義翹講堂《生物層干涉（BLI）技術(shù)在蛋白抗體研發(fā)生產(chǎn)及質(zhì)控中的應(yīng)用》

北京義翹神州科技股份有限公司生物層干涉（BLI）技術(shù)在蛋白/抗體研發(fā)、生產(chǎn)及質(zhì)控中的應(yīng)用雜交瘤上清快速篩選抗體/蛋白定量穩(wěn)定株開發(fā)條件優(yōu)化抗原-抗體動(dòng)力學(xué)&親和力蛋白/抗體表征、分析（生物活性&表位）QC放行：生產(chǎn)批次間一致性從研發(fā)到生產(chǎn)質(zhì)控，BLI貫穿生物試劑研發(fā)的每一步義翹神州CONTENT前期粗樣品親和力篩選及濃度監(jiān)控1純化蛋白/抗體的表征分析及質(zhì)量檢測(cè)2檢測(cè)服務(wù)案例分析3義翹神州前期粗樣品親和力篩選及濃度監(jiān)控01義翹神州雜交瘤上清抗體親和力快速篩選SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.

AMC(Anti-mIgGFcCapture)抗體上清稀釋2倍后進(jìn)行使用

40588-V07E35

107.8nMELISA44OCTET41162813義翹神州培養(yǎng)上清抗體濃度檢測(cè)SampleIDBindingRateWellConc.(μg/ml)Mouse-IgG1standard0.075320.040312.80.02065.120.01092.050.00720.81920.00280.3277標(biāo)準(zhǔn)曲線細(xì)胞上清檢測(cè)結(jié)果SampleIDBindingRateWellConc.DilutionFactorSampleConc.(μg/ml)ELISA定量（μg/ml）22STD2A-50-10.062825.25126.2110.722STD2A-50-20.0623.75118.4110.322STD2A-50-DMA-10.063725.75128.6112.422STD2A-50-DMA-20.066927.55137.7108.422STD2A-53-10.02546.9953553.622TA24-4-20.02567.06535.348.222TA24-4-DMA-10.02175.54527.720.822TA24-4-DMA-20.02346.23531.225.822STD2-1070.02496.7953427.522STD2A-54-10.036311.2556.278.022STD2A-54-DMA-20.038712.256178.4義翹神州SampleIDBindingRateWellConc.(μg/ml)牛IgG標(biāo)準(zhǔn)品0.00111.660.00233.330.00406.650.009013.30.021426.60.043953.2SampleIDBindingRateWellConc.(μg/ml)百分比QC-13.3μg/ml0.009812.9797.5%QC-26.6μg/ml0.021927.30102.6%SampleID牛IgG質(zhì)量（g/L）稀釋倍數(shù)BindingRateSampleConc.(μg/ml)A品牌血清處理前14.30310000.004114.920000.007614.41處理后--40.00340.0478B品牌血清處理前4.184000.00153.38000.00143.87處理后--40.00390.0519胎牛血清牛IgG濃度檢測(cè)義翹神州純化蛋白/抗體的表征分析及質(zhì)量檢測(cè)02義翹神州ACE2（mFc）&OmicronRBD(His)親和力測(cè)定SensorTypeLoadingSampleIDSampleIDConc.(nM)ResponseKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)FullR^2proAACE2mFcOmicronRBD(His)44.80.19843.444E-094.389E+051.511E-030.995917.90.13387.160.07512.870.03271.150.0133固化同樣的配體，檢測(cè)同一分析物的不同濃度需要加入一個(gè)零濃度，作為referencewell扣除多濃度梯度曲線，globalfitting，得到不同的KD，Kon，Koff義翹神州注：1.需要樣品量較大，因?yàn)橐玫斤柡蜐舛龋?.盡量選擇固化高度（飽和信號(hào)）相近的抗體比較。

MAb1MAb2MAb3MAb4MAb5MAb6MAb1-5.11%21.66%7.89%1.95%11.36%MAb29.23%-33.69%6.24%7.62%24.55%MAb343.56%33.21%-51.02%83.99%12.65%MAb43.58%5.66%89.26%-86.35%57.68%MAb551.22%40.65%95.43%8.09%-45.07%MAb632.12%2.11%5.65%7.98%73.12%-抑制率：60%-100%：完全不競(jìng)爭(zhēng)20%-60%：部分競(jìng)爭(zhēng)<20%：完全競(jìng)爭(zhēng)，若有一個(gè)方向達(dá)到這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，則認(rèn)為兩個(gè)抗體有競(jìng)爭(zhēng)

先檢測(cè)1（ligand）與2和3（analyte）間單獨(dú)的相互作用

2需要于1結(jié)合比較強(qiáng)

2樣品需要飽和

比較3在有無(wú)2的情況下的信號(hào)FirstantibodySecondantibody抗體表位分析：不同SARS-CoV-2Spikeantibody與SARS-CoV-2SpikeRBD做epitopebinning優(yōu)勢(shì)：快速無(wú)需標(biāo)記用量少可回收

可做粗樣品

配套軟件分析義翹神州

Anti-flagantibody批次間一致性109143-MM13Lot1109143-MM13Lot2109143-MM13Lot3109143-MM13Lot4KD=

3.59E-09KD=

3.19E-09KD=

2.97E-09KD=3.24E-09SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.Analyte

AMC(Anti-mIgGFcCapture)

MouseAbs

2μg/mL

CT026-H0323H義翹神州檢測(cè)服務(wù)案例分析03義翹神州關(guān)于“北京義翹神州”服務(wù)內(nèi)容檢測(cè)項(xiàng)目周期交付內(nèi)容結(jié)合、篩選、表征抗體與抗原親和力測(cè)定1-2周項(xiàng)目報(bào)告抗體與FcγRs/FcRn/C1q親和力測(cè)定原始數(shù)據(jù)蛋白與蛋白親和力測(cè)定蛋白與小分子親和力測(cè)定上清抗體親和力排序graphpad作圖EpitopeBinning客戶需提供提供名稱、濃度、分子量、種屬和標(biāo)簽等信息（信息越詳細(xì)越好比如抗體的輕重鏈亞型、是否容易形成聚體以及已知的結(jié)合價(jià)等）；特殊要求AR2G需要足夠的游離氨基。濃度>0.2mg/mL，純度>90%，每對(duì)樣品各自用量>50ug，表位分析用量加倍。Buffer：如果需要AR2G不要含有Tris；不要含有高濃度的高聚物物質(zhì)；NTA傳感器的固化緩沖液中不得含有EDTA；APS傳感器的固化緩沖液不得含有任何去污劑。義翹神州義翹神州抗體生物活性分析：Fc受體及C1q結(jié)合活性hIgG1VSFcRIIA(CD32a)hIgG1VSFcRIIIB(CD16b)hIgG1VSFcRI(CD64)hIgG1VSFcRnhIgG1VSC1qSensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)AR2G(AmineReactive2ndGen)hIgG15μg/mL

C1q64.9~1039nM0.1644-0.57261.17E+053.01E-032.58E-08KD=1.5E-6KD=1.58E-07KD=1.76E-09KD=1.69E-08KD=2.58E-08義翹神州膜蛋白與抗體親和力檢測(cè)SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)AHC(Anti-hIgGFcCapture)人源化抗體10μg/mL

膜蛋白125~2000nM0.0476-0.38398.32E+038.27E-049.93E-08義翹神州蛋白與外泌體親和力測(cè)定外泌體：直徑50~200nm之間，膜上帶有某個(gè)白介素受體SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)HIS1K(Anti-Penta-HIS)xx白介素10μg/mL

外泌體0.0023-0.0181nM0.2328~0.51271.75E+091.03E-035.89E-13義翹神州多肽與抗體親和力分析SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)proA兔單抗5μg/mL多肽110~886nM0.0386-0.13465.83E+045.16E-048.85E-09關(guān)于“北京義翹神州”堅(jiān)持自主研發(fā)生產(chǎn)打造中國(guó)生命科學(xué)研究“一站式”試劑與服務(wù)支撐平臺(tái)人才與設(shè)施榮譽(yù)資質(zhì)設(shè)施