注射用抗乙型肝炎轉(zhuǎn)移因子制造及檢定規(guī)程

注射用抗乙型肝炎轉(zhuǎn)移因子制造及檢定規(guī)程

RequirementsforAnti-HBVTransferFactorforInjection

本品用經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫的健康豬的脾臟和淋巴結(jié)，以凍融法破碎細(xì)胞，通過離心、超濾、巴氏消毒法等方法精制后制成的凍干制劑。1基本要求

1.1設(shè)施與生產(chǎn)質(zhì)量管理

按中國(guó)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求實(shí)施。

1.2原料及輔料

應(yīng)符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》或《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》的要求，未納入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于化學(xué)純。

1.3生產(chǎn)用水

生產(chǎn)用水源水應(yīng)符合國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)；純化水及注射用水應(yīng)符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

1.4生產(chǎn)用器具

直接用于生產(chǎn)的金屬或玻璃等器具，應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格清洗、去熱原質(zhì)處理或滅菌處理。2制造

2.1供體豬要求

2.1.1供體豬檢疫

供體豬應(yīng)檢測(cè)無豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、偽狂犬病毒、口蹄疫病毒和乙型腦炎病毒污染。如系經(jīng)疫苗免疫過的豬，應(yīng)進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果應(yīng)為陽性。

2.1.2對(duì)脾臟、淋巴結(jié)的要求

經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后抽血檢查HBsAg抗體滴度達(dá)1∶40以上或皮試陽性者可摘取脾臟或淋巴結(jié)，并在24小時(shí)內(nèi)放入-30℃中保存。有炎癥、化膿或壞死變質(zhì)的脾臟或淋巴結(jié)不得使用。2.2原液制備

2.2.1將新鮮或冷凍的脾臟及淋巴結(jié)在25℃左右去脂肪及結(jié)締組織，然后用純化水洗凈。

2.2.2細(xì)胞破碎

將洗凈的組織切成小塊，加入適量注射用水，用組織搗碎機(jī)破碎細(xì)胞，制成勻漿，加適量注射用水，混勻，置-20℃反復(fù)凍融5～8次，融化溫度不得超過37℃。

2.2.3離心分離

將凍融的勻漿離心（離心溫度4℃），去沉淀，留上清液備用。

2.2.4澄清過濾與超濾

上清液用0.45μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾，然后用截留分子量為5000道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾。

2.2.5污染病毒的滅活或去除

采用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的方法滅活或去除病毒，即為原液。凍存于-20℃或以下，保存期為2個(gè)月。2.3原液檢定

按3.1項(xiàng)進(jìn)行。2.4半成品制備

2.4.1配制與除菌

配制時(shí)加入適量甘露醇作為穩(wěn)定劑，用0.22μm微孔濾膜除菌過濾，即為半成品。

2.4.2分批

應(yīng)符合本版規(guī)程通則《生物制品分批規(guī)程》的有關(guān)規(guī)定。2.5半成品檢定

按3.2項(xiàng)進(jìn)行。2.6成品制備

2.6.1分裝及凍干

應(yīng)符合本版規(guī)程通則《生物制品分裝規(guī)程》的有關(guān)規(guī)定。

2.6.2規(guī)格

每支含多肽2mg。

2.6.3包裝

應(yīng)符合本版規(guī)程通則《生物制品包裝規(guī)程》的有關(guān)規(guī)定。3檢定

3.1原液檢定

3.1.1無菌試驗(yàn)

按本版規(guī)程通則《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》A項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

3.1.2pH值

在20℃±2℃測(cè)定，pH值應(yīng)為6.5～7.5。

3.1.3蛋白質(zhì)反應(yīng)

取制品2ml，加20%磺基水楊酸2ml應(yīng)呈陰性反應(yīng)。

3.1.4細(xì)菌內(nèi)毒素

按本版規(guī)程通則《生物制品細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。應(yīng)小于10EU/支。

3.1.5多肽含量

應(yīng)不低于1.0mg/ml。

3.1.6核糖含量

應(yīng)不低于70μg/ml。

3.1.7特異活性試驗(yàn)

方法見附錄。未粘附細(xì)胞抑制指數(shù)（NAI）應(yīng)不低于30%。3.2半成品檢定

3.2.1細(xì)菌內(nèi)毒素

按本版規(guī)程通則《生物制品細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行，應(yīng)小于10EU/支。

3.2.2無菌檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》A項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

3.2.3pH值

在20℃±2℃測(cè)定，pH值應(yīng)為6.5～7.5。3.3成品檢定

除水分外，其余項(xiàng)目按制品標(biāo)示量（2.0ml）加入滅菌注射用水溶解后進(jìn)行檢定。

3.3.1鑒別試驗(yàn)

用SEC-HPLC法：色譜柱以適合分離多肽的色譜用凝膠為填充劑；流動(dòng)相為0.1mol/LPB-0.1mol/L硫酸鈉-0.05%疊氮鈉，pH7.0；上樣量20μl，用波長(zhǎng)260nm檢測(cè)，本品色譜峰應(yīng)與對(duì)照品一致。

3.3.2外觀

應(yīng)為白色或微黃色疏松體，加入滅菌注射用水后應(yīng)迅速溶解為澄明液體，不得含有肉眼可見異物或搖不散沉淀。

3.3.3pH值

在20℃±2℃測(cè)定，pH值應(yīng)為6.5～7.5。

3.3.4水分

應(yīng)不高于3.0%（W/W）。

3.3.5多肽含量

應(yīng)不低于1.0mg/ml。

3.3.6核糖含量

應(yīng)不低于70μg/ml。

3.3.7分子量及組分測(cè)定

用SEC-HPLC法：色譜柱以適合分離多肽的色譜用凝膠為填充劑；流動(dòng)相為0.1mol/LPB-0.1mol/L硫酸鈉-0.05%疊氮鈉，pH7.0；上樣量20μl，用波長(zhǎng)260nm檢測(cè)，同時(shí)做低分子量標(biāo)準(zhǔn)多肽，不得檢出分子量為10KD以上的組分。

3.3.8特異活性試驗(yàn)

未粘附細(xì)胞抑制指數(shù)（NAI）應(yīng)不低于30%。

3.3.9蛋白質(zhì)反應(yīng)

取制品2ml加20%磺基水楊酸2ml，應(yīng)呈陰性反應(yīng)。

3.3.10無菌檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》A項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

3.3.11細(xì)菌內(nèi)毒素

按本版規(guī)程通則《生物制品細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行，應(yīng)小于10EU/支。

3.3.12異常毒性檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品異常毒性試驗(yàn)規(guī)程》中小鼠試驗(yàn)項(xiàng)進(jìn)行。

3.3.13外源病毒污染檢查

用動(dòng)物病毒敏感的細(xì)胞（如BHK21），盲傳3代，結(jié)果應(yīng)呈陰