GB∕ T 40348-2021 植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法（正式版）

ICS07.080CCSA40植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測(cè)定國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40348—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所、四川大學(xué)、甘肅中商食品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)有限公公司、甘肅省商業(yè)科技研究所有限公司。1GB/T40348—2021植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本文件規(guī)定了植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于辣椒及其制品中N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氫辣椒素含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1辣椒素類物質(zhì)capsaicinoid在辣椒果實(shí)中產(chǎn)生辣味的N-香草基酰胺類生物堿物質(zhì)的統(tǒng)稱。4原理5試劑或材料5.1.1無水硫酸鈉(Na?SO?)。5.1.2甲酸(CHOOH):色譜純。5.1.3甲醇(CH?OH):色譜純。5.2標(biāo)準(zhǔn)品5.2.2辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%;分子式：C?gH?NO?;CAS號(hào)：404-86-4。2GB/T40348—20215.3.1單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取N-壬酸香草酰胺、辣椒素、二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確至0.1mg),用甲醇溶解并配制成質(zhì)量濃度均為100mg/L的辣椒素類物質(zhì)單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃下避光保存?zhèn)溆茫行跒?個(gè)月。5.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I:分別準(zhǔn)確移取適量各辣椒素類物質(zhì)單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為0.100mg/L,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為1.00mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I,現(xiàn)配現(xiàn)用。5.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ:分別準(zhǔn)確移取適量各辣椒素類物質(zhì)單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為0.100mg/L,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為10.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶5.3.4低濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I,用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為15.0ng/mL、30.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、5.3.5高濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ,用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為150ng/mL、300ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、6儀器設(shè)備6.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000g。溫度可調(diào)20℃~80℃。6.5渦旋混勻器。6.7電動(dòng)粉碎機(jī)。取鮮辣椒(辣椒醬或半固態(tài)辣椒制品)約1kg,用組織搗碎機(jī)制成勻漿，混勻，制備好的試樣均分成取干辣椒(辣椒粉或固態(tài)辣椒制品)約250g,用電動(dòng)粉碎機(jī)粉碎過425μm(40目)篩，制備好的試樣均分成兩份，裝入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標(biāo)識(shí)，于0℃~4℃保存。3GB/T40348—20217.3辣椒油等油狀樣品8試驗(yàn)步驟旋混勻，于60℃水浴下超聲提取15min,然后在8000g下離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至100mL容量“于60℃水浴下超聲提取15min,……,待測(cè)”操作。液相色譜參考條件如下：b)流動(dòng)相：A為0.1%甲酸溶液，B為甲表1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/min流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)/%流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)/%0381148.2.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源：電噴霧離子源(ESI源);b)掃描方式：正離子模式；c)其他質(zhì)譜參考條件參見附錄A。8.2.3定性測(cè)定在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果樣品中待測(cè)物的色譜峰保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對(duì)應(yīng)峰的保留時(shí)間一致(相對(duì)誤差在士2.5%以內(nèi)),且樣品譜圖中待測(cè)物監(jiān)測(cè)離子的相對(duì)豐度和濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)豐度一致，允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表2定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差>20～50>10～20允許的相對(duì)偏差/%士508.2.4定量測(cè)定在相同實(shí)驗(yàn)條件下，依據(jù)樣品中各辣椒素類物質(zhì)的含量選擇合適質(zhì)量濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣分析，以待測(cè)物的定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，應(yīng)使樣品溶液中各待測(cè)物的質(zhì)量濃度在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，超過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線質(zhì)量濃度上限的樣品應(yīng)稀釋后進(jìn)樣分析。在8.2.1和8.2.2條件下，各辣椒素類物質(zhì)的參考保留時(shí)間參見附錄A中表A.1,總離子流圖及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖分別參見附錄B中圖B.18.3平行試驗(yàn)按8.1和8.2的規(guī)定對(duì)同一試樣進(jìn)行兩次平行測(cè)定。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中待測(cè)物質(zhì)含量按照式(1)計(jì)算：式中：w——試樣中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的待測(cè)物質(zhì)質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL);f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；m——試樣稱樣量，單位為克(g);計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。5GB/T40348—2021本方法測(cè)定N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氫辣椒素的檢出限和定量限參見表3。表3三種辣椒素類物質(zhì)的檢出限和定量限單位為毫克每千克化合物名稱檢出限定量限鮮辣椒、辣椒醬及半固態(tài)辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固態(tài)辣椒制品及辣椒油等油狀樣品鮮辣椒、辣椒醬及半固態(tài)辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固態(tài)辣椒制品及辣椒油等油狀樣品N-壬酸香草酰胺0.06350.3180.1270.635辣椒素0.06110.3050.1220.611二氫辣椒素0.06110.3050.1220.6116(資料性)c)干燥氣溫度：350℃;化合物名稱保留時(shí)間/min定量離子對(duì)定性離子對(duì)源內(nèi)碎裂電壓/V碰撞能量/VN-壬酸香草酰胺294.2/137.1294.2/122.0辣椒素306.1/137.1306.1/122.2二氫辣椒素308.2/137.1308.2/122.2三種辣椒素類物質(zhì)的LC-MS/MS總離子流圖和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖B.1三種辣椒素類物質(zhì)的LC-MS/MS總離子流圖見圖B.1。3標(biāo)引序號(hào)說明：1——N-壬酸香草酰胺；3—二氫辣椒素。圖B.1三種辣椒素的總離子流圖r/mint/min