食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中二氯吡啶酸等 11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

SN/T××××—××××PAGEXXXII中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中二氯吡啶酸等11種中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法Nationalfoodsafetystandard—Determinationofclopyralidandother11kindsofpesticidesresiduesinfoodsofplantoriginLiquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod(征求意見稿)發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施XXXX-XX-XX-發(fā)布GBXXXX—XXXX附件1GBxxxxx—xxxGB23200.XXX—XXXXPAGE8PAGEI前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB23200.109-2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源食品中二氯吡啶酸殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》，與GB23200.109-2018相比，除二氯吡啶酸外，增加了消螨酚、特樂酚、茅草枯、戊硝酚、草芽畏、毒菌酚、氯氨吡啶酸、申嗪霉素、氨氯吡啶酸、氨氯吡啶酸三異丙醇胺鹽10種農(nóng)藥測(cè)定。GBxxxxx—xxxxGBxxxxx—xxxxPAGEPAGE52表D.表D.2（續(xù)）PAGE19食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法1范圍本文件規(guī)定了植物源性食品中二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥（見附錄A）殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定方法。本文件適用于植物源性食品中二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理試樣用酸化乙腈提取，提取液經(jīng)分散固相萃取凈化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說明，在分析中僅使用分析純的試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.1試劑4.1.1乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。4.1.2甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。4.1.3氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：7647-14-5）。4.1.4無水硫酸鎂（MgSO4，CAS號(hào)：7487-88-9）。4.2溶液配制4.2.1乙腈-甲酸溶液（99+1）：量取10mL甲酸加入990mL乙腈中，混勻。4.3標(biāo)準(zhǔn)品11種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，見附錄A，純度≥95%。4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（500mg/L）：準(zhǔn)確稱取約5mg（精確至0.1mg）各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于50mL燒杯中，用乙腈（4.1.1）溶解后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，定容至刻度，混勻，避光于-18℃及以下條件保存，有效期1年。4.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10mg/L）：分別準(zhǔn)確吸取1mL的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.4.1）于50mL容量瓶中用乙腈（4.1.1）定容至刻度，混勻，避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。4.4.3混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.4.2）于容量瓶中，用乙腈-甲酸溶液（4.2.1）定容至刻度，混勻，避光-18℃及以下條件保存，有效期1個(gè)月。4.5材料4.5.1十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）：粒徑40μm～60μm。4.5.2陶瓷均質(zhì)子：2cm（長(zhǎng)）×1cm（外徑），或相當(dāng)者。4.5.3微孔濾膜（有機(jī)相）：13mm×0.22μm，或相當(dāng)者。5儀器5.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。5.4組織搗碎機(jī)。5.5渦旋混合器。5.6振蕩器。6試樣制備6.1試樣制備樣品的取樣量按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定執(zhí)行，樣品取樣部位按照GB2763-2021中附錄A的規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于個(gè)體較小的蔬菜、水果樣品，取樣后全部處理；對(duì)于個(gè)體較大的基本均勻樣品，可在對(duì)稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；對(duì)于細(xì)長(zhǎng)、扁平或組分含量在各部分有差異的樣品，可在不同部位切取小片或截成小段后處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法取一部分或全部用組織搗碎機(jī)勻漿后，放入聚乙烯瓶中。干制蔬菜、水果和食用菌隨機(jī)取樣500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。谷物類隨機(jī)取樣500g，粉碎后使其全部可通過425μm的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中。油料、茶葉、堅(jiān)果、調(diào)味料、藥用植物隨機(jī)取樣500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。油脂攪拌均勻，放入聚乙烯瓶中。6.2試樣貯存試樣、留樣和備樣分別存放，于-18℃及以下條件保存。7分析步驟7.1提取7.1.1蔬菜、水果、食用菌類和糖料稱取10g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加入10mL乙腈-甲酸溶液（4.2.1）及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩3min，加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉，劇烈震蕩3min后10000r/min離心5min，待凈化。注：對(duì)于干制蔬菜、水果、食用菌和糖料，稱取5.0g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加10mL水渦旋混勻，靜置30min后按上述方法處理。7.1.2谷物、油料和堅(jiān)果類稱取5g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加10mL水渦旋混勻，靜置30min。加入10mL乙腈-甲酸溶液（4.2.1）及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩3min，加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉，劇烈震蕩3min后10000r/min離心5min，待凈化。7.1.3茶葉、香辛料（調(diào)味料）和藥用植物類稱取2g試樣（精確0.01g）于50mL塑料離心管中，加4mL水渦旋混勻，靜置30min。加入10mL乙腈-甲酸溶液（4.2.1）及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩3min后10000r/min離心5min，待凈化。7.1.4油脂稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中。加入10mL乙腈-甲酸溶液（4.2.1）及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩3min后后10000r/min離心5min，待凈化。7.2凈化7.2.1蔬菜、水果、食用菌類、糖料、谷物、堅(jiān)果、油料和油脂定量吸取1mL上清液至內(nèi)含20mgC18的塑料離心管中，渦旋混勻1min。10000r/min離心5min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.3），待測(cè)定。7.2.2茶葉、香辛料（調(diào)味料）和藥用植物類定量吸取1mL上清液至內(nèi)含150mg無水硫酸鎂和60mgC18的塑料離心管中，渦旋混勻1min。10000r/min離心5min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.3），待測(cè)定。7.3測(cè)定7.3.1液相色譜參考條件a）色譜柱：T3柱，2.1mm（內(nèi)徑）×100mm，粒徑1.8μm，或相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：A相為乙腈（4.1.1），B相為一級(jí)水。流動(dòng)相梯度條件見表1；c）流速：0.20mL/min；d）柱溫：40℃；e）進(jìn)樣量：2μL。表1流動(dòng)相及其梯度條件（VA+VB）時(shí)間minVAVB025753257579551295512.525751525757.3.2質(zhì)譜參考條件a）離子源類型：電噴霧離子源（ESI）；b）掃描方式：正離子和負(fù)離子同時(shí)掃描；c）接口電壓：正離子4500V；負(fù)離子3500V；d）離子源溫度：300℃；f）霧化氣：3.0L/min；g）干燥氣：氮?dú)?，流速?0.0L/min；h）碰撞氣：氬氣，壓力：270kPah）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)：每種農(nóng)藥分別選擇至少2個(gè)子離子，每種農(nóng)藥的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)，參見附錄B。7.3.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線選擇與被測(cè)樣品性質(zhì)相同或相似的空白樣品按照7.1～7.4部分進(jìn)行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。準(zhǔn)確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級(jí)用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.002mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L和0.5mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，根據(jù)儀器性能和檢測(cè)需要選擇不少于5個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。以農(nóng)藥定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。7.3.4定性及定量7.3.4.1保留時(shí)間被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。7.3.4.2離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。表2定性時(shí)離子豐度比的最大允許偏差離子豐度比＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%允許相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%本方法的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見附錄C。7.3.4.3定量外標(biāo)法定量。7.4測(cè)定將基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和離子豐度比定性，測(cè)得定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積，待測(cè)樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的定量測(cè)定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。7.5平行試驗(yàn)按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。7.6空白試驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。8結(jié)果計(jì)算試樣中各農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式（1）計(jì)算。

ω=（1）式中：ω——試樣中被測(cè)物殘留量的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；ρ1——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；A——試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；As——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；V——提取液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留2位有效數(shù)字，含量超1mg/kg時(shí)保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下，獲得的2次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過重復(fù)性限（r），參見附錄D。在再現(xiàn)性條件下，獲得的2次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過再現(xiàn)性限（R），參見附錄D。10定量限本文件方法對(duì)各種化合物的方法定量限為0.005mg/kg～0.1mg/kg（參見附錄A）。

附錄A（資料性）

二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥中英文名稱和各類基質(zhì)中的方法定量限表A.1二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥中英文名稱和方法定量限序號(hào)農(nóng)藥中文名農(nóng)藥英文名分子式CAS號(hào)方法定量限mg/kg蔬菜、水果、食用菌和糖料谷物、油料、堅(jiān)果、藥用植物和植物油茶葉和香辛料（調(diào)味料）1二氯吡啶酸ClopyralidC6H3Cl2NO21702-17-60.100.100.102消螨酚DinexC12H14N2O5131-89-50.0050.010.013特樂酚DinoterbC10H12N2O51420-07-10.0050.010.014茅草枯DalaponC3H4Cl2O275-99-00.010.010.105戊硝酚DinosamC11H14N2O54097-36-30.0050.010.016草芽畏2,3,6-TBAC7H3Cl3O250-31-70.010.010.107毒菌酚HexachloropheneC13H6Cl6O270-30-40.0050.010.018氯氨吡啶酸AminopyralidC6H4Cl2N2O2150114-71-90.0050.010.109申嗪霉素Phenazino-1-carboxylicacidC13H8N2O22538-68-30.0050.010.1010氨氯吡啶酸PicloramC6H3Cl3N2O21918-02-10.0050.010.1011氨氯吡啶酸三異丙醇胺鹽Picloram-tris(2-hydroxypropyl)ammoniumC9H21NO3.C6H3Cl3N2O26753-47-50.0050.010.10附錄B（資料性）二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)表B.1二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)序號(hào)農(nóng)藥中文名稱農(nóng)藥英文名稱CAS號(hào)電離方式保留時(shí)間min定量離子對(duì)碰撞電壓V定性離子對(duì)碰撞電壓V1二氯吡啶酸clopyralid1702-17-6負(fù)2.14190.1/146.020190.1/35.0102消螨酚dinex131-89-5負(fù)8.74265.1/218.18265.1/190.1103特樂酚dinoterb1420-07-1負(fù)8.38239.1/207.125239.1/176.1384茅草枯dalapon75-99-0負(fù)2.25141.0/97.111141.0/61.0125戊硝酚dinosam4097-36-3負(fù)8.60253.1/193.126253.1/134.1466草芽畏2,3,6-TBA50-31-7負(fù)2.40223.0/179.07223.0/35.0177毒菌酚hexachlorophene70-30-4負(fù)9.35402.9/195.125402.9/367.0178氯氨吡啶酸aminopyralid150114-71-9正1.78207.0/161.021207.0/134.0319申嗪霉素phenazino-1-carboxylicacid2538-68-3正6.91225.0/207.110225.0/179.12010氨氯吡啶酸picloram1918-02-1正2.39240.9/222.915240.9/194.92111氨氯吡啶酸三異丙醇胺鹽picloram-tris(2-hydroxypropyl)ammonium6753-47-5正2.39240.9/222.915240.9/194.921附錄C（資料性）二氯吡啶酸等11種農(nóng)藥多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)量色譜圖1.二氯吡啶酸（clopyralid）2.消螨酚（dinex）3.特樂酚（dinoterb）4.茅草枯（dalapon）5.戊硝酚（dinosam）6.草芽畏（2,3,6-TBA）7.毒菌酚（hexachlorophene）8.氯氨吡啶酸（aminopyralid）9.申嗪霉（phenazino-1-carboxylicacid）10.氨氯吡啶酸（picloram）11.氨氯吡啶酸三異丙醇胺鹽（picloram-tris(2-hydroxypropyl)ammonium）圖C.10.1mg/L二氯吡啶酸等11種