藥物鑒別試驗(yàn)

關(guān)于藥物鑒別試驗(yàn)第一節(jié)鑒別的定義與目的中國(guó)藥典2010年版定義定義：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)巍！镒⒁猓鸿b別試驗(yàn)方法僅證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所標(biāo)示的藥物，而非對(duì)未知物進(jìn)行定性分析。（目的）第2頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月意義：它是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首項(xiàng)任務(wù)，只有在藥物鑒別無(wú)誤的情況下，進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定等分析才有意義。性質(zhì)：藥物鑒別試驗(yàn)的試驗(yàn)方法雖有一定的專(zhuān)屬性，但不足以確證其結(jié)構(gòu)，因此不能賴(lài)以鑒別未知物。第3頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月第二節(jié)鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目性狀（Description)一般鑒別試驗(yàn)

（generalidentificationtest）專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)

（specificidentificationtest）第4頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月（一）性狀藥物的性狀（description）反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀(guān)、溶解度和物理常數(shù)等。1.外觀(guān)：指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。2.溶解度：藥典采用“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來(lái)描述藥品在不同溶劑中的溶解性能。第5頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月例子：CHP2010中鹽酸異丙嗪的性狀描述：本品為白色或乳白色結(jié)晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。鹽酸異丙嗪片的性狀描述：本品為糖衣片，除去包衣后顯白色。色澤晶型聚集狀態(tài)氣味其它第6頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月鹽酸異丙嗪（英語(yǔ)：Promethazine，又名鹽酸普魯米近(PromethazineHydrochloride)或非那根(Phenergan)）是一種常見(jiàn)的止咳藥物，是一種抗組織胺藥，能競(jìng)爭(zhēng)性阻斷組胺H1受體，對(duì)抗組胺所致之毛細(xì)血管擴(kuò)張，并降低其通透性。因此，能夠平復(fù)因?yàn)闅夤苁艽碳ざ鸬目人浴?/p>

第7頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月水楊酸阿司匹林外觀(guān)白色細(xì)微的針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無(wú)臭或幾乎無(wú)臭白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無(wú)臭或微帶醋酸臭溶解度在乙醇或乙醚中易溶；

在沸水中溶解；

在三氯甲烷中略溶；在水中微溶在乙醇中易溶；

在三氯甲烷或乙醚中溶解；

在水或無(wú)水乙醚中微溶；

在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解解熱鎮(zhèn)痛藥第8頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月3.物理常數(shù):

不僅對(duì)藥品具有鑒別意義，也反映了該藥品的純雜程度。藥典收載的物理常數(shù)包括：相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。水楊酸阿司匹林熔點(diǎn)158-161℃135-138℃（1）熔點(diǎn)：固體→液體的溫度第9頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm且每1mL中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用以區(qū)別藥品、檢查純度或測(cè)定制劑的含量。維生素C的比旋度測(cè)定：20.5°~21.5°例子手性（2）比旋度第10頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月[α]為比旋度；α為旋光度；l為光程長(zhǎng)短（dm）；c為每100ml中含有干燥品物質(zhì)重量（g）第11頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月（3）吸收系數(shù)：在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱(chēng)為吸收系數(shù)。有兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。后者是中國(guó)藥典收載的方法，它是指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1％（W/V)，厚度為lcm時(shí)的吸收度，用表示，用于考查藥品的質(zhì)量，定量分析。第12頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月幾種常見(jiàn)喹諾酮類(lèi)藥物的紫外吸收特征藥物介質(zhì)λmax(nm)諾氟沙星0.1mol/LNaOH2731098司帕沙星0.025mol/LNaOH291691洛美沙星0.1mol/LHCl287975吡哌酸0.1mol/LHCl2751630氧氟沙星0.1mol/LHCl226；294918甲磺酸培氟沙星0.1mol/LHCl2771001第13頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月常見(jiàn)的氟喹諾酮類(lèi)藥物第14頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月喹諾酮類(lèi)結(jié)構(gòu)通式A、B環(huán)稠合而成A環(huán)：芳香雜環(huán)，4-酮-3-羧酸吡啶衍生物X：C原子或雜原子N：有取代基B環(huán)：芳環(huán)、雜環(huán)（含取代基）第15頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月(二)一般鑒別試驗(yàn)（generalidentificationtest）

依據(jù)某一類(lèi)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)?。無(wú)機(jī)藥物：藥物中的陰離子和陽(yáng)離子的特殊反應(yīng)；有機(jī)藥物：典型的官能團(tuán)反應(yīng)。一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類(lèi)藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物。通常一般鑒別試驗(yàn)不適用于數(shù)種化學(xué)藥物的混合物鑒別或在有干擾物質(zhì)存在時(shí)鑒別。第16頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月一般鑒別試驗(yàn)項(xiàng)目

丙二酰脲類(lèi)：苯巴比妥芳香第一胺類(lèi)：對(duì)乙酰氨基酚托烷生物堿類(lèi)：硫酸阿托品有機(jī)酸鹽：無(wú)機(jī)金屬鹽類(lèi)：無(wú)機(jī)酸鹽：有機(jī)氟化物類(lèi)：氟康唑鈉、鉀、鋰、鎂、鐵、鈣、。。。水楊酸、苯甲酸等亞硫酸、亞硫酸氫鹽等第17頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月苯巴比妥：用作鎮(zhèn)靜和催眠藥物，適用于治療神經(jīng)過(guò)度興奮引起的失眠癥，能引起安穩(wěn)的睡眠。但不宜長(zhǎng)期服用，因其會(huì)引起全身無(wú)力、嘔吐、頭痛等副作用。對(duì)乙酰氨基酚：鎮(zhèn)痛解熱藥。常用于發(fā)熱、頭痛和其他輕微疼痛。硫酸阿托品：抗膽堿藥，用于胃腸道、膽絞痛，散瞳檢查驗(yàn)光，角膜炎，有機(jī)磷農(nóng)藥中毒、感染性休克等綜合癥的治療。氟康唑：是治療真菌感染的一種藥物，為廣譜抗真菌藥，對(duì)人和動(dòng)物的真菌感染均有治療作用，目前市場(chǎng)上有片劑、膠囊、粉針劑和注射液幾種劑型。

第18頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月1.有機(jī)氟化物（P72）有機(jī)氟化物變成無(wú)機(jī)氟化物第19頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月氧瓶燃燒法是將試樣包在無(wú)灰濾紙內(nèi)，點(diǎn)燃后，立即放入充滿(mǎn)氧氣的燃燒瓶中，以鉑絲（或鎳鉻絲）作催化劑，進(jìn)行燃燒分解，燃燒產(chǎn)物被預(yù)先裝入瓶中的吸收液吸收，試樣中的鹵素、硫、磷、硼、金屬分別形成鹵離子、硫酸根離子、磷酸根離子、硼酸根離子及金屬氧化物而被溶解在吸收液中。然后，根據(jù)各個(gè)元素的特點(diǎn)采用一般方法（通常是容量法）來(lái)測(cè)定其中的各個(gè)元素的含量。第20頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月2.有機(jī)酸鹽FeCl3反應(yīng):②加稀HCl，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液。①中性時(shí)呈紅色酸性時(shí)呈紫色水楊酸鹽第21頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月取供試品中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，即生成游離銀并附在試管內(nèi)壁形成銀鏡。酒石酸鹽第22頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月3.芳香第一胺類(lèi):橙黃到猩紅色第23頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月4.托烷生物堿類(lèi):Vitali反應(yīng)托烷生物堿均有莨菪酸結(jié)構(gòu)醌型產(chǎn)物Vitali反應(yīng)莨菪酸的特征反應(yīng)

第24頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月硫酸阿托品

--生物堿類(lèi)抗膽堿藥

第25頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月臨床應(yīng)用內(nèi)臟（特別是胃腸）絞痛擴(kuò)瞳、遺尿、盜汗、流涎癥、緩慢性心律失常、抗休克有機(jī)磷農(nóng)藥（膽堿酯酶抑制劑）中毒等第26頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月結(jié)構(gòu)特點(diǎn)α位莨菪醇β位偽莨菪醇內(nèi)消旋無(wú)旋光性莨菪烷骨架153三個(gè)手性碳莨菪酸天然(-)-莨菪酸為S-構(gòu)型莨菪堿酯α-羥甲基苯乙酸第27頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月5.無(wú)機(jī)金屬鹽:焰色反應(yīng)鑒定。（P74）

鈉黃鉀紫鈣磚紅鋇黃綠

另外銨鹽的檢測(cè):第28頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月6.無(wú)機(jī)酸根的鑒別:氯化物:硝酸銀鑒定法以及二氧化錳氧化法硫酸鹽:氯化鋇鑒定法以及醋酸鉛鑒定法以及鹽酸排除法硝酸鹽:硫酸及硫酸亞鐵顯棕色法與銅反應(yīng)生成紅棕色蒸氣高錳酸鉀排除法第29頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月（三）專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)

是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)，它是根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來(lái)鑒別藥物真?zhèn)?。在第六章以后?huì)詳細(xì)講解。例子:同屬巴比妥類(lèi)使溴褪色硫化鉛沉淀注意與一般鑒別試驗(yàn)的區(qū)別★共性中找尋個(gè)性差異第30頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月加碳酸鈉試液煮沸后放冷，加過(guò)量稀硫酸，析出白色沉淀，并有醋酸臭味+H2SO4CH3COOH第31頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月藥物鑒別一般鑒別專(zhuān)屬鑒別以某些類(lèi)別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù),根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別,可以區(qū)別不同藥物類(lèi)別。在一般鑒別的基礎(chǔ)上,利用各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異來(lái)鑒別藥物,可以區(qū)別同類(lèi)藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物單體。第32頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月第三節(jié)鑒別方法化學(xué)鑒別法呈色反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法

氣體生成反應(yīng)鑒別法測(cè)定生成物的熔點(diǎn)使試劑褪色的鑒別法維C應(yīng)用少原則：反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯，具有明確的原理第33頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月1.呈色反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀(guān)測(cè)的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗(yàn)中最為常用的反應(yīng)類(lèi)型有：（1）三氯化鐵呈色反應(yīng)：一般都含有酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基；（2）異羥酸鐵反應(yīng)：一般多為芳酸及其脂類(lèi)、酰胺類(lèi)；第34頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月（3）茚三酮呈色反應(yīng)：氨基酸及氨基糖苷；（4）重氮化一偶合顯色反應(yīng)：一般都有芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基；第35頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月例：葡萄糖的鑒別——呈色反應(yīng)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，緩緩滴入微溫的堿性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀第36頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月斐林（Fehling）試驗(yàn)斐林溶液是含硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液，它能使脂肪醛和還原性糖發(fā)生氧化，同時(shí)生成紅色氧化亞銅沉淀。但不能氧化芳香醛和非還原性糖。第37頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月2.沉淀生成反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成不同顏色和具有特殊形狀的沉淀。常用的沉淀反應(yīng)有：（1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)：在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀；（2）與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)：這類(lèi)藥物多為生物堿及其鹽和具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽；第38頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月硝酸銀——丙二酰脲類(lèi)、氯化物、微C銀鏡反應(yīng)——異煙肼氧化亞銅——葡萄糖銅鹽——磺胺類(lèi)三氯化鐵——苯甲酸鹽重金屬離子——利多卡因生物堿沉淀劑——氮雜環(huán)類(lèi)第39頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月3.熒光反應(yīng)鑒別法常用的熒光發(fā)射形式有以下類(lèi)型：（1）藥物本身（2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后（3）藥物和溴反應(yīng)后（4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；第40頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月4.氣體生成反應(yīng)鑒別法胺類(lèi)藥物、酰脲類(lèi)藥物以及某些酰胺類(lèi)藥物：經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；含硫的藥物：可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體；含碘有機(jī)藥物：經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類(lèi)藥物：經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。第41頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月光譜鑒別法UV鑒別法IR鑒別法NIR鑒別法AAS鑒別法NMR鑒別法MS鑒別法XRD鑒別法紫外近紅外紅外原子吸收核磁共振質(zhì)譜法X射線(xiàn)衍射第42頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月1.紅外光譜法專(zhuān)屬性強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合于結(jié)構(gòu)復(fù)雜、細(xì)微差別同類(lèi)藥物，如磺胺類(lèi)、甾體激素類(lèi)和抗生素類(lèi)藥品。鑒別方法：中國(guó)藥典和BP均采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法；USP采用對(duì)照品法。第43頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月第44頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月2.紫外光譜法★光譜簡(jiǎn)單，專(zhuān)屬性差?！锍Ｓ玫姆椒ㄓ校?/p>

（1）測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)；

（2）規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度；

（3）規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法；

（4）規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法；

（5）經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。

以上方法可以單個(gè)應(yīng)用，也可幾個(gè)結(jié)合起來(lái)使用，以提高方法的專(zhuān)屬性。第45頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月

示例一取色甘酸鈉，加磷酸鹽緩沖液（pH7.4）溶解并稀釋成每1ml中約含10μg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄IVA）測(cè)定，在238nm與326nm波長(zhǎng)處有最大吸收。對(duì)比吸收光譜特征參數(shù)第46頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月

示例二取對(duì)氨基水楊酸鈉250mg，加1mol/L氫氧化鈉溶液3mL，溶解后轉(zhuǎn)移至500mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。精密吸取5mL溶液置于內(nèi)含pH7磷酸鹽緩沖液12.5mL的250mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即為供試品溶液。另配制相同濃度緩沖溶液的空白對(duì)照液。于265

2nm和295

2nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A265和A295，規(guī)定A265/A295的值應(yīng)在1.50～1.56之間。對(duì)比規(guī)定吸收波長(zhǎng)的吸收度比值第47頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月

示例三

USP(30)采用對(duì)照品法，將樣品與對(duì)照品按同法處理，在200400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描兩溶液，要求在相同的波長(zhǎng)處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的限度內(nèi)。

阿替洛爾的紫外光譜鑒別：“本品50μg/ml甲醇溶液顯示的紫外光譜圖與相同條件下測(cè)得的USP阿替洛爾參考標(biāo)準(zhǔn)品的紫外光譜圖一致”對(duì)比吸收光譜一致性第48頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月色譜鑒別法TLC鑒別法HPLC鑒別法GC鑒別法第49頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月1.薄層色譜法ChP2010中對(duì)TLC鑒別法的要求對(duì)照品供試品對(duì)照品混合供試品供試品結(jié)構(gòu)類(lèi)似品供試品混合結(jié)構(gòu)類(lèi)似品比移值+顏色綜合考慮一致性實(shí)驗(yàn)中考慮：供試品/對(duì)照品；薄層板；展開(kāi)劑；顯色劑第50頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月2.HPLC和GC法一般規(guī)定按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。要求供試品和對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)一致。

內(nèi)標(biāo)法時(shí)，要求藥物與內(nèi)標(biāo)物峰的保留時(shí)間比值也應(yīng)相同。第51頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月顯微鑒別法主要用于中藥及其制劑的鑒別第52頁(yè),共61頁(yè)，星期六，2024年，5月生物學(xué)鑒別法利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有關(guān)技術(shù)來(lái)鑒定藥物品質(zhì)的一種方法,主要用于抗生素、生物藥物以及中藥的鑒別,通常分為生物效應(yīng)鑒別法和