CAR-T細胞治療研發(fā)進展和相關(guān)靶點介紹

OverviewofCAR-TCellTherapyandRelatedHotTargets北京義翹神州科技股份有限公司（美國子公司）CAR-T細胞治療研發(fā)進展和相關(guān)熱門靶點介紹CAR-T全球進展介紹1CAR-T分子設(shè)計與生產(chǎn)2CAR-T重要靶點介紹3CAR-T開發(fā)前景4主要內(nèi)容義翹神州CAR-T全球進展介紹01義翹神州

細胞療法和CAR-T10.3390/diseases10030060/treatment-types/adoptive-cell-therapyModifiedNon-Modified義翹神州Forecastin2023:600morepipelines,bringtotalto3300Forecastin2024:760morepipelines,bringtotalto4000600760細胞療法研發(fā)管線快速增長600760義翹神州Dataasof04/2022/10.1038/d41573-022-00095-1細胞療法研發(fā)管線布局義翹神州/10.1038/d41573-022-00095-1Increasingnumberofpipelines細胞療法試驗數(shù)目快速增長Dataasof04/2022義翹神州研發(fā)機構(gòu)全球分布MainlyinChina,US,EuroNomajorchange/10.1038/d41573-022-00095-1義翹神州2017，F(xiàn)DA批準第一款CAR-T至今，6款于美國獲批，2款于中國獲批FDANMPA201720182019202020212022義翹神州CAR-T分子設(shè)計與生產(chǎn)02義翹神州CAR-T分子構(gòu)建10.1080/21645515.2017.1291473義翹神州CAR-T分子發(fā)展10.1038/nrclinonc.2015.187義翹神州CAR-T細胞免疫療法流程采集患者的外周血并提取免疫T細胞；利用基因工程技術(shù)給T細胞加入一個既能識別腫瘤細胞，又能激活T細胞靶向殺死腫瘤細胞的嵌合抗體，使T細胞變身為CAR-T細胞；將經(jīng)過基因改造的T細胞進行體外培養(yǎng)，使其達到符合治療要求的細胞數(shù)量（一般一個病人需要幾十億，甚至上百億個CAR-T細胞）；對CAR-T細胞進行質(zhì)量檢測；把擴增好的高質(zhì)量CAR-T細胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，靶向殺死癌細胞，同時避免對正常組織的損傷。與用藥請外援不同，CAR-T細胞免疫療法其實是改善裝備武裝自己從而使敵人致命的方法。CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州從患者外周血中收集、分離得到的T細胞用于改造之前需要先進行活化。為了獲得CAR的組成型表達，通常使用經(jīng)過基因工程改造、能編碼全長CAR分子的慢病毒或γ逆轉(zhuǎn)錄病毒（逆轉(zhuǎn)錄病毒家族的兩個成員）來感染T細胞。CD3單克隆抗體（OKT3）能夠特異性識別T細胞表面的CD3分子，通過T細胞表面TCR-CD3復(fù)合物與抗原提呈細胞(antigenpresentingcell,APC)表面MHC-II類分子-抗原肽的結(jié)合，導(dǎo)致T細胞活化、增殖。激動型抗CD28抗體對天然CD28受體的伴隨刺激可以進一步促進T細胞的活化。最常見的用于T細胞體外活化的是抗CD3抗體和抗

CD28抗體

。義翹助力T細胞活化CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州CD3epsilon/CD3e抗體Types:RabbitMonoclonal,RabbitPolyclonal,MouseMonoclonalFluorophore:FITC,PE,APCApplications:ELISA,WB,IP,FCMCD3ErecombinantproteinCD3D&CD3EHeterodimerCD3E&CD3GHeterodimerSDSPurity>95%ELISAactiveCat：CT038-H2508H義翹神州CD28抗體Types:RabbitMonoclonal,RabbitPolyclonal,MouseMonoclonalFluorophore:FITC,PE,APCApplications:ELISA,WB,IP,FCMCD28recombinantprotein

Cat:90182-C02HSDSPurity>95%ELISAactive義翹神州義翹助力CAR開發(fā)雜交瘤技術(shù)平臺噬菌體展示技術(shù)平臺單B細胞技術(shù)平臺scFv開發(fā)CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州SPR是制藥行業(yè)的“金標準”，被收錄進《2020版中國藥典》BLI是全球增長最快的非標記（label-free）檢測技術(shù)提供實時的、非標記的分子相互作用信息，監(jiān)控整個分子間的結(jié)合過程，并計算出分子之間的親和力(KD)、結(jié)合速率(ka)、解離速率(kd)等重要數(shù)據(jù)；用于各類小分子化合物、多肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸和寡聚糖直至類脂、噬菌體、病毒和細胞等相互作用的研究。表面等離振子共振（Surfaceplasmonresonance，SPR）生物膜干涉技術(shù)（Bio-LayerInterferometry，BLI）兩個常規(guī)用于親和力檢測的技術(shù)CAR-T分子親和力案例展示義翹神州義翹助力CAR-T基因轉(zhuǎn)導(dǎo)γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（retroviralvector,RV）是第一個也是廣泛應(yīng)用于臨床的病毒載體。γRV轉(zhuǎn)染范圍廣，能轉(zhuǎn)導(dǎo)多種類型的細胞，但由于外周血淋巴細胞沒有進行有效的循環(huán)，所以它們在被γRV成功轉(zhuǎn)導(dǎo)之前需要被體外激活；病毒基因組能整合到宿主基因組，保證目的基因長期、穩(wěn)定地表達；轉(zhuǎn)基因負荷量大；生產(chǎn)技術(shù)成熟，可批量生產(chǎn)。慢病毒載體：由于慢病毒載體（lentiviralvector）含有順式作用元件中央多聚嘌呤區(qū)（centralpolypurinetract，cPPT）使其能有效感染靜止T細胞。慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率接近100%，高于γRV；轉(zhuǎn)基因負荷量更大，可容納6.5kb的外源基因且基因毒性更小。這些優(yōu)勢讓科研人員以極大的熱情投入到慢病毒載體的研究中，臨床試驗也日益增多。轉(zhuǎn)座子：病毒載體的致病性和潛在的插入誘變可能性在人類臨床試驗中存在顯著的監(jiān)管障礙，非病毒載體的開發(fā)顯得十分重要。轉(zhuǎn)座子和mRNA電穿孔技術(shù)是目前研究比較多的兩類非病毒載體系統(tǒng)，轉(zhuǎn)座子最終可能發(fā)展成多功能T細胞基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)，但目前的DNA電穿孔方法通常產(chǎn)生較差的細胞活力，臨床應(yīng)用中需要擴大T細胞培養(yǎng)以產(chǎn)生大量T細胞。mRNA電穿孔技術(shù)：目前，mRNA電穿孔被認為是最安全的T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法。將編碼目的基因的mRNA與增加穩(wěn)定性和長期表達的修飾物，通過電穿孔技術(shù)導(dǎo)入細胞質(zhì)中，mRNA不需要進入細胞核就能表達，發(fā)生插入突變的幾率極低。mRNA電穿孔技術(shù)能轉(zhuǎn)導(dǎo)靜止或增殖緩慢的T細胞；轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，多在90%以上；設(shè)計相對容易，性價比高。CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體/慢病毒載體試劑：——轉(zhuǎn)染試劑高蛋白表達低毒性覆蓋多數(shù)細胞種類產(chǎn)品名稱產(chǎn)品描述貨號Sinofection?TransfectionReagent獲取的重組慢病毒TCID50可以達到10^7以上STF02Sinofection?轉(zhuǎn)染試劑某品牌轉(zhuǎn)染試劑48hrsposttransfection義翹神州cellCelltypedescription293HHumanembryonickidneycells293FTHumanembryonickidneycells293EHumanembryonickidneycells293FHumanembryonickidneycellsMCF-7HumanbreastadenocarcinomacellsHepG2HumanhepatocellularcarcinomacellsHelaHumancervicalcarcinomacellsSF9Ovary,SpodopterafrugiperdacellsRAW264.7MouseleukaemicmonocytemacrophagecelllineCHO-K1ChinesehamsterovarycellsDG44ChinesehamsterovarycellsCOS7AfricanGreenMonkeySV40-transfdkidneyfibroblastcelllineBHK21BabycoloncarcinomacellsSW480HumancoloncarcinomacellsMDCKMadin-Dabycaninekedneycells適用細胞：HEK293（293F、293E、293H、293FT、293S等懸浮細胞）倍增時間：<26hrs最大細胞生長密度：8.0X106cells/ml成功表達：超過5000種蛋白及抗體產(chǎn)品性能細胞生長與蛋白表達效率比肩國際知名品牌01品質(zhì)保證每年5萬升以上使用量，上千種蛋白生產(chǎn)驗證，Nature等高影響因子雜志文獻應(yīng)用02貨期保證單次配液能力達2500升，庫存充足03高品質(zhì)保證γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體/慢病毒載體試劑：——細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品名稱產(chǎn)品描述內(nèi)毒素含量（EU/mL）貨號SMM293-TI無血清培養(yǎng)基無動物源組分、無血清、無抗生素<10M293TI義翹神州慢病毒包裝過程中核酸去除至關(guān)重要產(chǎn)品名稱產(chǎn)品描述內(nèi)毒素含量（EU/mL）貨號SuperNuclease>99%<0.22SSNP01γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體/慢病毒載體試劑：——核酸酶-Supernuclease

(Benzonase?同類核酸酶)核酸酶電泳純度DNA降解效率HPLC檢測曲線義翹神州在CAR-T治療過程中，需將經(jīng)過技術(shù)改造的T細胞進行體外培養(yǎng)，達到符合治療要求的細胞數(shù)量（一般一個病人需要幾十億，甚至上百億個CAR-T細胞）后，再把它們回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)靶向殺死癌細胞。細胞因子（cytokines,CKs）是一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)（約5-20kDa），它們在細胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮重要作用。適當?shù)募毎蜃佑欣贑AR-T細胞的持續(xù)激活。義翹助力CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州無IL-2（5-21天）加入IL-2（5-9周）10.1182/blood-2007-12-128843IL-2提升CAR-Tcell留存時間義翹神州CancerImmunolRes.2019May;7(5):759-772.doi:10.1158/2326-6066.CIR-18-0466.IL-15提高CAR-T細胞抗腫瘤活性義翹神州質(zhì)量保證管理體系人員，設(shè)備，供應(yīng)商，原材料管理體系文件記錄管理生產(chǎn)記錄質(zhì)量文件或記錄經(jīng)QA審核和批準GMP級質(zhì)量管理體系符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》體系符合ISO9001:2015和ISO13485:2016體系FDADMF備案質(zhì)量控制體系符合《中國藥典》2020年版三部通則符合USP<1043>AncillaryMaterialsForCell,Gene,andTissue-engineeredProducts產(chǎn)品安全性檢測體系細菌內(nèi)毒素＜5-10EU/mg宿主蛋白殘留檢測＜0.5μg/mg（500ppm）宿主DNA殘留檢測＜100pg/mg支原體檢測無菌檢測外源病毒檢測異常毒性檢測GMP級細胞因子義翹神州產(chǎn)品特點高純度：SDS≥95%和或SEC-HPLC≥95%低內(nèi)毒素：<5-10EU/mg高活性高批間一致性穩(wěn)定性檢測凍融穩(wěn)定性25°C加速穩(wěn)定性37°C加速穩(wěn)定性提供配套的產(chǎn)品手冊制劑形式：液體有效期原材料分類說明產(chǎn)品原產(chǎn)地說明TSE/BSE聲明穩(wěn)定性數(shù)據(jù)質(zhì)量管理體系認證證書產(chǎn)品質(zhì)量標準產(chǎn)品檢驗報告書…GMP級細胞因子義翹神州產(chǎn)品質(zhì)量控制-以GMP-IL21產(chǎn)品為例高純度高批間一致性高活性高穩(wěn)定性GMP級細胞因子義翹神州CAR-T細胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)前需經(jīng)過嚴格的放行檢測。CAR-T細胞質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響臨床治療效果和患者的健康，如不進行嚴格檢測，甚至會危及患者的生命。CAR-T細胞的質(zhì)量檢測主要包括生化檢測、微生物檢測和細胞學(xué)檢測。生化檢測主要用于CAR-T的鑒別和純度檢測細胞學(xué)檢測主要是細胞計數(shù)、活率檢測、體外效價檢測（ELISA檢測試劑盒）等微生物檢測主要進行總厭氧菌計數(shù)、酵母和霉菌檢測等。義翹助力CAR-T細胞質(zhì)量檢測CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州CAR表達水平可以通過流式細胞術(shù)檢測CAR陽性T細胞的百分比來評估針對抗原結(jié)合部位的CAR陽性率檢測方法分子標記物BCMAPE/FITC/BiotinylatedCD22PE/BiotinylatedCD33PE/FITC/BiotinylatedCD38PE/FITC/BiotinylatedROR1BiotinylatedEpCAMBiotinylatedEGFRBiotinylatedHer2/ERBB2BiotinylatedVEGFR2/KDRBiotinylatedULBP1BiotinylatedULBP2Biotinylated標記蛋白列表（部分）流式細胞術(shù)的應(yīng)用義翹神州CAR-T的效價檢測可以用細胞因子ELISA檢測試劑盒來實現(xiàn)，通過檢測代表性細胞因子的表達來評估CAR-T細胞對靶細胞的殺傷活性和特異性Kit貨號抗原種屬SBI分子線性范圍（pg/ml）KIT11848HumanIL218.75-1200KIT10015HumanCSF27.81-500KIT10134HumanCCL23.91-250KIT10270HumanLTA7.82-500KIT10369HumanIL134.69-300KIT10395HumanIL618.75-1200KIT10602HumanTNF23.44-1500KIT10636HumanCX3CL17.82-500KIT10888HumanCXCL915.63-1000KIT10947HumanIL1023.44-1500KIT11064HumanIL3262.5-4000KIT11725HumanIFNG93.75-6000KITCT011HumanIL12A&IL12B39.07-2500KIT11846HumanIL47.8-500KIT12047HumanIL17A4.6-300KIT10098HumanIL815.625-1000細胞因子ELISA試劑盒產(chǎn)品列表（部分）細胞因子ELISA檢測義翹神州scFv開發(fā)CAR-T分子親和力抗CD3抗體抗CD28抗體γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體/慢病毒載體轉(zhuǎn)染試劑，培養(yǎng)基，核酸酶

GMP級細胞因子流式細胞術(shù)鑒別標記靶點蛋白細胞因子ELISA檢測義翹助力CAR-T細胞開發(fā)全流程CAR-T細胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR-T細胞培養(yǎng)CAR-T細胞質(zhì)量檢測體外靶細胞殺傷實驗CAR-T細胞靶向殺死腫瘤細胞收集、分離T細胞T細胞活化嵌合抗原受體-CAR義翹神州CAR-T重要靶點介紹03義翹神州/10.1038/d41573-022-00095-1血液瘤/實體瘤研發(fā)數(shù)目對比血液瘤最熱靶點實體瘤最熱靶點義翹神州已上市藥物靶點商品名藥品名靶點ABECMA?idecabtagenevicleucelBCMABREYANZI?lisocabtagenemaraleucelCD19CARVYKTITM

ciltacabtageneautoleucelBCMAKYMRIAHTM

tisagenlecleucelCD19TECARTUSTM

brexucabtageneautoleucelCD19YESCARTATM

axicabtageneciloleucelCD19阿基侖賽注射液FKC-876CD19瑞吉奧倫塞注射液relma-celCD19義翹神州CD19與B細胞活化、信號傳導(dǎo)及生長調(diào)節(jié)密切相關(guān)，是B淋巴細胞表面的一種功能受體分子，在B細胞抗原受體識別抗原時構(gòu)成B細胞雙重抗原結(jié)合模型，參與B細胞內(nèi)Ca2+的轉(zhuǎn)運,調(diào)節(jié)B細胞的活化與增殖。CD19是B細胞的生物標志物，被廣泛應(yīng)用于白血病、淋巴瘤及免疫系統(tǒng)疾病的診斷和預(yù)后判斷。據(jù)不完全統(tǒng)計，全世界已有300多個已完成和正在進行的CAR-T臨床試驗，其中約150個針對CD19，占總數(shù)的50％。CD19

doi:10.1186/2162-3619-1-36義翹神州CD19CD19復(fù)合物和作用機理CD19通過調(diào)節(jié)B細胞受體（Bcellreceptor,BCR）依賴性和非依賴方式調(diào)節(jié)B細胞發(fā)育、增值與分化。CD19與BCR和其他表面分子結(jié)合，可以直接和間接地募集和結(jié)合各種下游蛋白激酶。CD19與CD21、四跨膜蛋白CD81（TAPA-1）以及CD225共同形成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物。

doi:10.1186/2162-3619-1-36義翹神州BCMATNFRSF17是腫瘤壞死因子受體(TNFR)家族的一員，又名B細胞成熟抗原BCMA。BCMA高度特異地表達于骨髓瘤細胞系和多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者的腫瘤細胞表面，調(diào)節(jié)B細胞成熟及分化。BCMA并不表達于CD34+造血干細胞或大多數(shù)正常組織細胞表面。多發(fā)性骨髓瘤（MM，Multiplemyeloma）是僅次于非霍奇金淋巴瘤的第二大常見血液惡性腫瘤，其特點是患者骨髓中漿細胞惡性增生。BCMA靶向療法最大的特點之一就是只關(guān)注MM一種疾病，BCMA在其他組織細胞中幾乎不表達。10.3389/fimmu.2018.01821義翹神州高品質(zhì)血液惡性腫瘤靶點蛋白義翹神州（SinoBiological,Inc.）現(xiàn)擁有多種高品質(zhì)血液惡性腫瘤靶點分子的蛋白，可用于CAR-T細胞的活性檢測。圖1.人CD20（Cat：11007-H34E）與針對CD20的單克隆抗體藥物A的ELISA結(jié)合檢測圖2.未標記的人CD30(Cat：10777-H08H)和生物素化標記的人CD30(Cat：10777-H08H-B)與CD30L的ELISA結(jié)合檢測圖3.凍干批次和液體批次的人IL1R3（Cat：10121-H03H）與IL1B的ELISA結(jié)合檢測義翹神州官方名常用名重組蛋白表達宿主腫瘤類型TNFRSF17BCMAHumancells多發(fā)性骨髓瘤IL3RACD123Humancells惡性髓系腫瘤SDC1CD138Humancells多發(fā)性骨髓瘤CD19Humancells白血病，淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤MS4A1CD20E.coli白血病，淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤CD22Siglec-2HumancellsB細胞淋巴瘤TNFRSF8CD30Humancells淋巴瘤CD33Siglec-3Humancells惡性髓系腫瘤CD38Humancells急性粒細胞白血病，多發(fā)性骨髓瘤CD5Leu-1HumancellsT細胞急性淋巴母細胞性淋巴瘤NCAM1CD56Humancells急性粒細胞白血病ULBP1NKG2Dligand1Humancells多種血液惡性腫瘤ULBP2NKG2Dligand2Humancells多種血液惡性腫瘤IL1RAPIL1R3Humancells慢性粒細胞白血病ROR1Humancells非小細胞肺癌，乳腺癌，白血病注：義翹可提供列表中分子對應(yīng)的生物素化蛋白義翹神州高品質(zhì)實體瘤靶點蛋白義翹神州（SinoBiological,Inc.）現(xiàn)擁有多種高品質(zhì)實體瘤靶點分子的蛋白，可用于CAR-T細胞的活性檢測。圖1.生物素化的人ErbB2蛋白(Cat：10004-H08H-B)與ErbB2抗體（Herceptin?）的ELISA結(jié)合檢測圖2.生物素化標記的人GPC3蛋白(Cat：10088-H08H-B)和未標記的人GPC3蛋白(Cat：10088-H08H)與FGF蛋白的ELISA結(jié)合檢測圖3.兩種不同PD-1抗體藥物與人PD-1蛋白(Cat：10377-H08H)的ELISA結(jié)合檢測義翹神州官方名常用名重組蛋白表達宿主腫瘤類型CEACAM5CEAHumancells多種實體瘤（肺癌，結(jié)直腸癌，胃癌，乳腺癌，胰腺癌）METc-METHumancells乳腺癌EGFRHumancells/Insectcells結(jié)腸直腸癌，晚期EGFR陽性實體瘤EGFRⅧInsectcells膠質(zhì)母細胞瘤EPCAMCD32