真菌及四體（病原生物學(xué)課件）

螺旋體、支原體

衣原體、立克次體一、螺旋體

螺旋體是一類(lèi)細(xì)長(zhǎng)、柔軟、螺旋狀、運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物。分類(lèi)螺旋體所致疾病鉤端螺旋體屬鉤端螺旋體鉤端螺旋體病密螺旋體屬梅毒螺旋體梅毒疏螺旋體屬伯氏疏螺旋體回歸熱疏螺旋體萊姆病流行性回歸熱致病性螺旋體的分類(lèi)A：Fontana鍍銀染色法；B：暗視野顯微鏡一、鉤端螺旋體(一)生物學(xué)性狀G-，不易著染。Fontana鍍銀染色法→染成棕褐色。菌體呈C、S型，一端或兩端呈鉤狀，運(yùn)動(dòng)活潑。營(yíng)養(yǎng)要求復(fù)雜，常用Korthof培養(yǎng)基。抵抗力弱，60℃1min死亡,對(duì)青霉素敏感。（二）臨床意義1.致病物質(zhì)：內(nèi)毒素樣物質(zhì)與外毒素2.傳播途徑：經(jīng)粘膜或破損皮膚進(jìn)入；經(jīng)胎盤(pán)垂直傳播3.所致疾病鉤端螺旋體?。ㄣ^體?。┡R床表現(xiàn)：“三癥狀”：高熱、乏力、全身酸痛?！叭w征”：眼結(jié)膜充血、腓腸肌壓痛、淺表淋巴結(jié)腫大觸痛。（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本采集發(fā)病10天內(nèi)取血液，1周后取尿液，有腦膜刺激者取腦脊液。2.直接鏡檢標(biāo)本離心后用暗視野顯微鏡檢查，或經(jīng)Fontana鍍銀染色用普通光學(xué)顯微鏡檢查，亦可用直接免疫熒光法檢查。3.分離培養(yǎng)

標(biāo)本接種Korthof培養(yǎng)基。4.血清學(xué)檢查取發(fā)病初期和發(fā)病第3～4周雙份血清，檢測(cè)抗體效價(jià)變化。（四）防治原則1.預(yù)防積極防鼠、滅鼠，加強(qiáng)對(duì)帶菌家畜管理。接種滅活多價(jià)鉤體疫苗，加強(qiáng)特異性預(yù)防。2.治療治療首選青霉素，其次為慶大霉素、強(qiáng)力霉素等。二、梅毒螺旋體（一）生物學(xué)特性Fontana鍍銀染色法→染成棕褐色，8～14個(gè)致密而規(guī)則的小螺旋，運(yùn)動(dòng)活潑。G-，不易著色。至今尚不能用人工培養(yǎng)。抵抗力弱，對(duì)溫度和干燥特別敏感。A：Fontana鍍銀染色法；B：暗視野顯微鏡（二）致病性引起梅毒，人是梅毒唯一傳染源。1.先天性：母體→胎盤(pán)→胎兒三聯(lián)征：鋸齒形牙、間質(zhì)性角膜炎和神經(jīng)性耳聾2.后天性：性接觸傳播先天梅毒兒鋸齒形牙先天梅毒后天梅毒Ⅰ期梅毒：傳染性極強(qiáng)，破壞性小感染后2～4周左右局部出現(xiàn)無(wú)痛性硬下疳。Ⅱ期梅毒：傳染性強(qiáng)，破壞性小發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后6～8周，以梅毒疹為主要表現(xiàn)。Ⅲ期（晚期）梅毒：傳染性小，破壞性大發(fā)生于感染2年以后，亦可長(zhǎng)達(dá)10～15年的。除皮膚粘膜外，有明顯內(nèi)臟損害如心、腦等變，可危及生命。一期梅毒：硬下疳硬下疳特點(diǎn)90%發(fā)生在生殖器部位常單發(fā)，形態(tài)為紅斑、潰瘍

二期梅毒：梅毒疹丘疹性梅毒疹梅毒疹特點(diǎn)泛發(fā)對(duì)稱(chēng)，多為古銅色皮疹好發(fā)于掌跖（zhí）三期梅毒Ⅲ期共同特點(diǎn)損害數(shù)目少，分布不對(duì)稱(chēng)，破壞性大。自覺(jué)癥狀輕，客觀(guān)癥狀嚴(yán)重?？姑范局委熡行?，但無(wú)法修復(fù)破壞的組織器官梅毒樹(shù)膠腫梅毒上顎穿孔（三）微生物生物學(xué)檢查1.標(biāo)本采集下疳滲出液、梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液等標(biāo)本檢查梅毒螺旋體。2.血清學(xué)診斷臨床以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)進(jìn)行過(guò)篩試驗(yàn)，以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)做確認(rèn)試驗(yàn)。

以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)進(jìn)行過(guò)篩試驗(yàn)，以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)做確認(rèn)試驗(yàn)。試驗(yàn)類(lèi)型試驗(yàn)名稱(chēng)（英文縮寫(xiě)）非梅毒旋體抗原血清試驗(yàn)性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡試驗(yàn)（RPR）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（TP-WB）回歸熱螺旋體引起人類(lèi)回歸熱的病原體?？煞譃閮深?lèi)。一為虱傳回歸熱，引起流行性回歸熱；另一為蜱傳回歸熱，又稱(chēng)地方性回歸熱。臨床特點(diǎn)為急起急退的高熱，周期性反復(fù)發(fā)作。全身肌肉酸痛，肝脾腫大，重癥可出現(xiàn)黃疸和出血傾向。伯氏疏螺旋體萊姆病的病原體，主要經(jīng)蜱叮咬而傳播。經(jīng)3～32d的潛伏期，在叮咬部位可出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)慢性移行性紅斑。晚期主要表現(xiàn)為慢性關(guān)節(jié)炎、慢性神經(jīng)系統(tǒng)或皮膚異常。二、衣原體一類(lèi)能通過(guò)濾菌器，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，具有獨(dú)特發(fā)育周期的原核細(xì)胞型微生物。（一）生物學(xué)特性形態(tài)、染色Giemsa染色呈淡藍(lán)色或紫色。2.獨(dú)特的生活周期原體（EB）：為細(xì)胞外存在形式，有感染性，較小，卵圓形，中央有一致密的擬核。始體或網(wǎng)狀體（RB）：為細(xì)胞內(nèi)繁殖型，較大，圓形或不規(guī)則形，無(wú)致密擬核。湯飛凡3.培養(yǎng)特性目前最常用的細(xì)胞培養(yǎng)法，是衣原體診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。4.抵抗力抵抗力較弱，不耐熱，對(duì)冷凍干燥有耐受性。不能用甘油保存。四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素或青霉素、利福平等對(duì)其有抑制作用。鸚鵡熱衣原體對(duì)磺胺類(lèi)藥物耐藥。（二）臨床意義

沙眼衣原體感染范圍較廣，可侵害不同的系統(tǒng)和器官。主要有沙眼、包涵體性結(jié)膜炎、泌尿生殖道感染（如宮頸炎、輸卵管炎、附睪炎、直腸炎、新生兒肺炎及中耳炎等）、性病淋巴肉芽腫。分類(lèi)所致疾病對(duì)磺胺的敏感性沙眼衣原體沙眼、性傳播疾病和幼兒肺炎敏感肺炎衣原體肺炎（少兒為主）和呼吸道感染不敏感鸚鵡熱衣原體肺炎（青少年為主）和呼吸道感染不敏感（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.直接細(xì)胞學(xué)檢查（1）Giemsa染色成熟的原體，Giemsa染色為紫紅色，與藍(lán)色的宿主細(xì)胞漿成鮮明對(duì)比。始體被染呈藍(lán)色。（2）包涵體染色包涵體內(nèi)含有糖原，Lugol碘液染色呈棕褐色斑塊。2.血清學(xué)檢測(cè)微量免疫熒光檢測(cè)和酶免疫測(cè)定（四）防治原則衣原體感染后，免疫力不強(qiáng)。預(yù)防注意個(gè)人衛(wèi)生，管理好家禽，取締賣(mài)淫嫖娼等。治療積極治療，可選取青霉素、四環(huán)素、利福平等藥物內(nèi)服或局部外用。三、支原體

無(wú)細(xì)胞壁，細(xì)胞膜含固醇，能通過(guò)濾菌器，菌落呈荷包蛋樣，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。對(duì)人致病主要支原體分類(lèi)所致疾病肺炎支原體肺炎、支氣管炎溶脲脲原體泌尿生殖道感染（一）生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色呈高度多形態(tài)性，常用姬姆薩染色，呈淡紫色。2.培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較一般細(xì)菌高，對(duì)低滲透壓敏感。在固體培養(yǎng)基上菌落呈圓形、光滑、邊緣整齊，形成典型“油煎蛋”樣菌落。

3.生化反應(yīng)根據(jù)分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等初步鑒定支原體。4.抵抗力對(duì)熱、干燥、低滲及多種消毒劑敏感，但對(duì)醋酸、結(jié)晶紫和亞碲酸鹽有較強(qiáng)耐受性。支原體種類(lèi)葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原體＋－－人型支原體－＋－生殖道支原體＋－－解脲脲原體－－＋（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.肺炎支原體的鑒定根據(jù)形態(tài)、菌落和生化反應(yīng)特征，還可做以下試驗(yàn)幫助鑒定。溶血試驗(yàn)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)2.解脲脲原體鑒定解脲脲原體可分解尿素產(chǎn)氨，使酚紅指示劑變色，不分解葡萄糖、精氨酸，鑒定中常用：代謝抑制試驗(yàn)：解脲脲原體分解尿素，當(dāng)加入特異性抗血清后，可抑制相對(duì)應(yīng)血清型菌株生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中指示劑酚紅不顯色。生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)：同肺炎支原體鑒定操作，低倍鏡下觀(guān)察制片周?chē)志h(huán)及寬度。（三）臨床意義肺炎支原體的主要致病物質(zhì)有P1蛋白、糖脂抗原和莢膜多糖，可引起人類(lèi)原發(fā)性非典型肺炎。人型支原體、解脲脲原體和生殖道支原體可通過(guò)性接觸傳播，為性傳播疾病病原體，引起人類(lèi)非淋球菌性和非衣原體性泌尿生殖道感染。支原體無(wú)細(xì)胞壁，對(duì)青霉素、頭孢菌素類(lèi)抗生素不敏感，治療常用紅霉素、阿奇霉素、強(qiáng)力霉素等。四、立克次體嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，寄生在吸血節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)，能通過(guò)濾菌器的原核細(xì)胞型微生物。一、普氏立克次體1.生物學(xué)特性形態(tài)與染色：常用Giemsa染色，染成紫色或藍(lán)色?？乖瓨?gòu)造：某些立克次體與變形桿菌OX19和OX2株有共同的抗原成分，可發(fā)生交叉反應(yīng)立克次醫(yī)生（美國(guó)）主要立克次體與變形桿菌菌株抗原交叉現(xiàn)象立克次體變形桿菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次體++++-莫氏立克次體++++-恙蟲(chóng)病立克次體--+++Q熱柯克斯體---五日熱立克次體---2.臨床意義

普氏立克次體是流行性斑疹傷寒病原體。經(jīng)虱-人-虱方式傳播。虱叮咬病人后，其糞便排在人皮膚上，人因搔抓破損而引起感染。也可通過(guò)呼吸道和眼結(jié)膜感染。2周左右潛伏期后，驟然發(fā)病，常見(jiàn)高熱、頭痛、皮疹，可伴神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等臟器損害。病后免疫力持久。采用四環(huán)素類(lèi)抗生素和氯霉素治療，禁用磺胺類(lèi)藥物。二、斑疹傷寒立克次體形態(tài)和色、培養(yǎng)特性、抗原構(gòu)造等與普氏立克次體相似或相同。斑疹傷寒立克次體是地方性斑疹傷寒（鼠型斑疹傷寒）的病原體。鼠是主要貯存宿主。癥狀與流行性斑疹傷寒相似，但發(fā)病緩慢，病情輕，很少侵害神經(jīng)系統(tǒng)、心肌等。三、恙蟲(chóng)病立克次體恙蟲(chóng)病的病原體。傳染源是鼠類(lèi)（野鼠或家鼠），恙螨是傳播媒介又是貯存宿主?？梢鸢l(fā)熱、皮疹，全身淋巴結(jié)腫大及內(nèi)臟器官病變病原體所致疾病傳播媒介傳染源普氏立克次體流行性斑疹傷寒人虱人斑疹傷寒立克次體地方性斑疹傷寒鼠蚤鼠恙蟲(chóng)病立克次體恙蟲(chóng)病恙螨鼠Q熱柯克斯體Q熱蜱牛、羊四、防治原則預(yù)防滅虱、滅蚤、滅鼠、滅螨，改善環(huán)境。做好個(gè)人防護(hù)及個(gè)人衛(wèi)生。治療可選用氯霉素、四環(huán)素類(lèi)抗生素。注意：禁用磺胺類(lèi)藥物（可促其生長(zhǎng)）真菌及檢驗(yàn)

一類(lèi)具有典型細(xì)胞核，有核膜和核仁，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器，無(wú)根、莖、葉，不含葉綠素，無(wú)光合色素，細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和纖維素的單細(xì)胞或多細(xì)胞異養(yǎng)真核細(xì)胞型微生物。延時(shí)符真菌的生物學(xué)性狀一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)

真菌按形態(tài)、結(jié)構(gòu)可分為單細(xì)胞真菌和多細(xì)胞真菌兩大類(lèi)。1.單細(xì)胞真菌酵母菌：孢子，無(wú)菌絲類(lèi)酵母菌：芽生孢子，假菌絲單細(xì)胞真菌形態(tài)類(lèi)酵母菌—白假絲酵母菌芽生孢子假菌絲2.多細(xì)胞真菌絲狀菌（霉菌）：菌絲和孢子多細(xì)胞真菌形態(tài)菌絲hypha在環(huán)境適宜情況下由孢子長(zhǎng)出芽管，逐漸延長(zhǎng)呈絲狀，稱(chēng)菌絲。1.根據(jù)生長(zhǎng)在培養(yǎng)基上的菌絲的功能不同分為：營(yíng)養(yǎng)菌絲氣生菌絲生殖菌絲2.根據(jù)菌絲有無(wú)隔膜分為：有隔菌絲：多數(shù)為致病性真菌無(wú)隔菌絲孢子（spore)：

真菌的繁殖器官。一條菌絲可長(zhǎng)出多個(gè)孢子。在適宜條件下，孢子可發(fā)芽伸出芽管形成菌絲。區(qū)別要點(diǎn)真菌孢子細(xì)菌芽胞大小較大較小形態(tài)多種多樣圓形或橢圓形抵抗力不強(qiáng),60℃~70℃短時(shí)間即死強(qiáng),煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽胞作用為繁殖方式之一不是繁殖方式位置可在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外形成只在細(xì)胞內(nèi)形成真菌孢子與細(xì)菌芽胞的區(qū)別孢子的分類(lèi)有性孢子：同一或者不同菌體上兩性細(xì)胞融合減數(shù)分裂而成無(wú)性孢子：菌絲上細(xì)胞分化生成，不發(fā)生細(xì)胞融合。無(wú)性孢子分生孢子葉狀孢子孢子囊孢子芽生孢子厚膜孢子關(guān)節(jié)孢子小分生孢子大分生孢子大分生孢子芽生孢子厚膜孢子孢子囊孢子二、真菌的繁殖與培養(yǎng)（一）繁殖方式1.無(wú)性繁殖

芽管繁殖分裂繁殖出芽繁殖生隔繁殖

2.有性繁殖

有性繁殖過(guò)程一般包括下列三個(gè)階段：質(zhì)配、核配和減數(shù)分裂（二）培養(yǎng)特性1.生長(zhǎng)特點(diǎn)營(yíng)養(yǎng)要求不高低溫度（淺部真菌）低PH(4.0-6.0）高濕度和氧2.培養(yǎng)基沙保(Sabouraud)培養(yǎng)基類(lèi)酵母型菌落酵母型菌落3.菌落1.單細(xì)胞真菌酵母型菌落類(lèi)酵母型菌落（假菌絲）2.多細(xì)胞真菌絲狀菌落絲狀菌落三、真菌的抵抗力與變異性抵抗力較強(qiáng)，但不耐熱60℃1h可被殺死。對(duì)2%石炭酸、2.5%碘酒、0.1%升汞或10%甲醛溶液較敏感。

灰黃霉素、制霉菌素B、克霉素、酮康唑、伊曲康唑等對(duì)真菌有抑制作用。

形態(tài)、結(jié)構(gòu)變異、菌落變異和抗藥性變異。四、真菌的感染致病性真菌感染條件致病性真菌感染超敏反應(yīng)性疾病毒素中毒毒素與致癌

延時(shí)符真菌感染的檢驗(yàn)一、標(biāo)本的采集和處理

1.標(biāo)本的采集——根據(jù)真菌感染部位采集不同的標(biāo)本。取毛發(fā)、皮屑、指（趾）甲等標(biāo)本取痰液、膿汁、血液、腦脊液等標(biāo)本深部真菌感染淺部真菌感染標(biāo)本來(lái)源要適宜用藥前采集標(biāo)本嚴(yán)格無(wú)菌操作標(biāo)本量要充足立即送檢2.標(biāo)本采集注意事項(xiàng)臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)直接檢查免疫學(xué)檢查觀(guān)察菌落生化反應(yīng)染色鏡檢直接鏡檢3.檢驗(yàn)程序核酸檢測(cè)其他鑒定試驗(yàn)形態(tài)學(xué)檢查病理組織標(biāo)本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)鏡檢PASHE二、檢驗(yàn)方法(一)直接鏡檢標(biāo)本處理液：（1）KOH溶液：適于檢查致密的難以透明的材料。（2）生理鹽水：用于觀(guān)察真菌的出芽現(xiàn)象。（3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液：透明力較強(qiáng)，只限于不透明標(biāo)本。鏡檢（加溫）毛發(fā)或皮屑等注意真菌與其他混雜物的鑒別標(biāo)本+標(biāo)本處理液革蘭染色：各種真菌均為革蘭陽(yáng)性（圖1）。乳酸酚棉藍(lán)染色：染成藍(lán)色（圖2）。墨汁染色：背景染成黑色，菌體不著色（圖3）。熒光染色：熒光顯微鏡下發(fā)出熒光。糖原染色：多糖成分呈紅色，核為藍(lán)色，背景為淡綠色。（圖1）（圖3）（圖2）（一）基本條件1.常用工具平皿、試管、接種針、接種環(huán)、接種鉤、培養(yǎng)箱等。三、分離培養(yǎng)與鑒定2.培養(yǎng)基真菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適pH4.0～6.0。常用的培養(yǎng)基培養(yǎng)基名稱(chēng)培養(yǎng)基用途沙氏培養(yǎng)基真菌的常規(guī)培養(yǎng)放線(xiàn)菌酮-氯霉素瓊脂真菌的常規(guī)培養(yǎng)玉米粉吐溫-80瓊脂觀(guān)察白假絲酵母菌的厚膜孢子馬鈴薯葡萄糖瓊脂

觀(guān)察真菌菌落色素，用于鑒別尿素瓊脂生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)（紅色癬菌和石膏樣癬菌）心腦浸液葡萄糖血瓊脂顯色鑒定培養(yǎng)基深部真菌培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)與鑒定（二）培養(yǎng)方法僅用于培養(yǎng)生長(zhǎng)繁殖較快真菌。觀(guān)察真菌結(jié)構(gòu)及生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。多用于菌種傳代接種與保存。試管培養(yǎng)法大培養(yǎng)法小培養(yǎng)法玻璃棒載玻片培養(yǎng)基蓋玻片無(wú)菌蒸餾水(三)生長(zhǎng)現(xiàn)象

類(lèi)酵母型菌落絲狀菌落觀(guān)察菌落生長(zhǎng)速度、菌落大小、表面形態(tài)、性質(zhì)、顏色、邊緣、底部等。酵母型菌落糖（醇）類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)檢測(cè)真菌對(duì)單糖、多糖、醇類(lèi)等發(fā)酵情況。同化碳源試驗(yàn)檢測(cè)真菌對(duì)糖類(lèi)中的碳源利用能力的試驗(yàn)，主要用于鑒定酵母菌。同化氮源試驗(yàn)檢測(cè)真菌對(duì)氮源利用能力的試驗(yàn)，主要用于鑒定酵母菌。明膠液化試驗(yàn)?zāi)承┱婢哂忻髂z酶，可分解明膠蛋白，使其失去凝膠性質(zhì)而不能凝固。尿素分解試驗(yàn)?zāi)承┱婢哂心蛩孛?，可分解尿素?、常用生化試驗(yàn)(四)真菌的鑒定方法2、免疫學(xué)檢查皮膚試驗(yàn)提取真菌抗原，進(jìn)行皮內(nèi)注射或斑貼試驗(yàn)，觀(guān)察注射或試驗(yàn)部位有無(wú)紅腫硬結(jié)出現(xiàn)。血清學(xué)檢測(cè)檢測(cè)真菌的抗原或抗體，例如：膠乳凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫分析等。3、其它鑒定診斷方法(l)厚膜孢子形成試驗(yàn)接種玉米粉吐溫-80瓊脂

25℃孵育1~3天待測(cè)菌每天于顯微鏡下觀(guān)察應(yīng)用：白假絲酵母菌的鑒定。方法：結(jié)果：白假絲酵母菌在72小時(shí)內(nèi)可觀(guān)察到豐富的假

菌絲，假菌絲頂端見(jiàn)1～2個(gè)厚膜孢子。厚膜孢子假菌絲2.芽管形成試驗(yàn)

方法：待測(cè)菌+0.5～1ml血清37℃水浴2～3小時(shí)鏡檢應(yīng)用：白假絲酵母菌的鑒定。3、其它鑒定診斷方法結(jié)果：絕大部分白假絲酵母菌可形成典型放大鏡柄狀芽管。芽管3、其它鑒定診斷方法

動(dòng)物接種病理組織檢查核酸檢測(cè)真菌毒素的檢測(cè)用于分離病原性真菌、確定致病性、研究抗真菌藥物。用于深部真菌感染的診斷。用于真菌的分型鑒定。有ELISA、薄層層析法、高效液相色譜法等多種方法。G試驗(yàn)用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期診斷。（四）真菌藥物敏感性試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)?zāi)康闹笇?dǎo)臨床用藥。監(jiān)控耐藥菌株的發(fā)生和耐藥性變化。預(yù)期研究新藥的潛在療效。(一)臨床常用抗真菌藥物據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類(lèi)多烯類(lèi)：如兩性霉素B、制霉菌素等。吡咯類(lèi)：如酮康唑、伊曲康唑等。其他：如氟胞嘧啶。據(jù)作用機(jī)制分類(lèi)作用于真菌細(xì)胞膜：如兩性霉素B等。作用于真菌細(xì)胞壁：如尼可霉素Z等。干擾真菌DNA合成：如5-氟胞嘧啶等。其他：如大蒜新素及冰醋酸等。（二）酵母菌藥敏試驗(yàn)方法——微量稀釋法1．試驗(yàn)前準(zhǔn)備RPMI1640培養(yǎng)基（含L-谷氨酰胺、酚紅，不含碳酸氫鈉）培養(yǎng)基以培養(yǎng)基依次作10倍稀釋?zhuān)瑵舛确秶涸簙10倍于試驗(yàn)終濃度。藥液稀釋配成最高試驗(yàn)濃度的10倍（水溶性藥物）或100倍（脂溶性藥物）。藥物原液配制用培養(yǎng)基稀釋成1×103～5×103CFU/ml待檢菌液制備2．方法稀釋藥物將藥液加至無(wú)菌96孔微量板各孔接種0.1ml工作濃度的菌液35℃孵育48h（假絲酵母菌）或72h（新型隱球菌），觀(guān)察結(jié)果3．結(jié)果判斷

4.質(zhì)量控制

采用標(biāo)準(zhǔn)菌株作為每次測(cè)定質(zhì)控菌株，其MIC應(yīng)落在預(yù)期值范圍內(nèi)。MIC通常指完全抑制待測(cè)菌生長(zhǎng)（孔內(nèi)液體完全透明）的最低藥物濃度。吡咯類(lèi)和氟胞嘧啶：與對(duì)照孔相比50%生長(zhǎng)被抑制的最低藥物濃度。（二）酵母菌藥敏試驗(yàn)方法——紙片擴(kuò)散法1．試驗(yàn)前準(zhǔn)備培養(yǎng)基商品化含藥物紙片藥物紙片用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠁挝淮龣z菌液制備含葡萄糖和亞甲藍(lán)的M-H瓊脂（二）酵母菌藥敏試驗(yàn)方法——紙片擴(kuò)散法2．方法用無(wú)菌棉簽蘸取菌液

35℃孵育18~24小時(shí)若生長(zhǎng)不良可延長(zhǎng)至48小時(shí)貼上藥物紙片均勻涂布接種M-H瓊脂藥物紙片接種菌液

質(zhì)量控制——

標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)直徑必須質(zhì)控允許范圍。（二）酵母菌藥敏試驗(yàn)方法——紙片擴(kuò)散法

結(jié)果判斷讀取<80%抑制生長(zhǎng)時(shí)的抑菌環(huán)直徑，環(huán)內(nèi)的微小菌落（20%）可忽略不計(jì)。據(jù)抑菌環(huán)直徑判斷結(jié)果。延時(shí)符常見(jiàn)病原性真菌及檢驗(yàn)

淺部感染真菌一、皮膚癬真菌分表皮癬菌屬、毛癬菌屬和小孢子癬菌屬3個(gè)屬，可侵犯皮膚、指（趾）甲和毛發(fā)，引起人類(lèi)的體癬、股癬、手癬、足癬、甲癬、頭癬等。體癬股癬手癬一、皮膚癬真菌頭癬足癬甲癬表皮癬菌屬對(duì)人致病的是絮狀表皮癬菌。鏡檢可見(jiàn)大分生孢子、菌絲較細(xì)有分隔、厚膜孢子。絮狀表皮癬菌菌落絮狀表皮癬菌大分生孢子、厚膜孢子絮狀表皮癬菌菌落毛癬菌屬常見(jiàn)的致病菌有紅色毛癬菌、紫色毛癬菌、須毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌和許蘭毛癬菌。紅色毛癬菌菌落正面紅色毛癬菌菌落背面紫色毛癬菌菌落2.毛癬菌屬：須毛癬菌菌落斷發(fā)毛癬菌菌落許蘭毛癬菌菌落毛癬菌屬顯微鏡下可見(jiàn)大分生孢子、小分生孢子；菌絲形態(tài)多樣。紅色毛癬菌小分生孢子紫色毛癬菌菌絲紅色毛癬菌大分生孢子2.毛癬菌屬：斷發(fā)毛癬菌小分生孢子及菌絲許蘭毛癬菌菌絲須毛癬菌大、小分生孢子3．小孢子癬菌屬常見(jiàn)的致病菌有鐵銹色小孢子菌、石膏樣小孢子菌、犬小孢子菌等。鐵銹色小孢子菌菌落石膏樣小孢子菌菌落犬小孢子菌菌落3．小孢子癬菌屬鏡下可見(jiàn)菌絲、厚壁梭形大分生孢子。犬小孢子菌大分生孢子石膏樣小孢子菌大分生孢子鐵銹色小孢子菌菌絲（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集采集皮屑、甲屑、病發(fā)。2．檢驗(yàn)方法直接鏡檢：查找菌絲和孢子。分