GB∕ T 20554-2024 海帶通 用標(biāo)準(zhǔn)

ICS65.150CCSB51代替GB/T20554—20062024-06-29發(fā)布2025-01-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T20554—2006《海帶》,與GB/T20554—2006相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下： 更改了學(xué)名與分類(見第1章和第4章，2006年版的第1章和第2章)——更改了外部形態(tài)(見5.1,2006年版的3.1);——更改了細(xì)胞遺傳學(xué)特性(見第7章，2006年版的5.1);——更改了分子遺傳學(xué)特性(見第8章，2006年版的5.2);——更改了判定規(guī)則(見第10章，2006年版的6.4)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出。本文件由全國水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC156)歸口。本文件起草單位：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所、廈門大學(xué)、上海海洋大學(xué)、威海長青海洋科技股份有限公司、福建省連江縣官塢海產(chǎn)開發(fā)有限公司、山東海之寶海洋科技有限公司。本文件主要起草人：汪文俊、張巖、劉濤、周志剛、魯曉萍、梁洲瑞、王毓江、閆欣、肖露陽、畢燕會、常麗榮、李曉波、林楓、林哲龍、劉曉勇、王飛久。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——本文件于2006年首次發(fā)布為GB20554—2006,2017年轉(zhuǎn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)GB/T20554—2006;——本次為第一次修訂。1ders,2006]的學(xué)名與分類，主要形態(tài)結(jié)構(gòu)特征、繁殖特性、細(xì)胞遺傳學(xué)特性與分子遺傳學(xué)特性，描述了相應(yīng)的檢測方法，同時規(guī)定了判定規(guī)則。本文件適用于海帶的種質(zhì)檢測與鑒定。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。海帶生活史中具二倍數(shù)染色體的藻體。海帶生活史中由胚孢子萌發(fā)形成的具單倍數(shù)染色體的藻體。孢子體全長，為假根、柄和葉片的長度之和。孢子體葉片最寬部分的寬度。海帶Saccharinajaponica(Areschoug)C.E.Lane,C.Mayes,Druehl&.G.W.Saunders,2006。棕色藻門(Ochrophyta),褐藻綱(Phaeophyceae),海帶目(Laminariales),海帶科(Lamin-ariaceae),海帶屬(Saccharina)。2孢子體分為固著器、柄和葉片三部分。固著器由多層雙分枝的圓柱形假根組成。柄呈圓柱形或扁圓柱形，黃褐色至深褐色，成藻柄長3cm～13cm。葉片為帶狀，褐色具光澤?；坑讜r楔形，成藻階段為近圓形。葉片沿中軸向邊緣藻體厚度漸薄，葉片邊緣相對中帶部薄而軟，有波褶；無縱溝或具縱溝，具縱溝藻體有兩條淺的縱溝貫穿葉片的中部形成明顯的中帶部。成熟期在葉片表面形成淺黃色帶狀或片段凸起，即孢子囊群。野生海帶成藻一般體長0.3m～1.8m,體寬4cm～20cm;養(yǎng)殖海帶成藻體長2m～9m,體寬20cm～90cm。孢子體外形見圖1。875——中帶部；6——葉緣部；7——體長；由個體小、排列緊密整齊、含粒狀色素體的細(xì)胞組成，呈柵欄狀。外皮層細(xì)胞呈柱狀，大小不等，排列不整齊。內(nèi)皮層細(xì)胞大小相近，排列較整齊。6繁殖特性為孢子體(2n)與配子體(n)不等世代交替型。海帶生活史示意圖見圖2。側(cè)絲側(cè)絲減數(shù)分裂游孢子單室抱子囊胚池子萌發(fā)孢子囊雄配子體初期雄配子體8細(xì)胞的幼苗雌陽子體迎子體世代配了體世代葉0孢子體產(chǎn)生單室孢子囊群形成游孢子。游孢子為單細(xì)胞，梨形，長6.9μm～8.2μm,寬游孢子的外形見圖3。卵式生殖方式。雌配子體產(chǎn)生卵囊，每個卵囊產(chǎn)生1個黃褐色卵。卵成熟后排出卵囊并黏附在卵囊16μm～19μm。精子(n)與卵(n)結(jié)合生成合子(2n)。海帶雌、雄配子體外形見圖4。34染色體數(shù)n=31,2n=62。8分子遺傳學(xué)特性線粒體COI基因片段參考序列(609bp):TTTAATGATTGGTGCTCCTGATATGGCTTTTCCCCGTATGAATAACATTAGTTTTTGGTT240ACTACCTCCCTCITTAATITTGCI"ICTAGCGTCCTCGTIGGTAGAAAGGTTGGACAGTGTACCCACCTCTTAGTGGTATTCAGGCACACTCAGGACCTTCTGTTGA360TGGTATTACAATGCTATTAACAGATAGGAAIITTAATACTACTIlTT1TGATCCGGCCGG600種內(nèi)K2P(Kimura2-parameter)遺傳距離應(yīng)小于2%。將孢子體平展，在自然光下，采用目視法檢測。取待檢測部位的組織，厚度0.5mm～1mm,滴入適量海水，蓋上蓋玻片，采用顯微鏡檢測。以孢子體產(chǎn)生孢子囊群的時間判定為繁殖時間。孢子囊群在充足光線下肉眼觀察。游孢子、雌配子體、雄配子體、卵及精子的形態(tài)采用顯微鏡檢測。9.3細(xì)胞遺傳學(xué)特性按照附錄A的方法檢測。9.4分子遺傳學(xué)特性按照附錄B的方法檢測。10.1當(dāng)檢測結(jié)果符合第5章要求時，判定為該物種。10.2當(dāng)出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)增加檢測其他章節(jié)要求內(nèi)容，依據(jù)檢測結(jié)果對物種進(jìn)行綜合判定：a)第5章無法進(jìn)行檢測或準(zhǔn)確判定時，增加檢測第7章或第8章的內(nèi)容；b)第三方提出要求檢測第6章全部或部分內(nèi)容時；c)全項檢測時。56(規(guī)范性)海帶細(xì)胞遺傳學(xué)特性檢測A.1溶液的配制取0.1g秋水仙素，用10mL蒸餾水配成1%的原液，2℃~8℃避光保存，在2周內(nèi)使用，使用時用蒸餾水按比例稀釋至所需濃度。取冰乙酸和無水乙醇按體積比1:3倒入預(yù)先準(zhǔn)備好的溶液瓶中，用玻璃棒輕輕攪動至均勻即可，常溫避光保存，在2周內(nèi)使用。A.1.3混合酶解液纖維素酶：果膠酶：離析酶：鮑魚酶=2:1:1:1.5。A.1.4DAPI染液5mg/mL的母液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH=7.0)按體積比1:1000稀釋成工作液。母液于取適量待測海帶材料，用滅菌海水清洗2次～3次，孢子體用吸水紙吸取表面水分，配子體離心除去多余水分，加入0.2%的秋水仙素振蕩搖勻，4℃處理6h～12h。離心取配子體沉淀，孢子體材料直接用鑷子取出，加入卡諾固定液振蕩搖勻之后，4℃處理24h以上，蒸餾水清洗3次～5次，每次2min。離心取配子體沉淀，孢子體材料直接用鑷子取出，放入離心管并加入適量混合酶液，在37℃搖床上于200r/min酶解18h,用70%的乙醇終止酶解反應(yīng)，用蒸餾水清洗酶解產(chǎn)物3次～4次，加入適量4℃保存的冰乙酸，振蕩混勻，觀察酶解產(chǎn)物是否均勻，取少量酶解產(chǎn)物滴片，自然晾干。A.3染色與觀察取攜帶有染色體的自然晾干載玻片，加入15pLDAPI染色15min后，在熒光顯微鏡(物鏡100倍)7(規(guī)范性)海帶分子遺傳學(xué)特性檢測B.1總DNA提取COI-F:5'-TACATTGTATTTAATCTTTGGAGGTTTTTC-3'。COI-R:5'-AAATAAATGCTGATACA