T-GDFDTAEC 07-2024 食品中禁用水溶性合成色素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS67.050CCSC53TB廣東省食品藥品審評(píng)認(rèn)證技術(shù)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Determinationofprohibitedwater-solublesyntheticcolourinfoodsbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodIT/GDFDTAEC07—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原理 5試劑和材料 6儀器和設(shè)備 7分析步驟 8結(jié)果計(jì)算和表述 9精密度 附錄A（資料性）禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間 5附錄B（資料性）禁用水溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式 附錄C（資料性）禁用水溶性合成色素特征離子質(zhì)量色譜圖 7T/GDFDTAEC07—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廣州市食品檢驗(yàn)所、廣州匯標(biāo)檢測(cè)技術(shù)中心提出。本文件由廣東省食品藥品評(píng)審認(rèn)證技術(shù)協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：廣州市食品檢驗(yàn)所、廣州匯標(biāo)檢測(cè)技術(shù)中心、華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司、通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司。本文件主要起草人：毛新武、周慶瓊、陳曉強(qiáng)、梁友、溫恒、戚平、林子豪、梁淑珍、邱險(xiǎn)輝、潘敏堯，秦坤良、葉丹、許匯成、徐政慧、張競(jìng)雯。1T/GDFDTAEC07—2024食品中禁用水溶性合成色素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了食品中32種禁用水溶性合成色素（見(jiàn)附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于飲料、葡萄酒、糖果、調(diào)味醬、豆制品、熟肉等食品中32種禁用水溶性合成色素的測(cè)2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格及試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理試樣經(jīng)甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液經(jīng)氮吹置換溶劑后，經(jīng)C18萃取小管凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有說(shuō)明，本實(shí)驗(yàn)使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水或GB/T33087中規(guī)定的高純水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純。5.1.2乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。5.1.3氨水（NH3·H2O）：含量20%～25%5.1.45%氨水甲醇溶液：移取5mL氨水于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。5.1.510%甲醇水溶液：移取10mL甲醇于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。5.2標(biāo)準(zhǔn)品32種禁用水溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品：參見(jiàn)附錄B，純度≥95%。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的色素標(biāo)準(zhǔn)品，置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，保存期6個(gè)月。5.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A組（10mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1mL的A組色素單標(biāo)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3個(gè)月。5.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B組（100mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1mL的B組色T/GDFDTAEC07—2024素單標(biāo)儲(chǔ)備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，保存期6個(gè)月。5.3.4混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A組（1mg/L）：準(zhǔn)確移取1mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。5.3.5混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B組（10mg/L準(zhǔn)確移取1mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。5.3.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，用10%甲醇水溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作溶5.4材料5.4.1十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。5.4.2親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。6.2分析天平：感量為0.1mg、0.01g。6.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。6.4超聲波清洗器。6.5氮吹儀。7分析步驟7.1試樣制備飲料、葡萄酒、調(diào)味醬試樣應(yīng)混合均勻，含氣飲料及葡萄酒試樣應(yīng)先加熱或超聲去除二氧化碳后混合均勻，糖果、豆制品、熟肉試樣經(jīng)食品粉碎機(jī)攪碎混勻，制備好的試樣密封冷藏避光保存，備用。7.2試樣提取7.2.1飲料、葡萄酒試樣稱取試樣1g（準(zhǔn)確至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。準(zhǔn)確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測(cè)。7.2.2糖果試樣糖果：稱取試樣2g（準(zhǔn)確至0.01g）于小燒杯中，加入5mL甲醇，微熱溶解后，溶液轉(zhuǎn)移至10mL比色管，用甲醇多次洗滌燒杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。準(zhǔn)確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測(cè)。其他：7.2.3調(diào)味醬、豆制品、熟肉試樣稱取試樣2g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入10mL5%氨水甲醇溶液，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復(fù)提取一遍，合并上清液。準(zhǔn)確移取2mL上清液于氮吹儀上氮吹至干，用2mL甲醇復(fù)溶，轉(zhuǎn)移至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測(cè)。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測(cè)試，同時(shí)做空白測(cè)試。7.3儀器參考條件7.3.1液相色譜參考條件a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色譜柱；3T/GDFDTAEC07—2024b)流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇；梯度洗脫條件見(jiàn)表1；c)柱溫：40℃;d)進(jìn)樣量：2μL；e)流速：0.4mL/min。表1液相色譜梯度洗脫條件225527.3.2質(zhì)譜參考條件a)離子源類型：電噴霧電離源（ESI）；b)掃描方式：負(fù)離子電離模式；c)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM；d)毛細(xì)管電壓：-2.5kV；e)離子源溫度：150℃;f)脫溶劑氣溫度：500℃;g)脫溶劑氣流速：1000L/h；h)錐孔氣流速：150L/h；i)定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓和碰撞電壓參見(jiàn)附錄A。7.4試樣溶液的測(cè)定7.4.1定性分析在同樣測(cè)試條件下，試樣溶液中禁用水溶性合成色素的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的保留時(shí)間相對(duì)偏差在±25%以內(nèi)，且檢測(cè)到的相對(duì)離子豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)離子豐度一致。其允許偏差應(yīng)符合表2的要求。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差>50±20±25±30±507.4.2定量測(cè)定取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以特征離子質(zhì)量色譜峰面積定量，按外標(biāo)法計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中的禁用水溶性合成色素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)附錄B。7.5空白試驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定。4T/GDFDTAEC07—20248結(jié)果計(jì)算和表述試樣中各色素含量按式（1）計(jì)算：式中：X——樣品中相應(yīng)的色素含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；CS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)色素質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLA——樣品溶液中相應(yīng)的色素峰面積；V——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）AS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的色素峰面積；1000——換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。本方法中，當(dāng)樣品取樣量為2g，定容體積為10mL時(shí)，32種禁用水溶性合成色素的檢出限為0.3mg/kg（A組化合物）、3.0mg/kg（B組化合物）。T/GDFDTAEC07—2024（資料性）禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間見(jiàn)表A.1。表A.1禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間序號(hào)1234567896T/GDFDTAEC07—2024（資料性）禁用水溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式禁用水溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式，見(jiàn)表B.1。表B.1禁用水溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式1C22H17N2NaO5S2C27H31N2NaO7S23C23H18N3NaO6S4C20H20N2O5S5C37H35N2NaO6S26C16H10N2Na2O7S27C16H11N2NaO4S8C17H13N2NaO4S9C16H11N2NaO4SC18H14N3NaO3SC18H13N3Na2O8S2C18H14N2Na2O7S2C24H19N3Na2O9S3C27H29N2NaO7S2C24H18N4Na2O7S2C22H14N4Na2O7S2C20H6Br4Na2O5C28H20N2Na2O8S2C20H16N4Na2O9S2C34H25N2NaO6SC16H13N4NaO4SC18H14N3NaO3SC16H9N3Na2O10S2C16H10N2Na2O8S2C37H34N2O10S3Na2C14H14N3NaO3Sponceau3RC19H16N2Na2O7S2C18H14N2Na2O7S2pontacylcarmine2BC19H15N3Na2O9S2pontacylviolet6RC20H12N2Na2O8S2uranineC20H10Na2O5C25H27N2NaO6S2T/GDFDTAEC07—2024禁用水溶性合成色素特征離子質(zhì)量色譜圖禁用水溶性合成色素特征離子質(zhì)量色譜圖（A組：100ng/mL；B組：1000ng/mL），見(jiàn)圖C.1。11.03421.147>79.96911.03421.147>79.969(A139)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.001.酸性藍(lán)279.53559.098>479.0359.53559.098>479.035(A047)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.002.酸性藍(lán)310.85464.097>370.08810.85464.097>370.088(A134)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.003.酸性藍(lán)4111.47399.054>316.08311.47399.054>316.083(A106)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.004.酸性藍(lán)6210.25667.287>560.86310.25667.287>560.863(A102)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.005.酸性藍(lán)7T/GDFDTAEC07—2024202.918>202.918>150.624(A066)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.006.酸性橙10326.926326.926>171.187(A041)1.53e71001.53e7%%Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.007.酸性橙20340.991340.991>185.163(A094)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.008.酸性橙89.53100327.007>171.181(A017)49.531000Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.009.酸性橙II1009.96351.984>156.203(A019)1009.95e7%%Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0010.橙黃IV6.10231.3846.10231.384>179.155(A013)1000Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0011.酸性紅1216.766>216.766>143.1(A038)1002.52e5100%%0Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0012.酸性紅26T/GDFDTAEC07—20248.97294.613>235.2448.97294.613>235.244(A034)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0013.酸性紅2659.56557.084>432.9749.56557.084>432.974(A023)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0014.酸性紅5210.49269.069>10.49269.069>136.698(A096)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0015.酸性紅719.02100255.035>150.709(A014)9.021001.59e6%%Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.酸性紅739.34100642.672>518.589(A026)9.341001.42e6%%Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0017.酸性紅8710.97100577.097>496.927(A061)10.971003.79e7%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0018.酸性紫345.72100259.904>158.233(A109)5.721002.02e5%%TimeTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00T/GDFDTAEC07—202419.酸性紫710.80589.233>10.80589.233>185.185(A073)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0020.酸性紫9100356.964>237.167(A092)1001.75e7%%Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0021.酸性黃111009.97351.98>156.187(A064)1009.60e710.25%% -0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0022.酸性黃366.09233.334>6.09233.334>158.583(A036)100%%00Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0023.鉻變素2B5.91211.171>5.91211.171>158.59(A037)100%%0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0024.鉻變素2R1007.95381.31>170.174(A075)1001.85e6%% Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0025.堅(jiān)牢綠8.75100303.944>156.221(A020)8.751008.19e7%%Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00T/GDFDTAEC07—202426.甲基橙8.31100224.015>136.672(A081)8.311001.46e6%%0Time0Time-0.002.004.006.00