農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告-5-2013 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè) 耐旱玉米MON87460及其衍生品種定性PCR方法

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)耐旱玉米MON87460及其衍生品種定性PCR方法I農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—5—2013本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—1農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—5—2013本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因耐旱玉米MON87460轉(zhuǎn)化體特異性定性PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因耐旱玉米MON87460及其衍生品種以及制品中MON87460轉(zhuǎn)化體成分的定性PCR檢測(cè)。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)通用要求農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—19—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)抽樣農(nóng)業(yè)部1485號(hào)公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)DNA提取和純化zSSⅡb基因zSSⅡbgene編碼玉米淀粉合酶異構(gòu)體zSTSⅡ-2的基因。根據(jù)轉(zhuǎn)基因耐旱玉米MON87460轉(zhuǎn)化體特異性序列設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)試樣進(jìn)行PCR擴(kuò)增。依5.4500mmol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液(pH8.0):稱取18.6g乙二銨四乙酸二鈉(EDTA-Na?),加2二鈉溶液(5.4),加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)條件下滅菌20min。zSSⅡb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGACzSSⅡb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGTMON87460-F:5'-ATCCACCTGTCAGCTCMON87460-R:5'-GGTATGTATATAGTGGC37.5.1試樣PCR反應(yīng)7.5.1.1每個(gè)試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液，根據(jù)TaqDNA聚合酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達(dá)到25.0μL。注：玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因PCR檢測(cè)反應(yīng)體系中，上、下游引物分別為zSSⅡb-F和zSSⅡb-R;MON874測(cè)反應(yīng)體系中，上、下游引物分別為MON87460-F和M4大小一致，表明樣品中檢測(cè)出MON87460轉(zhuǎn)化體成分，表述為“樣品中檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因耐旱玉米5農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—5—20131ATCCACCTGTCAGCTCAAGT51GAGATGTGTGCTGGACGGGCGGGCCTCCC101ACGGTGCGAAACGACGCACGCTTTTGCTGT151CAGCGCGAGCGTGACTGCGTTT201GGAAATTTGGTATTCTCTCACGTTGAAGGAA251