血型鑒定及交叉配血

關(guān)于血型鑒定及交叉配血實驗內(nèi)容一、紅細(xì)胞懸液的制備二、ABO血型鑒定（試管法）和Rh血型鑒定三、交叉配血（鹽水介質(zhì)和聚凝胺介質(zhì)）第2頁,共24頁，星期六，2024年，5月臨床中：待測制成紅細(xì)胞懸液，待測第3頁,共24頁，星期六，2024年，5月一、紅細(xì)胞懸液制備常用濃度：1%、2%、5%、10%。方法：①抗凝血移去上層血漿待測

②洗滌：剩余的紅細(xì)胞中加5MLNS，混勻，洗滌，棄上清，此步驟重復(fù)3次，最后一次上清應(yīng)清亮并全部棄去。

③配制懸液。（根據(jù)要求濃度）如：5%：洗滌后壓積紅細(xì)胞1滴+19滴NS，混勻3000r/min5min3000r/min5min第4頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：（一）、正定型（二）、反定型

第5頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定（鹽水介質(zhì)）：一、正定型原理：用特異性血型抗體檢測被檢RBC,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢RBC膜上有無與特異性血型抗體相對應(yīng)的抗原，進(jìn)一步判定血型。第6頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：一、正定型方法：1、試管法：加標(biāo)準(zhǔn)血清1滴（-A-B

）加紅細(xì)胞懸液1滴（5%）混勻，離心觀察結(jié)果1000r/min1min-A-B第7頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：正定型判定結(jié)果：試管法：輕輕搖動（或捻動）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（＋）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。注意：若上層為清亮的櫻紅色，考慮是否溶血第8頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：二、反定型：原理：用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測被檢血清（血漿）,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢血清（血漿）中有無與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞相對應(yīng)的抗體，進(jìn)一步判定血型。第9頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：二、反定型方法：1、試管法：加待測血清2滴加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液1滴混勻，離心觀察結(jié)果（方法同正定型）1000r/min1min-A-B第10頁,共24頁，星期六，2024年，5月第11頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定：結(jié)果判定：抗A抗B結(jié)果＋—A—＋B＋＋AB——OA(RBC)B(RBC)結(jié)果＋—B—＋A＋＋O——AB正定型反定型第12頁,共24頁，星期六，2024年，5月二、ABO血型鑒定凝集強度的判斷見實驗指導(dǎo)表格注意：1、正反定型一致才能確定結(jié)果；

2、所用器材必須清潔干凈，避免溶血，專型專用；

3、控制離心速度和時間，防止假陽性和假陰性；

4、抗原抗體比例要適當(dāng)；

5、溶血時，注意結(jié)果的判定；

6、正反定型結(jié)果不一致時，不可輕易判定，需查明原因，可能有技術(shù)問題也可能有標(biāo)本問題。第13頁,共24頁，星期六，2024年，5月

Rh（D）血型鑒定原理：IgM型抗D標(biāo)準(zhǔn)血清與被檢者RBC表面D抗原在室溫條件下鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生特異性反應(yīng)，根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判斷是否有D抗原的存在。第14頁,共24頁，星期六，2024年，5月

Rh（D）血型鑒定加抗D血清1滴加紅細(xì)胞懸液1滴（5%）輕輕搖動玻片混勻，2min內(nèi)判斷結(jié)果，有凝集（＋），無凝集需按照說明書進(jìn)一步實驗確認(rèn)是否為陰性第15頁,共24頁，星期六，2024年，5月

Rh（D）血型鑒定注意事項：1、按照試劑說明書操作2、先加血清，后加RBC懸液，可通過視覺判斷以免出現(xiàn)漏加抗D試劑導(dǎo)致的假陰性結(jié)果3、觀察結(jié)果時，應(yīng)輕輕捻動試管，若用力搖動，可認(rèn)為破壞弱凝集，誤判為（一）性。

第16頁,共24頁，星期六，2024年，5月三、交叉配血概念：供血者的血漿、紅細(xì)胞與受血者的紅細(xì)胞、血漿混合，觀察有無凝集反應(yīng)。方法：鹽水介質(zhì)法、聚凝胺介質(zhì)法、微柱凝膠法、抗人球蛋白法、酶介質(zhì)法。第17頁,共24頁，星期六，2024年，5月交叉配血：

主側(cè)：受血者血漿+供血者紅細(xì)胞

Ps：patientserum

Dc：donorcell

次側(cè)：供血者血漿+受血者紅細(xì)胞

Ds：donorserum

Pc：patientcell第18頁,共24頁，星期六，2024年，5月受血者獻(xiàn)血者PsPcDsDc主側(cè)次側(cè)3%-5%1%第19頁,共24頁，星期六，2024年，5月一、鹽水介質(zhì)法原理：ABO血型天然IgM類抗體與對應(yīng)的RBC抗原特異性結(jié)合時，在鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)肉眼可見的凝集。通過判斷是否凝集，判斷是否有血型不合的情況第20頁,共24頁，星期六，2024年，5月（一）鹽水介質(zhì)法操作：1、取兩只小試管，標(biāo)明主和次側(cè)2、主側(cè)：受血者血漿2滴，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞1滴次側(cè)：獻(xiàn)血者血漿2滴，受血者紅細(xì)胞1滴3、混勻，離心，1000r/min,離心1min4、觀察結(jié)果：輕輕搖動（或捻動）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（＋）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。第21頁,共24頁，星期六，2024年，5月（二）聚凝胺介質(zhì)法原理：聚凝胺是一種高價陽離子多聚物，在液體中可產(chǎn)生負(fù)電荷，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減輕細(xì)胞間排斥力，縮短紅細(xì)胞距離，在離心力作用下，可使紅細(xì)胞發(fā)生發(fā)生可逆性、非特異性凝集。低離子液可降低可增強抗原、抗體間的吸引力，促進(jìn)血型抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合。離心后加入再懸液（枸櫞酸鈉），可中和聚凝胺的正電荷，正常紅細(xì)胞表面恢復(fù)表面