SNP標記法鑒定油莎豆種質(zhì)資源、品種和純度技術(shù)規(guī)程

1SNP標記法鑒定油莎豆種質(zhì)資源、品種和純度技術(shù)規(guī)程GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程扦樣GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程3.1SNP標記singlenucleotide3.2種質(zhì)資源和品種鑒定中優(yōu)先選用的一套SNP引物，其3.3品種在DNA分子標記基因分型方面一致的程度，用供檢樣品中本品種2從樣品中隨機抽取10粒塊莖發(fā)苗。分單株剪取0.1g幼苗葉片用液氮研磨成粉末。將研磨粉末轉(zhuǎn)入2mL離心管，加入0.7mLCTAB提取緩沖液充分混勻。在55℃~65℃恒浴1h。加入0.7mL氯仿：異戊醇（24:1），上下輕搖5min。10000×g，室溫下離心10min。取上清液，加入上清液三分之冷異丙醇，上下輕搖5min，-20℃冰箱放置30min。10000×g，4℃離心10min。注：以上為推薦用于種質(zhì)資源和品種鑒定的DNA提取方法，其他能夠達到PCR擴增質(zhì)量要求的DNA提取方法都適用于4.2PCR擴增72℃延伸45s，30個循環(huán)，72℃10m4.3基因分型檢測），4,4數(shù)據(jù)分析與判定——差異位點數(shù)≥3，判定為不同品種；對利用附錄A中73組引物仍未檢測到≥3個差異位點數(shù)的樣品，必要時可增加篩選引物進34AACATGTCCCGGACTTTGCTAACTGCAGATGGGAGCATTAGAATCATTCCACAACTGGACTTTGACCAAATCCACAAAAGCTGAGTCCAATTGGGAGTTTGTTGAAATCAAGTGAGCAAGGCTACATCGTCCTCGTCGTAGATCAGTGAGAGAACTTTGCCTTACCATTAACATCTCGATCAGGGGTAGATGGTGAATTTAGATGCCGACCATACACAACATCATTGCAAGCAGAAACCGCTGAGAACTGGTACACAGAAAGAGCTCCCAGAAGCAAAAGGAAAACAGCCATCTGCAGACCCAATACCATTACGCAGAAGAAATGGGTCTAGCAGAAACCAATGGATGGATGAGGAAAGAACAAGCACAATCATCCGACCTCTAGTCCAGCGTTTATTATGCTCACTTCAATATGCGGTGAGGAT5AGATCATGGCAGAGTGGCTTTAACCGGACTAAAATAAGGGCAGGGAAGGAAAGAGTGAACATTTGTTCTTTACTCAGGCCTATGAACACTACGCATTGTGCAATTAGGGAGGAAGCCTGTCAAAGAGTCGGTGGTCTCTCTCTCAAATGTAAGCTTTTGACAAACCAGATATCCCTGACTCGTTCACATGCATGCAGAAGATGATGAGAGGAAATGCAGCTTTGCTATGATCATATTGTGATGGCAGCTGCAGGAGGAAACGTGATGACATTAACACCTCCAAGAGATCCACTTCAGTCGATAAAACAAGAGCATGGGGAATGTATCTGCACAA6AATCCAAATCTACTGCAGCGAAACTGTGATTCGATCTGTCACAATCCAAATCTACTGCAGCGAAAGAACTGTGATTCGATCTGTCACATGGGGAATGTATCTGCACAAAATAACCCATCCGAACCTAGCATTATTAGGGTTGTTGCTTGCTGGATACCACCATTGGAACCATACATCCTGAGGAATGGTTCTGACACTGAAGTGCCTCCAAACACTAAGCCAAATAGTGCTCGATCTGAAGGTTGAGAGACGTTTGAACAGTGGAGAGCGCCTTTTTATA7TCAATGTTATTTTCTGATATGTTCTCGGGCTAGTGAAACTTATGCAACGGTGGACCTAACTACATGATATATT[T/C]AGATAAGGGTTAAGCTAATTGAACCCCAAACTTTCCCCGGACTTGTACCCCGCAAAATTTCCATAATTCTCCAAAAAAGAAATTGTGCAAAGATCAATAATTTTATTTGAAATTAAGCATTTCGCTAAAAAAAAAA[A/T]ACAAATAATTTTTTTTTTTTGATTCATTGTGCTAATTATATATACTTCCAGAAAATAACACCACGAGTATCTAAACAGCTCGGAGGCTACACAGAAAAGCCGGCTAAATCTGTTTCCATGGAGAGATACAACA[G/A]ATCTTTAGCCAAGGTACTTACTTTCTTTTGTATAAACAACACTCGGATCATTGAAGTGAATCTACATAAATA8TCTATGTGCTGCAGTAAACTGAAATCTGGGACCCAGTCAAATACTCAATACAGACTGAGAATGTAACAA[T/C]TAGATCTGATTGTGTAAAATTGATCTGAGTTTGTACTATAGATGCTATGGACAGATATTCTATGGAAGCATCTGATCGTACGATATACTTGAAATTTAGAGAACGTGGTAACTCTGGGATAGCACATCAGCTTCC[A/G]TAATATTTAGTTCTCTAAGACCAAGGAGACTGTAGCCGGTAATGACTTTAGAGATTTTGCATTTTG8TCCAATTGAAGCCATCGCTGGTCGAGGCATTTACTATGCTATTCGCTGACCGGAAGGCTCTGCAAAGTG[T/C]GCCACTGGAGATGGAGATAACTCGGAAGATCGTTGTGAATTGAGGTTCATTTGTGCCTGAGCAGTTGTCATCCCTCCATATCCTCTGCAGCGCTGCACTGTGTAGGGCGAAATTTGAACTCATCTTGAGATCTGT[G/T]CTTGCTCAATCTTGAGATGATCTAACGGTTCACGCGCTACACAGTGCAGCGCTACAGAGGATGAG2TGAAATTTTAAGCTTCATCAGAAATTATTGTACCCCCTGGTCATGAGTCTAGCTAGCGTTCCTGCAAACATGT[T/G]AGCCAAAAAATGTTAACCCATGATCAATATATGCAGATCTAATTTTAGTTTTGCCGGTAAACGTAGAT2CTGTGAAGGAACTGCAGGATGAGAAGAATTAAGCAGCCAGATGGTATAAACGTACTGGCCAGACTTGAAACAG[C/T]GCTCACCCCATATGCAAATTAAACACCATTATTTGATATTGATTTTTCTGGACTTCTCATTCAAA5GTTCCACCTTATCTGCATTTGTCAGGTCATTGAATTTTTCCTCGAATGCTGAGGAAACGACTCGGGCTG[G/T]AAGAATTTTAGCAGGCTGAACATCTCGCCAAGGTTGTTCTGCAGGGGTGTCCCCGTCAATAAAACCCGC0GGCAGGGGATTAGGAAACTCGACGAATGGGTATTCGATTGGACTATTGGTATGAATGAGCAACACATT[G/GGA]GAAAGAAGAATATTCATACACTGCAAATCTAGAGTTCACACTTGATAGTTGATACAGATGTAAAA83TCCCCGCGGCTAGTTTGCAGCGCCAAGGTGCCCGTCCTTCACCATACACAACAAAGCAAGCTCCTTGCA[T/C]GACGTCCACCTCTAGGATCCCAGCAACGCACATCGTTGCTCCGCAAAGCAGTCCCTGCCACCTCGTCAAGTGATGCCAGTATAGGAACAGTATGTTCCATGAATACAAGTGATTCGTTTTGTTGTTATCTGCATTGTAA[C/A]GAAGGCGTTCTTAATTAGTAATTCTCGTATAAGAATATAATTACAAAAATTAAGATTTGTGAAAC3AGTGCGAGATGTACTCTTGCGTGCACTCCTCTGACATGCCACAGCAGGTGCACCCTCCACTTCTGATAT[A/G]GAGCTGAGTTTTGTCGACTCCTTCGCCTCCTTGCTCAAAAGAGAGGTCGGAAAGAGCCCGATGACTGAGAAGAGTTTAACGGTAGATTTACGCACCGCTGTTCAATGGTCAAGGTGCTGATTGAGCGGAGAGG[C/T]GGTGAGCTCACCGAGGCTCTTCAGAGAACCCCGACTGGAATTCTCAAGAAGCGCAGGGCACTATT1TCTTCAGGCAGCTGACACAGTCCCAAATCGACTACATGAATGACATCAGGAGCTGATCTACAACTACTG[T/C]TATGACACCAAGAGATTCAACGGCGCCATGAGTGCTACCTCCCTGCTTACTGATAAAGGCATGGT2CTTTATACCCTTTACAGCTTGTTCCTAATTAAATGAACTTTACCGATTCGATATCTATTCGTCTCTTAG[C/T]TGTCCCCAATTACAACCTTCCCTCTCCCCAATTTCTTTTATCTATATTATTTAAATGGAATAATTCAACAGCAACTATGCATGTGTGTTCTGTTCTCTTAATTAATTAATTAATGCTAATAATATAATATAATCTAC[T/C]CTAGCTAGCAAGCTGATGGAGCTGTTCAACCTTTTTGAACATAACAGCTAGGCCTAGGCCTAGGCATGGC6CAGAATTTTTTTCTTCTCATTTTGTTTTGGGAACATTTTCTTTTCCACCCTTTTAAAATTAAATGCACT[C/A]AAGTTCTCCTCTGAAACTTTCTAAAGCTGAAATTTCTTGACCAGATATAATTCAAACATAATAGC8CTAGTAACTTAATTAATCTTCAACATTTCAAGAAAACCGGGGAAAGCAAAATTTCACTGAATGATCCAATTGC[C/T]ATGCAAGTAACTAACACCTTCGAGCAACTGAGCCGCTTAACTTCGCTCGAGCTGAAGGGCTTAAT3GATTGGATTTCTGCAGGTAAACTGTTACAATCATCACCATCCGAGTCAGCTTTACCCATTTGCCTGGCC[G/A]GCAATGGACCGATATTAATGAATTTGCATCTGATTTGCTGAAAACCTTGACTTATGTTGAAAAGATGCGAAAGCGCTCCTACATGTTTTCCCTTTGACATTCGATTTCGGTCCCACCTTGCAAACCAAAGTCCACAACGCA[G/A]TCGCACCGTTGTACGAACCTCTGACCTCAACCACGAGCAGCAGCTCGCTCTCCTCCTCGACTCCGAGCTTGTGGCTATATATTTAATTAGGAGCTCCCCGGGAGCTTTGGCTGTCTGGAAAGAAAACCGCAGGC[A/G]TTTGAAATATCAACTTCTCTTCTTTTTCACTTGTATGGTGTTTAACTCCTGCTGAAGGCACAATGCTAG2CGAAAACACGCGGCAATTTCAAAATCGAGTTTGCTCGGCTAACCCCATCCAGAGCACATTCTTCTTCTTTCAG[C/G]CCATCATT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