DB11∕T 1806-2020 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 寄生蟲檢測

DB11北京市市場監(jiān)督管理局發(fā)布 驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲檢測與評(píng)價(jià)第5部分:實(shí)驗(yàn)用長爪沙鼠》，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改本文件起草單位：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國食品藥品檢定研究院、國家衛(wèi)生健康委科學(xué)中國科學(xué)院水生生物研究所、中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)、浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、北京康藍(lán)生物技術(shù)有限公司、北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦公室驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)協(xié)會(huì)、北京市標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、北京華阜康生王錫樂、劉文菊、齊靜、劉云波、魏強(qiáng)、向志光、劉先菊、黃瀾、李長龍、付瑞、岳秉飛、薩曉嬰、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲檢測本文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的寄生蟲學(xué)等級(jí)分類、檢測要求本文件適用于實(shí)驗(yàn)小型豬、實(shí)驗(yàn)豬、實(shí)驗(yàn)牛、實(shí)驗(yàn)羊、實(shí)驗(yàn)貓、實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿、實(shí)驗(yàn)下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動(dòng)物烈性傳染病病原和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)有重大干普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中未免疫特定的疫苗，且經(jīng)檢測不攜帶實(shí)驗(yàn)要求排除的特定病原微生物除普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染根據(jù)對(duì)微生物和寄生蟲控制的程度，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、無特定病原體級(jí)對(duì)待檢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進(jìn)行外觀普通級(jí)●●●●無特定病原體●●●●●●●●●●●普通級(jí)●●●●●●無特定病原體級(jí)●●●●●●●●●●●○●●●○●●●○●●普通級(jí)●●無特定病原體級(jí)●●●●●●●普通級(jí)●●無特定病原體級(jí)●●●●●●●●普通級(jí)●●無特定病原體級(jí)●●●●●●普通級(jí)●●●無特定病原體級(jí)●●●●●●●●●表7實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿各●●●●普通級(jí)無特定病原體級(jí)●●●●●●●●●●●●●○●○●○○○●●○○●○○○●●●●○○●○○○○●●●●●普通級(jí)●●●●無特定病原體級(jí)●●●●●●●●●●●●●●!!!!↓物的耐受劑量，可采用吸入性麻醉或注射麻醉，麻醉過程中應(yīng)隨時(shí)注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)。6.1.3釆血方法以及毛發(fā)、羽毛或皮屑、新鮮糞便的采樣方法參照NY/T541進(jìn)行。!!↓!↓!!>500樣品和送檢單一同送達(dá)具備檢測能力的實(shí)驗(yàn)室，送檢單應(yīng)寫明檢品名稱、品系、等級(jí)、血清樣品經(jīng)間接血凝實(shí)驗(yàn)（IndirectHemagglutinationAssay，IHA）、酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）或間接免疫熒光（Indirect固定液，乙醇，二甲苯，蘇木素，鹽酸，伊紅，中性樹脂，石蠟，姬姆薩染液，動(dòng)物組織從精神狀態(tài)、行為、被毛和天然孔分泌物對(duì)實(shí)驗(yàn)雞剖檢實(shí)驗(yàn)雞，進(jìn)行病理學(xué)大體觀察。觀察肝臟是否腫大，表面是否有黃褐色壞死灶——取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞盲腸，除去內(nèi)容物后取盲腸粘膜表面的刮取物于載玻片上，鹽水稀釋，顯微鏡下觀察是否有活動(dòng)的組織滴蟲——取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞的肝組織涂片進(jìn)行姬氏染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存——取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞的肝臟和盲腸組織制作組織切片并進(jìn)行H.E.染色，顯微鏡下觀察是否有組織CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3’）進(jìn)行PCR檢測，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳并測序分若有火雞組織滴蟲感染，典型病理變化為肝臟腫大，呈深紫褐色，表面有大小不一灶，壞死灶中央稍有下陷，有的壞死灶周圍有出血帶；盲腸外觀明顯腫大，觸之堅(jiān)硬，細(xì)不均，腸腔內(nèi)有干酪樣物充塞，可懷疑為陽性，需通過下列任意一種——若有火雞組織滴蟲感染，盲腸粘膜刮取物或肝臟抹片在顯微鏡油鏡下可見單個(gè)或成簇成直徑0.8cm～1cm大小圓形厚血膜。在同一玻片的另一區(qū)域，取約1μL～1.5μL的血量，使血滴與平置的載玻片接觸，并形成25°~35°夾角，待血液向兩側(cè)擴(kuò)展約2cm～2.5cm寬時(shí)，均在鏡下看到占據(jù)紅細(xì)胞的細(xì)胞核以外空間的蟲體，后者依據(jù)其發(fā)育階段不同呈現(xiàn)不同的D.1.1.1將待檢魚麻醉后放在解剖盤加一滴清水或生理鹽水，用鑷子將組織分散，加上蓋玻片，在然后將鰓小片逐片剪開，在體視顯微鏡下用兩根解剖針，把鰓絲逐條分開，仔細(xì)檢查，將每片鰓片的鰓上所有內(nèi)含物完全刮下，放在培養(yǎng)皿里，用清水稀釋、攪勻后，在解剖D.2.2眼球:采用水浸法，即將魚體的眼球取下，放在盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，待寄生蟲游離D.2.3體腔、臟器、生殖腺和鰾:首先采用肉眼觀察，看組織表面有沒有肉眼可見的白色包囊和寄生蟲；然后將體腔用生理鹽水沖洗，并盛在培養(yǎng)皿中，其他組織用生理鹽D.2.4腸道:先用肉眼檢查，看腸外壁有無白點(diǎn)，這些白點(diǎn)通常是微孢子蟲或粘孢子蟲的孢囊。腸道內(nèi)的寄生蟲檢測采用壓片法，先把腸外壁上的脂肪組織盡量除干凈，否則脂肪