SNT 3731.1-2013 食品及飼料中常見禽類品種的鑒定方法 第1部分鵪鶉成分檢測(cè) PCR法

食品及飼料中常見禽類品種的鑒定方法第1部分：鶴鶉成分檢測(cè)PCR法1本部分為SN/T3731的第1部分。食品及飼料中常見禽類品種的鑒定方法第1部分：鵪鶉成分檢測(cè)PCR法1范圍SN/T3731的本部分規(guī)定了食品及飼料中鵪鶉成分檢測(cè)的PCR方法。本部分適用于食品及飼料中鵪鶉成分的定性檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction;PCR一種體外擴(kuò)增DNA的方法。PCR使用一種耐熱的多聚酶，以及兩條含有20個(gè)左右堿基的單鏈引物。經(jīng)過高溫變性將模板DNA分離成兩條鏈，低溫退火使得引物和一條模板單鏈結(jié)合，然后伸，反應(yīng)液的游離核苷酸緊接著引物從5'端到3'端合成一條互補(bǔ)的新鏈。而新合成的DNA又可以繼續(xù)進(jìn)行上述循環(huán)，因此DNA的數(shù)自不斷倍增。TagDNA酶ThermusaquaticusDNApolymerase從Thermusaquaticus細(xì)菌中提取的耐熱DNA聚合酶。下列縮略語適用于本文件。dNTP:脫氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrithylammoniumbromide)Tris:三(羥甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)DNAMarker:核酸相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)5方法提要2序列(5'-3*)目的基因F:5'-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3’R:5'-TGGCTTAATGGTTG6.2.1裂解液：1%CTAB;0.05mol/L6.2.675%乙醇。1.000mL;使用時(shí)10倍稀釋。38.2樣品DNA提取8.3PCR擴(kuò)增9質(zhì)量控制410結(jié)果判定與表述10.1結(jié)果判定10.1.1在符合第9章的情況下，被檢樣品大小處未見PCR擴(kuò)增條帶則判為陰性。10.1.2將可疑陽性的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列測(cè)定，與附錄A中鶴鶉線粒體12sDNA基因相對(duì)應(yīng)片段的序列比對(duì)，其片段大小正確，同源性達(dá)到97%以上，則確證含有鵪鶉成分。10.2結(jié)果表述11防污染措施檢測(cè)過程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的規(guī)定執(zhí)行。本部分所規(guī)定方法的最低檢出限(LOD)為100mg/kg。5TGAGCTCAATAGCCGCCACTAATAAGACAGGTCAAGGTATAGCCAAATGGGCTACATTTTCTAAAATAGAACAAACGAAAAAGGACATGAAACCTGAAGGAGGATTTAGCAGTAAA