯藏時間的延長而下降,總體呈下降趨勢,各組間差異不顯著,但類黃酮的含量CK>Blank>GA。圖7所示三組處理總酚含量總體呈下降趨勢,各組間差異不顯著,總酚含量Blank>CK>GA。根據(jù)圖6和圖7表明赤霉素處理能有效減輕甜柿中類黃酮和總酚含量的積累。圖圖6赤霉素處理對次郎類黃酮含量的影響圖圖7赤霉素處理對次郎可總酚含量的影響3.1.5赤霉素處理對甜柿總糖含量的影響總糖主要指具有還原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在測定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖,麥芽糖以及可能部分水解的淀粉。如圖8所見,三個處理組的果實總糖含量有所差異,GA組的總糖含量總體呈一個上升的趨勢,在第12天時出現(xiàn)最大值;CK組的總糖含量在第9天出現(xiàn)最大值,接著總糖含量呈下降趨勢;Blank組的總糖含量在第6天出現(xiàn)最大值,其后一直處于下降趨勢。由此可見赤霉素處理能有效促進次郎果實可溶性總糖的積累。圖圖8赤霉素處理對次郎總糖含量的影響3.1.6赤霉素處理對甜柿過氧化氫酶和過氧化氫酶含量的影響SOD和CAT是植物抗氧化防御系統(tǒng)中重要的兩個抗氧化酶,SOD將超氧自由基轉(zhuǎn)化成H2O2,而CAT將H2O2分解成水和氧氣,從而減輕活性氧損傷。過氧化氫酶在植物所有組織中無處不在,其活性與植物代謝的強弱、抗寒性、抗病性具有一定的關(guān)系。由圖9所見,赤霉素處理的GA組CAT活性隨時間的延長不斷呈下降趨勢;CK組和Blank組則呈現(xiàn)一個相反的現(xiàn)象,第6天的時候,CK組達到最小值,Blank組則是達到最大值;第12天的時候CK組下降,Blank組則上升。李夫慶的不同濃度赤霉素對櫻桃果實CAT活性的研究,表明高濃度的赤霉素(150mg/L)能有效延緩CAT活性高峰的出現(xiàn)并會抑制后期的下降,據(jù)圖看出CK組的活性高峰在第12天,Blank組的活性高峰在第六天,推測GA組的活性高峰可能會出現(xiàn)在第15天,而高濃度赤霉素(200mg/L)對CAT活性起到延緩作用。POD是苯丙烷代謝途徑中的兩個末端氧化酶之一,能將酚類物質(zhì)氧化成褐色物質(zhì)。如圖10所見,赤霉素處理的GA組POD活性明顯高于CK組和Blank組,且三個處理組的POD活性都呈現(xiàn)下降趨勢,POD活性GA>Blank>CK。圖中GA組POD活性在0至3天內(nèi)緩慢上升,第三天以后呈緩慢下降趨勢,與其它兩組相比赤霉素處理的GA組的POD的活性受到延緩作用,保持了POD的活性。圖圖9赤霉素處理對次郎可CAT的影響圖10圖10赤霉素處理對次郎POD的影響4結(jié)語植物內(nèi)源激素獨立或協(xié)同的方式調(diào)節(jié)植物的生長和發(fā)育,這種調(diào)節(jié)可通過使用外源激素或人工合成植物生長調(diào)節(jié)劑來改變植物體內(nèi)的內(nèi)源激素,進而使得調(diào)控果實的生長發(fā)育和品質(zhì)形成成為一種可能REF_Ref5793\r\h[14]REF_Ref5838\r\h[15]REF_Ref5845\r\h[16]。內(nèi)源植物激素中的赤霉素,對許多果蔬都有延緩衰老的作用。在火龍果、南李果、芒果等果實上的研究表明,經(jīng)赤霉素處理后能夠明顯的抑制了果實貯藏期的呼吸強度、延緩果實VC含量的降低,推延常溫貯藏時果皮轉(zhuǎn)黃程度,減緩果實的軟化速度,延緩果實成熟進程,有效地保持在采后貯藏期的果實品質(zhì)。本實驗表明了赤霉素處理對次郎果實生理變化中的質(zhì)量減少、硬度的降低和轉(zhuǎn)黃得快慢有一定的延緩作用;在生化反應(yīng)中對保持VC的含量、延緩類胡蘿卜素的積累、保持可滴定酸的含量、減輕類黃酮和總酚含量的積累、延緩CAT和POD的活性有一定的作用。赤霉素所具有很強的生物活性REF_Ref8853\r\h[17]在本實驗中得到很好的驗證,結(jié)果證實了赤霉素處理對提高次郎果實的貯藏品質(zhì)有較好的效果,能使甜柿的鮮食品質(zhì)處于較高的水平。赤霉素溶液用于采后次郎果實保鮮有著較好地效果,使用藥劑用量小、成本低、操作簡單且方便,能有效延長果實貯藏期,使得果實長久新鮮,甜脆可口,還能讓甜柿錯峰上市,不會發(fā)生柿果集中上市而引發(fā)供大于求的現(xiàn)象,致使價格低廉,收益差。經(jīng)赤霉素保鮮處理后可有效延長果實貨架期,以提高次郎的售價,提高果農(nóng)種植積極性。保山學(xué)院本科畢業(yè)論文(設(shè)計)保山學(xué)院本科畢業(yè)論文(設(shè)計)參考文獻曾鳳,郭子娟,李雯.赤霉素對臺農(nóng)芒果保鮮效果的研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,43(05):112-117.巴良杰,羅冬蘭.赤霉素處理對火龍果貯藏品質(zhì)的影響[J].包裝工程,2019,40(13):12-17.呂靜祎,商馥蘭,張夢媛,葛永紅,勵建榮,李燦嬰,孟坤.赤霉素處理對南果梨貯藏品質(zhì)的影響[J].食品工業(yè)科技,2017,38(24):282-286.李夫慶,張子德,李素玲,解茂蕾,趙叢枝,王巖.赤霉素(GA_3)處理對甜櫻桃果實品質(zhì)
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