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腸桿菌科及檢驗(yàn)
?考點(diǎn)
>概述
概念;命名與分類原則;共同特點(diǎn);自然與人體內(nèi)的分布;微生物學(xué)檢查方法;臨床意義。
>埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、變形桿菌屬、耶爾森菌屬及其他腸桿菌科細(xì)菌。
生物學(xué)性狀;微生物學(xué)檢驗(yàn);臨床意義。
【內(nèi)容講解】
一、概述(共性)
腸桿菌科是由多個(gè)菌屬組成,G桿菌,牛.物學(xué)性狀相似。
大多數(shù)腸道桿菌屬于正常菌群。當(dāng)機(jī)體免疫力降低或侵入腸道外組織時(shí)成為條件致病菌而引起疾病。
部分為致病性細(xì)菌。
(-)分類
腸桿菌科細(xì)菌的種類繁多。主要根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)、生化反應(yīng)、抗原性質(zhì)以及核酸相關(guān)性進(jìn)行分類。根
據(jù)《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》(1984年)將腸桿菌科的細(xì)菌分為20個(gè)屬即埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、
枸椽酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬、哈夫尼亞菌屬、愛德華菌屬、普羅威登斯菌屬、變形
桿菌屬、摩根菌屬、耶爾森菌屬等。
(-)生物學(xué)特性
1.形態(tài)與染色
G)桿菌,大小為(1.0?6.0)ymX(0.3~1.0)ym?
多數(shù)有周鞭毛(除志賀菌屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和EIEC),無芽胞,少數(shù)菌屬細(xì)菌可形成莢
膜。
2.培養(yǎng)
需氧或兼性厭氧;營(yíng)養(yǎng)要求不高;
普皿和麥康凱培養(yǎng)基:中等大小、表面光滑的菌落;
液體培養(yǎng)基:混濁生長(zhǎng)。
3.生化反應(yīng)
發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、或產(chǎn)酸產(chǎn)氣;
乳糖發(fā)酵試驗(yàn):非致病菌+,致病菌-(除外變形桿菌)。觸酶陽性;氧化酣陰性:硝酸鹽還原為亞
硝酸鹽。
4.抗原構(gòu)造
>菌體(0)抗原]
>}腸桿菌科血清學(xué)分群和分型的依據(jù)
>鞭毛(H)抗原J
>表面抗原(如Vi抗原、K抗原):包繞在0抗原外的不耐熱的多糖抗原,可阻斷0抗原與相應(yīng)抗體
之間的反應(yīng),加熱處理能破壞其阻斷作用。
5.變異
>菌落S?R變異
A鞭毛H?。變異
>耐藥性變異
>生化反應(yīng)性質(zhì)的改變
6.抵抗力
不強(qiáng)。加熱60℃,30分鐘即被殺死。不耐干燥,對(duì)一般化學(xué)消毒劑敏感。對(duì)低溫有耐受力,能耐膽鹽。
7.腸桿菌科的初步分類
苯丙氨酸脫氨酶
變形桿菌屬葡萄糖酸鹽試驗(yàn)
普羅威登斯菌屬(+)(-)
摩根菌屬
克雷伯菌屬埃希菌屬
腸桿菌屬志賀菌屬
沙雷菌屬沙門菌屬
哈夫尼亞菌屬枸檬酸桿菌屬
愛德華菌屬
耶爾森菌屬
(三)致病性
1.致病性腸道桿菌:以腸內(nèi)感染為主,腹瀉為共顯癥狀,引起急慢性腸道感染、食物中毒、旅游者腹
瀉及腸熱癥等。
2.條件致病菌:為醫(yī)院感染主要病原菌,出現(xiàn)移位感染。大腸埃希菌、變形桿菌及克雷伯菌等條件致
病菌可引起泌尿生殖道、傷口等部位的感染。
(四)微生物檢驗(yàn)
1.分離培養(yǎng)
糞便或肛拭標(biāo)本一增菌一腸道菌選擇培養(yǎng)基
?
血、尿或膝汁等一肉湯增菌一血瓊脂培養(yǎng)基J
—?純菌(菌落)—?結(jié)合革蘭染色及氧化的反應(yīng)結(jié)果作
進(jìn)一步鑒定
2.鑒定
(1)初步鑒定:
①確定腸桿菌科的細(xì)菌,應(yīng)采用葡萄糖氧化-發(fā)酵試驗(yàn)及氧化酶試驗(yàn)與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別;
②腸桿菌科細(xì)菌的分群,多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn),將腸桿菌科的細(xì)菌分為三個(gè)類群;
③選擇生化反應(yīng)進(jìn)行屬種鑒別。KIA和MIU將細(xì)菌初步定屬。
(2)最后鑒定:
根據(jù)生化反應(yīng)的結(jié)果初步定屬、種,再用診斷血清做凝集反應(yīng)才能作出最后判斷。
二、埃希菌屬
5個(gè)種:大腸埃希菌、蟒螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。
臨床最常見的是大腸埃希菌。
(-)生物學(xué)性狀
1.形態(tài)與染色
G,短桿菌,(1.0~3.0)umX(0.4-0.7)u多數(shù)有周鞭毛,有菌毛,有莢膜或微莢膜。
2.培養(yǎng)特性
>兼性厭氧菌;營(yíng)養(yǎng)要求不高。
>普通營(yíng)養(yǎng)肉湯:渾濁生長(zhǎng)。
>普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂:圓形,凸起,邊緣整齊,灰白色的S型菌落,直徑2?3mm。
>血瓊脂平板:少數(shù)菌株產(chǎn)生溶血環(huán)。
>伊紅亞甲藍(lán)瓊脂:菌落呈藍(lán)紫色并有金屬光澤(發(fā)酵乳糖)。
>麥康凱和SS瓊脂:粉紅色菌落。
3.生化反應(yīng)
>發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣,分解蔗糖因菌株而異,尿素酶試驗(yàn)陰性。
>口弓I口朵、甲基紅、V-P、枸檬酸鹽試驗(yàn)(IMViC試驗(yàn))為++--。
>克氏雙糖鐵瓊脂(KIA):斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)氣,H2s(-)。
>動(dòng)力-口引噪-尿素(MIU)培養(yǎng)基為++
4.抗原結(jié)構(gòu)
>菌體抗原(0)、表面抗原(K)和鞭毛抗原(H)三種構(gòu)成。
>現(xiàn)已知有171種??乖?,1抗種K抗原和56種H抗原。
>一個(gè)菌株的抗原類型由特殊的0、K和H抗原的代碼表示,其血清型別的方式是按0:K:H排列,例
如0111:K58:H2?
(二)致病性
致病物質(zhì):主要是侵襲力、內(nèi)毒素、腸毒素等。
所致疾病:
1.腸道外感染以泌尿系統(tǒng)感染常見,還有菌血癥,膽囊炎,腹腔膿腫。
2.腸道感染(致病性大腸埃希菌)
腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(魚區(qū)):引起霍亂樣腸毒素腹瀉(蟲遑)。
腸致病型大腸埃希菌(些):主要引起嬰兒腹瀉。
腸侵襲型大腸埃希菌(魚二):可侵入結(jié)腸黏膜上皮,引起痢疾樣腹瀉(黏液膿血便)。
腸出血型大腸埃希菌(奧匹):又稱產(chǎn)志賀樣毒素(這)大腸埃希菌(SLTEC或UTEC),其中0157:
H7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征(曄)。
臨床特征為嚴(yán)重的腹痛、痙攣,反復(fù)出血性腹瀉,伴發(fā)熱、嘔吐等。嚴(yán)重者可發(fā)展為急性腎衰竭。
腸黏附型大腸埃希菌(EAggEC):新近報(bào)道能引起腹瀉。
3.CDC將大腸埃希菌0157:H7列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目
>在北美許多地區(qū),0157;H7占腸道分離病原菌的第二或第三位,是從血便中分離到的最常見的病原
菌。
>6、7、8三個(gè)月0157:H7感染的發(fā)生率最高。
>0157是4歲以下兒童急性腎衰的主要病原菌。
(三)微生物檢驗(yàn)
1.標(biāo)本采集
>腸道感染可采集糞便;
A腸道外感染可根據(jù)臨床感染情況采集中段尿液、血液、膿汁、膽汁、腦脊液、痰、分泌液等。
2.檢驗(yàn)方法及鑒定
膿液增菌培養(yǎng)物糞便
"血平板弱選擇培養(yǎng)基
仞報(bào):[]
形態(tài)、染色、性狀J
純培養(yǎng)(菌落)
初步鑒定:
KIA:A/A或K/A、產(chǎn)氣或不
鑒定為大腸埃希菌<—產(chǎn)氣、H2s一
JMIU:T-或一、十、一,
IMViC:+、十、一、一
最后鑒定
最后鑒定:
>補(bǔ)充系列生化試驗(yàn)
>致病性大腸埃希菌
□無動(dòng)力的不發(fā)酵乳糖株,應(yīng)與志賀菌相鑒別
.鑒別試驗(yàn):醋酸鈉、葡萄糖鉉、粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗(yàn)“
?大腸埃希菌均為陽性,而志賀菌均為陰性。
□血清學(xué)試驗(yàn)
三、志賀菌屬
人類細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌,通稱痢疾桿菌。
>根據(jù)生化反應(yīng)與血清學(xué)試驗(yàn)該屬細(xì)菌分為痢疾、福氏、鮑氏和宋內(nèi)志賀菌四群。
>我國(guó)以福氏和宋內(nèi)志賀菌引起的菌痢最為常見。
(-)生物學(xué)特性
1.形態(tài)與染色
G,短小桿菌,(2?3)UmX(0.5?0.7)um,無莢膜,無芽胞,無鞭毛,有菌毛。
2.培養(yǎng)特性
需氧或兼性厭氧;
液體培養(yǎng)基:呈混濁生長(zhǎng);
普通瓊脂平板和SS培養(yǎng)基:中等大小、半透明的光滑型菌落(宋內(nèi)志賀菌可形成扁平、粗糙的菌落)。
3.生化反應(yīng)
氧化酶試驗(yàn)陰性,動(dòng)力陰性,不產(chǎn)生賴氨酸脫竣酶;
KIA:K/A,H2S(-);
IMViC:-、+、-、
志賀菌屬的細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不分解乳糖(宋內(nèi)志賀菌可遲緩分解乳糖),口弓I味試驗(yàn)陰性,
H*陰性,MR試驗(yàn)陽性,VP試驗(yàn)陰性,不產(chǎn)生賴氨酸脫竣酶,不能利用檸檬酸鹽,氧化酶試驗(yàn)陰性,動(dòng)力
陰性。
4.抗原結(jié)構(gòu)
>只有0抗原而無鞭毛抗原,個(gè)別菌型及新分離菌株有K抗原。
>??乖秩禾禺愋钥乖托吞禺愋钥乖瓋深?。
>根據(jù)抗原構(gòu)造可將志賀菌分為四個(gè)血清群,40余種血清型(包括亞型)。K抗原存在時(shí)能阻斷???/p>
原與相應(yīng)抗血清的凝集作用。加熱100C、60分鐘可消除K抗原對(duì)0抗原的阻斷作用,在一定條件下可產(chǎn)
生S-R變異及耐藥性變異。
(二)臨床意義
致病物質(zhì):
侵襲力:菌毛粘附于腸粘膜上皮細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)吞。
內(nèi)毒素:破壞腸粘膜;腸壁通透性:腸壁植物神經(jīng)——腹痛,腹瀉,里急后重,粘液膿血便。
外毒素(志賀毒素,ST):腸毒素活性;細(xì)胞毒活性;神經(jīng)毒性。
所致疾病:細(xì)菌性痢疾,簡(jiǎn)稱菌痢。
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
傳染源為病人和帶菌者,經(jīng)糞口傳播。
(三)微生物檢驗(yàn)
1.標(biāo)本采集
盡可能在發(fā)病早期及治療前采集新鮮糞便,選擇膿血便或黏液便,必要時(shí)可用肛拭子采集。
2.檢驗(yàn)方法及鑒定
糞便肛拭標(biāo)本
I
SS平板中國(guó)藍(lán)。r麥康凱平板
||
初步鑒定:
多價(jià)血清凝集試驗(yàn)
KIA:K/A^產(chǎn)氣-/+、用S--志賀菌屬
MIU:-、+/-、-
氧化酶(一)
最后鑒定
最后鑒定:
增加生化反應(yīng)
志賀菌屬的診斷血清作群型鑒定
1
鑒別
鑒別:
動(dòng)力乳糖靛基質(zhì)賴氨酸黏液酸、醋酸鹽、枸檬酸鹽
志賀菌----+
大腸埃希菌++++-
動(dòng)力氧化酶試驗(yàn)
志賀菌--
類志賀鄰單胞菌++
動(dòng)力硫化氫A-F0診斷血清
志賀菌---
傷寒沙門菌+++
(四)防治原則
>人工主動(dòng)免疫用于預(yù)防目前尚不理想。
>預(yù)防的主要措施是防止進(jìn)食被污染的食品、飲料及水,及早發(fā)現(xiàn)及早積極治療攜帶者。
>治療細(xì)菌性痢疾一般首選氟嗓諾酮類抗生素。
(五)臨床意義
致病因素為侵襲力、內(nèi)毒素及外毒素(志賀菌A群/I型和n型產(chǎn)生志賀毒素,具有細(xì)胞毒、腸毒素、
神經(jīng)毒)??梢鹑祟惣?xì)菌性痢疾,其中可分急性、慢性兩種,小兒易引起急性中毒性痢疾。慢性菌痢可
人-人傳播,污染水和食物可引起暴發(fā)流行。
四、沙門菌屬
(-)生物學(xué)性狀
1.形態(tài)與染色
G,直桿菌,(0.7~1.5)umX(2.0-5.0)um,無芽胞,無莢膜,周鞭毛(除雞沙門菌),多數(shù)有
菌毛。
2.培養(yǎng)特性
營(yíng)養(yǎng)要求不高;
液體培養(yǎng)基:均勻混濁生長(zhǎng);
SS瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基:約2?4mm的透明或半透明菌落,對(duì)膽鹽耐受。產(chǎn)112s者在SS瓊脂上形
成黑色中心菌落。
3.生化反應(yīng)
不能發(fā)酵乳糖(除亞利桑那菌),不產(chǎn)生靛基質(zhì),不分解尿素,甲基紅反應(yīng)陽性,V-P試驗(yàn)陰性。大多
數(shù)菌株產(chǎn)生H/S,發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣(傷寒沙門菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣)。
4.抗原結(jié)構(gòu)
>0抗原:有58種,以阿拉伯?dāng)?shù)字依次標(biāo)記。
>H抗原:H抗原是定型的依據(jù)。H抗原有兩相,第一相為特異性抗原,用a、b、c...表示;第二相
為共同抗原,用1、2、3...表示。
>表面抗原:已證實(shí)沙門菌屬有Vi、M和5抗原三種。
5.變異性
>S?R變異
>H?0變異
>相位變異:具有雙相H抗原(第I相為特異相,第n相為非特異相)的沙門菌變成只有其中某一相
H抗原的單相菌,稱相位變異。
>V?w變異:失去全部Vi抗原的變異。
(二)致病性
致病因素:侵襲力、內(nèi)毒素和腸毒素。
所致疾?。?/p>
1.腸熱癥即傷寒與副傷寒病。由傷寒與副傷寒沙門菌所引起的慢性發(fā)熱癥狀。為法定傳染病之一。
2.食物中毒
3.慢性腸炎
4.敗血癥
5.沙門菌的局部感染如頸部、腰部等。
全身疼痛、不適、
發(fā)熱澗I驅(qū)沖
胸導(dǎo)管
{湃長(zhǎng)期)
肝、脾、腎
及膽囊等
腸熱癥吞噬細(xì)胞吞噬
:瑟裁|用腐壁淋巴組織|
膽囊
W.
菌血衣
,V2-3W
1(典型病例病程為3YW)搏陵高熱、肝脾腫
大、全身中毒、攻境
:并發(fā)癥:胸穿孔、血栓性靜腺炎、膽重炎:落
F省病的第1N)
(三)微生物檢驗(yàn)
1.標(biāo)本采集
根據(jù)不同疾病采取不同的標(biāo)本進(jìn)行分離與培養(yǎng)。
腸熱癥的第一、二周采血液,第二、三周采糞便與尿液。整個(gè)病程中骨髓分離細(xì)菌陽性率較高。
食物中毒采集食物與糞便。
2.檢查方法及鑒定
糞便血液骨髓尿液
I
SSor麥康凱平板含0.5%膽鹽肉湯硫磺酸鹽肉湯
或葡萄糠肉湯|
血平板和腸道鑒別培養(yǎng)基
_____________)
初步鑒定:
KIA:K/A、產(chǎn)氣+/-、H2S+
/-,MIU:+、-、+,
上鑒定為沙門菌屬
氧化酶、觸酶+,硝酸鹽還原
十,沙門菌多價(jià)血清陽性
最后鑒定:
沙門菌血清學(xué)鑒定主要借助于沙門菌0抗原多價(jià)血清與0、H、Vi抗原的單價(jià)因子血清。
(三)微生物檢驗(yàn)
2.檢查方法及鑒定
血清學(xué)診斷一一肥達(dá)試驗(yàn)
用已知的傷寒沙門菌0、H抗原,副傷寒甲、乙H抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集試驗(yàn),以檢測(cè)患者
血清中抗體的含量,來判斷機(jī)體是否受沙門菌感染而導(dǎo)致腸熱癥并判別沙門菌的種類。
(四)防治原則
預(yù)防沙門菌屬細(xì)菌主要措施:
加強(qiáng)飲食衛(wèi)生,防止污染食品及水源經(jīng)口感染,攜帶者的積極治療,皮下注射死菌苗或口服減毒活菌
苗。
臨床治療:
可選擇的抗生素有氯霉素、氟瞳諾酮類、氨茉西林、復(fù)方磺胺甲惡哩、三代頭抱等。
五、變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬及摩根菌屬
這三個(gè)屬的細(xì)菌為腸道寄居的正常菌群,在一定條件下能引起各種感染,也是醫(yī)源性感染的重要條件
致病菌。
(-)生物學(xué)特性
1.形態(tài)與染色
G,桿菌,兩端鈍圓,有明顯的多形性,呈球狀或絲狀;周身鞭毛(摩根菌屬的部分菌株在30℃以上
培養(yǎng)條件下不形成鞭毛),無芽胞,無莢膜。
2.培養(yǎng)特性
需氧或兼性厭氧,營(yíng)養(yǎng)要求不高,生長(zhǎng)溫度10?43℃。
營(yíng)養(yǎng)瓊脂和血瓊脂平板:普通變形桿菌和奇異變形桿菌的大多數(shù)菌株呈遷徙擴(kuò)散生長(zhǎng)現(xiàn)象。產(chǎn)黏變形
桿菌具有產(chǎn)生黏液狀薄膜層的能力及溶血性質(zhì)。
普羅威登斯菌和摩根菌無遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象。
含有膽鹽的培養(yǎng)基:菌落呈扁平、圓形、半透明。
含有鐵或鉛離子的培養(yǎng)基:產(chǎn)硫化氫菌株菌落中心呈黑色0
SS培養(yǎng)基:與沙門菌、志賀菌相似的菌落特征。
液體培養(yǎng)基:迅速生長(zhǎng),早期培養(yǎng)物呈混濁,有部分沉淀。
3.生化反應(yīng)三屬菌共同特點(diǎn)是氧化酶陰性,苯內(nèi)氨酸脫氨酶陽性的革蘭陰性桿菌。
屬間鑒別:
變形桿菌屬普羅威登斯菌屬摩根菌屬
遷徙生長(zhǎng)+--
硫化氫產(chǎn)生+--
液化明膠+--
脂酶+--
鳥氨酸脫竣酶--+
枸椽酸鹽利用-+-
變形桿菌屬的種鑒別:
普通變形桿菌奇異變形桿菌產(chǎn)黏變形桿菌
靛基質(zhì)+--
麥芽糖+一+
鳥氨酸脫竣酶-+一
普羅威登斯菌屬的種鑒別:
產(chǎn)堿普羅威登斯菌斯氏普羅威登斯菌雷氏普羅威登斯菌
胭酶--/++
草糖-+-
側(cè)金盞花醇+-+
(二)致病性
1.變形桿菌屬
普通變形桿菌和奇異變形桿菌引起尿道、創(chuàng)傷、燒傷的感染。普通變形桿菌還可引起多種感染及食物
中毒;奇異變形桿菌還可引起嬰幼兒腸炎。產(chǎn)黏變形桿菌尚無引起人類感染的報(bào)道。
外-斐(Weil-Felix)反應(yīng):普通變形桿菌0X19、0X2、0兄的菌體抗原與某些立克次體有共同抗原,是
用以診斷某些立克次體病的依據(jù)。
2.普羅威登斯菌屬本屬菌可引起燒傷、創(chuàng)傷與尿道感染。
3.摩根菌屬本屬細(xì)菌為醫(yī)源性感染的重要病原菌之一。
(三)微生物檢驗(yàn)
1.標(biāo)本采集采集尿液、膿汁、傷口分泌物及嬰兒糞便等。
2.檢驗(yàn)方法及鑒定
(1)直接涂片
(2)分離培養(yǎng):接種于血瓊脂平板和麥康凱或伊紅亞甲藍(lán)(EMB)瓊脂平板;或SS瓊脂和麥康凱或EMB
瓊脂平板上。
變形桿菌屬在血瓊脂上呈遷徙生長(zhǎng),在腸道菌選擇培養(yǎng)基上形成不發(fā)酵乳糖菌落,在SS瓊脂上常為有
黑色中心的菌落。
(3)鑒定
六、耶爾森菌屬
耶爾森菌屬包括11個(gè)種;
其中鼠疫耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森菌與人類致病有關(guān)。
(-)鼠疫耶爾森菌
(-)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
(三)假結(jié)核耶爾森菌
(-)鼠疫耶爾森菌
俗稱鼠疫桿菌,是烈性傳染病鼠疫的病原菌。
鼠疫是自然疫源性傳染病,通過直接接觸染疫動(dòng)物或節(jié)肢動(dòng)物叮咬而感染。
1.生物學(xué)特性
(1)形態(tài)與染色:
G,桿菌,短而粗,兩端鈍圓,兩極濃染,(1.0?2.0)umX(0.5?0.7)nm()
有莢膜,無鞭毛,無芽胞。
(2)培養(yǎng)特性:
>需氧和兼性厭氧。最適生長(zhǎng)溫度是28?30℃,培養(yǎng)基最適pH為6.9?7.1。
>培養(yǎng)16?18h,用顯微鏡觀察可見一層形狀不一,淺灰色小菌落,這是鼠疫耶爾森菌培養(yǎng)初期的菌
落特征(鑒定意義)。
>培養(yǎng)24?48h后可形成直徑0.1?0.2mm,圓形,中心突出,透明的淺灰色小菌落。
>液體培養(yǎng)基:形成絮狀沉淀和菌膜。底部絮狀沉淀堆積呈“鐘乳石”狀。
(3)生化反應(yīng):
KIA:K(A)/A,H2s(-)
MIU:-、-、-
2.微生物檢驗(yàn)
標(biāo)本采集:主要采集血液、痰和淋巴結(jié)穿刺液。
檢驗(yàn)方法及鑒定:
注:鼠疫耶爾森菌為甲類病原菌,傳染性極強(qiáng),故應(yīng)嚴(yán)格遵守檢驗(yàn)操作規(guī)程,要求實(shí)驗(yàn)室有隔離設(shè)施,
防鼠、防蚤和嚴(yán)密的個(gè)人防護(hù)措施;用過的實(shí)驗(yàn)器材及物品隨時(shí)消毒處理。
直接涂片檢查;分離培養(yǎng);鑒定;最后鑒定(①噬菌體裂解試驗(yàn);②動(dòng)物試驗(yàn);③免疫學(xué)方法)。
(二)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
1.生物學(xué)性狀
(1)形態(tài)與染色
菌體大小為(1.0~2.0)umX(0.5-1.0)um,25℃培養(yǎng)時(shí)形成周鞭毛,呈翻滾旋轉(zhuǎn)狀運(yùn)動(dòng),37c
培養(yǎng)無動(dòng)力,無芽胞,無莢膜的革蘭陰性球桿菌。
(2)培養(yǎng)特性
>需氧或兼性厭氧,4?40℃均能生長(zhǎng),最適生長(zhǎng)溫度為20?28℃。
>血瓊脂平板上,形成直徑為1?2mm,圓形光滑,凸起的菌落。
>麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng),形成不發(fā)酵乳糖的無色、透明或半透明、扁平、較小的菌落。
>SS瓊脂板上生長(zhǎng)不良。
>液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng),液體表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。
(3)生化反應(yīng):
葡萄糖和蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,絕大多數(shù)菌株不發(fā)酵乳糖,硫化氫陰性,版酶陽性,靛基質(zhì)不定。VP試驗(yàn)
25℃陽性,37℃陰性,鳥氨酸脫粉酶陽性。
2.致病性
(1)致病因素:侵襲力和腸毒素。
(2)所致疾?。喝诵蠊不疾?,動(dòng)物感染后多無癥狀,通過消化道傳播引起人類腸道感染性疾病。
小腸結(jié)腸炎、末端回腸炎、胃腸炎、闌尾炎和腸系膜淋巴結(jié)炎。除腸道感染外尚可發(fā)生敗血癥,結(jié)節(jié)
性紅斑及關(guān)節(jié)炎等。
3.微生物檢驗(yàn)
(1)標(biāo)本采集:標(biāo)本來自被檢者糞便、血液、尿液、食物或臟器組織等。
(2)檢驗(yàn)方法及鑒定:
1)分離培養(yǎng):糞便標(biāo)本可直接接種于麥康凱、NyE(耶爾森選擇性瓊脂)或SS瓊脂。
2)鑒定:
菌落形態(tài)―一G-—氧化前(-)一初步鑒定―一血清學(xué)鑒定
30℃以下動(dòng)力(+)
服酶(+)
(三)假結(jié)核耶爾森菌
>嚙齒動(dòng)物家畜和禽類致病,并通過污染食物導(dǎo)致人類感染。人類感染少見,偶見腸道感染及腸系膜
淋巴結(jié)炎。
>菌體呈球形或短桿形,兩端濃染。25℃培養(yǎng)有周鞭毛,有動(dòng)力,37℃培養(yǎng)無動(dòng)力。
>兼性厭氧,最適生長(zhǎng)溫度30℃,pH6.0~8.0。
>菌落:圓形,中心凸起,呈顆粒狀,灰黃色,半透明的菌落。
>血瓊脂平板上不溶血,SS瓊脂上不生長(zhǎng),能在含膽鹽培養(yǎng)基或麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。
>在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長(zhǎng)者為光滑型菌株,沉淀生長(zhǎng)為粗糙型菌株。
七、腸桿菌科的其他菌屬
在臨床感染標(biāo)本中具有較高的分離率,大多屬于條件致病菌。
>枸椽酸桿菌屬
>克雷伯菌屬
>腸桿菌屬
>沙雷菌屬
枸檬酸桿菌屬
包括弗勞地枸椽酸桿菌、異型枸檬酸桿菌和無丙二酸鹽枸椽酸桿菌三個(gè)種,屬正常菌群成員。
1.生物學(xué)性狀
(1)形態(tài)與染色:G,直桿狀,無莢膜,無芽胞,具有周鞭毛。
(2)培養(yǎng)特性:需氧或兼性厭氧,營(yíng)養(yǎng)要求不高。在血液瓊脂上的菌落不溶血,在腸道選擇培養(yǎng)基上
發(fā)酵乳糖,在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng)。
(3)生化反應(yīng):
靛基質(zhì)硫化氫丙二酸鹽
弗勞地枸椽酸桿菌-/++-
異型枸檬酸桿菌+-+
無丙二酸鹽枸檬酸桿菌+--
2.致病性
本菌為條件致病菌,常在一些慢性疾病如白血病、自身免疫性疾病或醫(yī)療插管術(shù)后的泌尿道、呼吸道
中檢出,可引起敗血癥、腦膜炎、骨髓炎、中耳炎和心內(nèi)膜炎等。
3.微生物檢驗(yàn)
(1)標(biāo)本采集:根據(jù)病情可取尿液、痰、血液或膿汁等。
(2)檢驗(yàn)方法及鑒定
1)屬的鑒定:
B-半乳糖甘酶賴氨酸脫粉酶枸椽酸鹽利用
枸檬酸桿菌屬+-+
沙門菌屬-/+++
愛德華菌屬-+-
2)種的鑒別:根據(jù)產(chǎn)生靛基質(zhì)、硫化氫、丙二酸鹽與否鑒別。
(二)克雷伯菌屬
本屬細(xì)菌共有7個(gè)種,引起的醫(yī)院感染日見增多,其中以肺炎克雷伯菌最為多見。產(chǎn)酸(催娩)克雷
伯菌次之。
1.生物學(xué)特性
(1)形態(tài)與染色:G,卵圓形或球桿狀,成雙排列,菌體外有明顯莢膜,無鞭毛,無芽胞。
(2)培養(yǎng)特性:需氧或兼性厭氧,營(yíng)養(yǎng)要求不高。
在血瓊脂上形成圓形,凸起,灰白色,不溶血的粘液性菌落。有時(shí)菌落呈現(xiàn)黏液型,用接種環(huán)挑取時(shí)
呈長(zhǎng)絲狀。
在腸道菌選擇培養(yǎng)基中為乳糖發(fā)酵型菌落。
在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng),可形成菌膜與黏性沉淀物。
(3)生化反應(yīng):
觸醐陽性、胭酶陽性、氧化酶陰性、鳥氨酸脫竣酶陰性。
其中動(dòng)力和鳥氨酸脫竣酶陰性是本菌的最大特點(diǎn)。
2.致病性
>肺炎克雷伯菌肺炎亞種引起嬰兒腸炎、肺炎、腦膜炎、腹膜炎、外傷感染、敗血癥和成人醫(yī)源性尿
道感染。
>臭鼻克雷伯菌引起臭鼻癥。
>鼻硬節(jié)克雷伯菌引起鼻腔、咽喉和其他呼吸道的硬節(jié)病。
>催娩克雷伯菌可引起呼吸道和泌尿道感染、創(chuàng)傷感染與敗血癥等。
(三)腸桿菌屬
1.生物學(xué)特性
(1)形態(tài)與染色:G,短而粗的桿菌,有周鞭毛,部分菌株有莢膜,無芽胞。
(2)培養(yǎng)特性:需氧或兼性厭氧,最適溫度為30℃,營(yíng)養(yǎng)要求不高。在普通瓊脂上形成大而濕潤(rùn)的超
液狀菌落;在血瓊脂板上不溶血;腸道菌選擇培養(yǎng)基上多數(shù)形成乳糖發(fā)酵菌落;在液體培養(yǎng)基中呈均勻混
濁,表面有薄膜,管底有黏稠性沉淀物。
(3)生化反應(yīng):
IMViC:-、-、+、+
2.致病性
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