超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定食物中毒樣品中α-茄堿和α-卡茄堿

1/1超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定食物中毒樣品中α-茄堿和α-卡茄堿超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定食物中毒樣品中-茄堿和-卡茄堿超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定食物中毒樣品中-茄堿和-卡茄堿劉紅河康莉廖仕成劉桂華深圳市疾病預(yù)防控制中心摘要：

目的建立一種超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定包括土豆、加工食品、血清及尿液中龍葵素主要成分-茄堿和-卡茄堿的確證方法,為龍葵素中毒提供證據(jù)和治療依據(jù)。

方法粉碎均勻樣品用5%乙酸水溶液進(jìn)行超聲提取,對于土豆樣品,提取液用乙腈稀釋后上機(jī)測定;加工食品、患者嘔吐物樣品、血液和尿液樣品的提取液采用MCX固相萃取柱進(jìn)行凈化,用含5%氨水的乙腈洗脫,收集流出液,將流出液在50℃水浴下氮吹濃縮至干。

加入1.0mL乙腈-水(90+10,v/v)溶解,過0.22m濾膜。

待測物經(jīng)WatersUPLCBEHAmide柱分離,選用含2mmol/L乙酸銨的乙腈-水為流動相,10min內(nèi)梯度洗脫分離-茄堿和-卡茄堿;在優(yōu)化的質(zhì)譜條件下,采用ESI源、正離子模式、多反應(yīng)監(jiān)測方式,外標(biāo)法定量。

結(jié)果在濃度范圍1.0~200.0g/L內(nèi)-茄堿和-卡茄堿在不同基質(zhì)樣品中均有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r在0.9988~0.9997,土豆樣品的最低檢測限為0.60g/kg(-茄堿)和0.21g/kg(-卡茄堿),血液或尿液樣品分別為0.08g/L(-茄堿)和0.04g/L(-卡茄堿)。

方法回收率在82.6%~105.5%之間,RSD為1.93%~5.11%。

結(jié)論該方法測定各種中毒樣品中-茄堿和-卡茄堿的殘留量簡便、快速、準(zhǔn)確,可以用于因龍葵素中毒的應(yīng)急事件處理,為臨床治療提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：

茄堿;色譜法,高壓液相;食物中毒;：

作者簡介：

劉紅河(1970),男,碩士研究生,主任技師,主要從事食品理化檢驗(yàn)研究工作收稿日期：

2016-02-03基金：

深圳市科技計(jì)劃(醫(yī)藥衛(wèi)生類)資助項(xiàng)目(編號:201302146)Determinationof-solanineand-chaconineinfoodpoisoningDeterminationof-solanineand-chaconineinfoodpoisoningsamplesbyultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometrysamplesbyultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometryLIUHong-heKANGLiLIAOShi-chengLIUGui-huaShenzhenCenterforDiseaseControlandPrevention;Abstract：

ObjectiveAnultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry(UPLC-MS/MS)methodwasestablishedfordeterminationof-solanineand-chaconineeinfoodpoisoningsamplesincludingpotatoes,processedfood,vomit,serum,andurine.MethodsThesampleswereextractedwith5%aceticacidbyultrasonicinstrument.Forpotatosample,thesupernatantwasdilutedwithacetonitrileanddetectedbyUPLC-MS/MS.Forsamplesofprocessedfood,vomit,serum,andurine,thesupernatantswerecleaned-upbysolid-phaseextractionwithamixedmodecationexchange,andelutedwithacetonitrile(containing5%ammoniawater).Thenthepurifiedsolutionwasconcentratedbynitrogen,dissolvedwithacetonitrile-water(90+10,v/v)andcleanedby0.22mmilliporefilter.ThesampleextractwasseparatedonaWatersUPLCBEHAmidecolumnbygradientelutionin10minuteswithacetronitrilewater(containing2mmol/Lammoniumacetate)asmobilephase.ThefiltratewasdetectedbyUPLC-MS/MS,identifiedbyelectrosprayionizationinpositivemodeusingmultiplereactionmonitoring,andquantifiedwithexternalstandards.ResultsThecalibrationcurvesof-solanineand-chaconineeinseveralpoisoningsamplesshowedgoodlinearityintherangeof1.0-200.0g/Lwithcorrelationcoefficientintherangeof0.9988-0.9997.Thedetectionlimitofthemethodwere0.60g/kg(-solanine)and0.21g/kg(-chaconinee)forpotato,0.08g/L(-solanine)and0.04g/L(-chaconinee)forserumandurine.Therecoveriesofthreespikinglevelsrangedfrom82.6%to105.5%,andRSDsof1.93%-5.11%wereobtained.ConclusionThismethodissimple,rapid,andaccurateforthedeterminationofresiduesof-solanineand-chaconineeinpoisoningsamplesandcanbeusedforemergencydetectionofsolaninepoisoning.Keyword：

Solanine;Chromatography,highpressureliquid;Foodpoisoning;Received：

2016-02-03土豆是受人們歡迎的糧食作物之一,在許多國家和地區(qū)作為主食食用。

但土豆植株及其塊莖中含有有毒糖苷生物堿龍葵素(Solanine),特別是變綠或發(fā)芽的土豆中龍葵素含量會顯著增高[1-2]。

龍葵素主要成分為以茄啶為糖苷配基構(gòu)成的茄堿和卡茄堿,一共有6種不同的糖苷生物堿,其中-茄堿(-solanine)和-卡茄堿(-chaconinee)含量占土豆所有6種糖苷生物堿的95%,是土豆龍葵素的主要形式[3-4]。

結(jié)構(gòu)式見圖1。

微量的龍葵素具有治療風(fēng)濕病、平喘、抗癌等多方面的醫(yī)療作用[5]。

但是如果進(jìn)食龍葵素含量較高的土豆可能引起中毒,成年人1次進(jìn)食超過200mg龍葵素的量可引起明顯的急性中毒反應(yīng)。

每年世界各地均有龍葵素中毒的事件發(fā)生,一般為集體中毒事件,多為食用了發(fā)芽、變綠的土豆后引發(fā)的中毒[6-7]。

中毒癥狀包括消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道系統(tǒng)癥狀,主要表現(xiàn)為惡心嘔吐、腹痛、腹瀉、頭痛、眩暈、發(fā)熱、瞳孔散大、呼吸困難、顏面青紫,嚴(yán)重者可昏迷抽搐,甚至可因呼吸中樞麻痹而死亡[5]。

目前有關(guān)龍葵素的檢測尚無國家標(biāo)準(zhǔn)方法,報(bào)道也較少,日常的應(yīng)急檢測采用的是利用龍葵素的生物堿特性用不同顯色劑產(chǎn)生顯色反應(yīng)的方式來判斷,方法的特異性和靈敏度均較差,也無法準(zhǔn)確定量。

目前文獻(xiàn)報(bào)道的方法主要有紫外分光光度法(UV)[8]、薄層色譜法(TLC)[9]、高效液相色譜法(HPLC)[10-11]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等[12-14],檢測的對象主要為土豆,對于土豆加工后的食品和疑似中毒患者嘔吐物、血清和尿液等生物材料樣品的檢測報(bào)道較少。

本文在總結(jié)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,以龍葵素的主要成分-茄堿和-卡茄堿作為研究對象,建立了土豆、土豆加工食品、嘔吐物、血清及尿液中龍葵素的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。

方法操作簡便、快速、靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定可靠,通過對實(shí)際樣品進(jìn)行分析,取得較好的效果,可用于有關(guān)土豆中龍葵素引起食物中毒應(yīng)急檢測的高靈敏確證檢測。

圖1-茄堿(左)和-卡茄堿(右)結(jié)構(gòu)式下載原圖1材料和方法1.1儀器APIQTRAP4500三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國ABSciex公司),ShimadzuLC-20ADXRUFLC超快速液相色譜儀(日本Shimadzu公司);PeekInfinity1031氮?dú)獍l(fā)生器(英國peek公司);XS-205DU十萬分之一天平(瑞士Mettler-Toledo公司);KQ-250DV超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);AllegraX-22R高速冷凍離心機(jī)(美國BeckmanCoulter公司);TurboVapⅡ型氮吹濃縮儀(美國Caliper公司);MS3型漩渦振蕩器(德國IKA公司);OasisMCX固相萃取柱,60mg,3mL(美國Waters公司);0.22m有機(jī)系針筒式微孔濾膜過濾器。

1.2試劑-茄堿(alpha-Solanine),純度99.6%;-卡茄堿(alpha-Chaconine)純度99.9%,均購于美國ChramaDex公司。

乙腈、甲醇、正己烷和甲酸均為色譜純(德國Merck公司),水為二次蒸餾超純水,實(shí)驗(yàn)所用其他試劑除已注明外均為分析純。

1.3樣品來源包括加工食品(清炒土豆和土豆燒肉),模擬中毒患者嘔吐物、血清和尿液樣品(非龍葵素中毒患者生物材料樣品添加適量龍葵素標(biāo)準(zhǔn)充分混勻所得樣品),超市采購5批土豆樣品。

1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1樣品提取1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1樣品提取土豆樣品的提取:取1g(精確到0.01g)粉碎均勻的土豆樣品于50mL離心管中,加入4mL5%乙酸水溶液,渦流混合2min后,超聲提取15min,于5000r/min離心15min,取上清液0.50mL用乙腈定容到5mL,過0.22m濾膜,上機(jī)測定。

另取同一粉碎均勻的土豆1g(精確到0.01g)6份,分別用4mL70%甲醇溶液超聲提取15min、4mL乙醇-乙酸水浴回流提取60min和4mL乙醇-乙腈-冰乙酸(5+3+2)混合溶劑超聲提取15min等3種提取方法進(jìn)行提取,每種方法平行處理2份樣品,按上面方法進(jìn)行處理后上機(jī)測定,以比較不同提取條件下提取效率。

加工食品或患者嘔吐物樣品的提取:取1g(精確到0.01g)混勻的加工食品或患者嘔吐物樣品于50mL離心管中,加入4mL5%乙酸水溶液,渦流混合2min后,超聲提取15min,加入5mL乙腈,再超聲10min,于5000r/min離心15min,避開表面油脂層取上清液1.0mL,用5%乙酸水溶液定容到5mL,待SPE凈化。

血液和尿液樣品的提取:取血液或尿液樣品0.10mL,于15mL離心管中,加入0.90mL5%乙酸水溶液充分混勻,渦流混合2min,超聲10min,再加入2mL乙腈,再超聲10min,于5000r/min離心10min,取上清液,用5%乙酸水溶液定容到5mL,待SPE凈化。

1.4.2固相萃取凈化分別采用C18、混合陽離子交換樹脂(MCX)、混合陰離子交換樹脂(MAX)、弱陽離子交換樹脂(WCX)等填料的固相萃取柱進(jìn)行凈化,固相萃取柱依次用2mL乙腈和2.0mL5%乙腈水溶液活化后,將上面加工食品、患者嘔吐物、血液或尿液樣品提取液分別加入不同SPE柱,棄去流出液;一批樣品依次用2.0mL水和2.0mL5%乙腈水溶液淋洗柱子,另取一部分樣品依次用2.0mL5%乙酸水和2.0mL10%乙腈水溶液淋洗柱子;棄去流出液,抽干SPE柱;C18填料的SPE柱用5.0mL乙腈洗脫,MCX和WCX填料的SPE柱用5.0mL含5%氨水的乙腈洗脫,MAX填料的SPE柱用5.0mL含5%乙酸的乙腈洗脫;收集流出液,將流出液在50℃水浴下氮吹濃縮至干。

加入1.0mL乙腈-水(90+10,v/v)溶解,過0.22m濾膜,上機(jī)分析。

1.4.3液相色譜分析條件選擇分別用WatersUPLCBEHC18(2.1mm50mm1.7m)、WatersUPLCBEHC18(2.1mm100mm1.7m)、WatersUPLCBEHHILIC(2.1mm100mm1.7m)和WatersUPLCBEHAmide(2.1mm100mm1.7m)4種色譜柱進(jìn)行分離檢測,流動相為A為含2mmol/L乙酸銨的水溶液,B為含2mmol/L乙酸銨的乙腈溶液;柱溫30℃。

進(jìn)樣體積:10L。

統(tǒng)一采用梯度洗脫程序,見表1。

表1-茄堿和-卡茄堿流動相梯度洗脫條件下載原表1.4.4質(zhì)譜定性及定量優(yōu)化條件選擇離子源為ESI(+),檢測方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM),利用保留時(shí)間和碎片信號比值判斷定性結(jié)果。

在300~700℃之間采用50℃步長優(yōu)化離子源溫度,最終確定550℃;在3000~5500V之間采用100V為步長優(yōu)化噴霧電壓,最終確定為4500V;同樣采用自動掃描優(yōu)化的方式確定入口電壓為10V、氣簾氣壓力為206.8kPa,碰撞氣流速為中等、源內(nèi)氣流速為55L/min、輔助氣流速為55L/min、駐留時(shí)間為100ms;采用蠕動泵進(jìn)樣方式手動優(yōu)化的其他MRM,參數(shù)見表2。

表2-茄堿和-卡茄堿MRM部分參數(shù)表下載原表1.4.5標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及樣品檢測分別稱取0.00500g-茄堿和-卡茄堿標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇定容至5mL,配制成濃度為1.0g/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液,于-20℃冰箱內(nèi)避光保存。

分別吸取-茄堿和-卡茄堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1mL,用乙腈稀釋至100mL,得到-茄堿和-卡茄堿質(zhì)量濃度為10g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

準(zhǔn)確移取1.0mL10g/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液于10mL棕色容量瓶中,用乙腈定容至10mL,制備成濃度為1.0g/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:對于土豆、加工食品和患者嘔吐物樣品,分別吸取1.0g/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0L,用起始流動相配成質(zhì)量濃度為0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0g/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣測定后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;血清和尿液樣品選取經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)不含-茄堿和-卡茄堿的空白血清或尿液作為基質(zhì)匹配樣品,取7份空白血清或尿液樣品各0.1mL,分別加入1.0g/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0L,按樣品前處理方法進(jìn)行處理后,制備成基質(zhì)加標(biāo)工作曲線,濃度依次為0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0g/L,測定后繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

將上述處理好的樣品液進(jìn)樣10L,和標(biāo)準(zhǔn)系列一起用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分離檢測,相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算。

1.4.6準(zhǔn)確度和精確度測定由于難以找到不含-茄堿和-卡茄堿的空白基質(zhì)土豆樣品,本研究中挑選采用預(yù)實(shí)驗(yàn)測定含量較低的土豆樣品來進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)。

土豆粉碎混勻后取1.00g于50mL離心管分別加入-茄堿和-卡茄堿含量均為0.1、1.0、10.0mg/kg3個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)使用液,血液和尿液樣品取0.10mL分別加入-茄堿和-卡茄堿濃度為0.01、0.1、1.0mg/L3個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)使用液,每個(gè)水平均制備6份加標(biāo)樣品,同時(shí)準(zhǔn)備2份樣品用于測定本底值。

將上述樣品按照樣品處理方法進(jìn)行處理,上機(jī)測定。

2份平行樣品測定結(jié)果均值作為樣品本底值,計(jì)算加標(biāo)回收率,以回收率作為準(zhǔn)確度指標(biāo),以同一加標(biāo)水平6份樣品測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)作為精密度指標(biāo)。

2結(jié)果和討論2.1樣品提取條件的優(yōu)化目前文獻(xiàn)報(bào)道的土豆樣品龍葵素的提取方法效果較好的主要有4類[15-16]:70%甲醇溶液超聲提取、乙醇-乙酸水浴回流提取、乙醇-乙腈-冰乙酸(5+3+2)混合溶劑提取法和乙酸溶液漩渦振蕩提取,本研究中采用在同一份粉碎均勻的土豆參照文獻(xiàn)方法分別用不同提取方法提取后測定-茄堿和-卡茄堿的含量,根據(jù)絕對含量高低來判斷提取效率,結(jié)果見表2。

采用甲醇超聲提取和乙醇-乙酸水浴回流等方式處理樣品,提取效率偏低;乙酸溶液漩渦振蕩提取方式,提取操作簡單,在乙酸濃度為5%~15%時(shí)提取效率最高(同一樣品測定含量最高),同樣對于血清、尿液及嘔吐物等樣品也得出一樣的結(jié)果,因此最終所有樣品均采用含5%乙酸的水溶液提取。

表3不同提取方式測定結(jié)果(mg/kg)下載原表2.2固相萃取條件的優(yōu)化本研究發(fā)現(xiàn)樣品經(jīng)5%乙酸水溶液提取后,采用加入乙腈使蛋白變性沉淀可達(dá)到較好的凈化效果。

土豆樣品提取后回收率可達(dá)到80%以上,說明土豆基質(zhì)對測定干擾不嚴(yán)重,不需要進(jìn)一步的凈化,而加工食品、嘔吐物、血清和尿液樣品由于基質(zhì)比較復(fù)雜,存在較嚴(yán)重基質(zhì)干擾,僅采用乙酸水溶液提取和加入乙腈使蛋白變性后測定回收率僅在50%左右,達(dá)不到定量分析要求,需要采用進(jìn)一步凈化手段,本研究考慮采用固相萃取這種目前通用的有機(jī)物凈化手段來進(jìn)行凈化。

比較C18、MCX、MAX、WCX等不同填料的SPE柱,發(fā)現(xiàn)采用C18小柱凈化的回收率小于30%,MAX小柱回收率僅約為20%,WCX小柱回收率也僅約為50%。

由于-茄堿和-卡茄堿為堿性化合物,適合用MCX固相萃取小柱進(jìn)行凈化。

樣品采用乙酸溶液提取后,可以使待測物-茄堿和-卡茄堿帶上正電荷而被MCX小柱保留,用含5%氨水的乙腈溶液可將待測物洗脫。

采用在不同樣品中添加最終含量為10mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定來考察提取物的基質(zhì)干擾情況及固相萃取小柱的凈化效果。

經(jīng)過MCX凈化后,加標(biāo)回收率顯著提高(回收率可由50%提升達(dá)85%以上)。

經(jīng)過這些凈化步驟,土豆、加工食品、嘔吐物等樣品基質(zhì)效應(yīng)不太明顯,但血清和尿液樣品仍有少量的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

由于缺少同位素內(nèi)標(biāo),同時(shí)也難以找到不含龍葵素的土豆、加工食品、嘔吐物等樣品,本方法僅對血清和尿液樣品采用基質(zhì)加標(biāo)來制備工作曲線進(jìn)行定量,以抵消基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),土豆、加工食品、嘔吐物等樣品測定采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量,方法操作簡單、結(jié)果可靠。

2.3色譜條件的選擇-茄堿和-卡茄堿為堿性化合物親水性的化合物,因此重點(diǎn)比較了幾種適合極性物質(zhì)保留的色譜柱,C18柱無法分離2種成份(見圖2A、B);HILIC柱分離效果較好,保留時(shí)間適中,但對-茄堿測定較差,靈敏度也稍低(見圖2C),而Amide柱,2種物質(zhì)均峰形尖銳、靈敏度較高,因此實(shí)際測定選用WatersUPLCBEHAmide色譜柱,結(jié)果見圖2D;液質(zhì)聯(lián)用所用流動相常用為乙腈-水和甲醇-水,在流動相中添加甲酸、乙酸銨、乙酸等以提高離子化效率,通過比較幾種不同的流動相體系和添加甲酸和乙酸銨,發(fā)現(xiàn)流動相添加2mmol/L乙酸銨-茄堿和-卡茄堿的靈敏度、分離度和峰形均達(dá)到最好。

圖2土豆樣品中-茄堿和-卡茄堿的在不同色譜條件下的總離子流(TIC)及定量離子色譜圖下載原圖圖2土豆樣品中-茄堿和-卡茄堿的在不同色譜條件下的總離子流(TIC)及定量離子色譜圖下載原圖注:A:C18柱分離效果圖;B:HILIC柱分離效果圖;C:Amide柱分離效果圖;D:WatersUPLCBEHAmide色譜柱效果圖2.4質(zhì)譜的定性及質(zhì)譜優(yōu)化條件選擇根據(jù)-茄堿和-卡茄堿的分子結(jié)構(gòu)特征,本研究中選擇了ESI(+)電離模式。

用針泵連續(xù)直接進(jìn)樣,分別對噴霧電壓、離子源溫度、氣簾氣、碰撞氣、源內(nèi)氣、輔助氣、去簇電壓、入口電壓、碰撞氣能量、碰撞池電壓等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,以確定-茄堿和-卡茄堿的母離子和子離子,以強(qiáng)度較大的子離子作為定量離子,而以強(qiáng)度稍小的子離子作為定性離子,以樣品中定量離子和輔助定性離子這兩對離子強(qiáng)度比不得超過系列標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)的離子強(qiáng)度比均值的20%作為定性確證的質(zhì)量控制依據(jù)。

各化合物定量離子及定性離子詳見表1。

2.5線性范圍和檢出限在上述分析條件下,以-茄堿和-卡茄堿的標(biāo)準(zhǔn)峰面積為縱坐標(biāo),以-茄堿和-卡茄堿的濃度為橫坐標(biāo),計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程,見表3。

結(jié)合取樣量以3倍信噪比在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得結(jié)果分別計(jì)算土豆、加工食品、嘔吐物、血清和尿液樣品的檢出限(LOD),結(jié)果見表3。

表3-茄堿和-卡茄堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限下載原表2.6準(zhǔn)確度和精密度此方法對3類樣品3種濃度水平加標(biāo)平均回收率為82.6%~105.5%,RSD為1.93%~5.11%(見表4),該方法精密度好,穩(wěn)定可靠。

表4-茄堿和-卡茄堿的加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)下載原表2.7實(shí)際樣品檢測用建立的方法分析了某食物中毒患者嘔吐物、血液、尿液,土豆加工食品及5批市售土豆樣品,結(jié)果見表5。

食物中毒患者的嘔吐物、血液、尿液均未檢出-茄堿和-卡茄堿,事后該患者的臨床診斷上也排除了龍葵素中毒。

土豆樣品均不同程度檢出-茄堿和-卡茄堿,土豆莖塊中-茄堿和-卡茄堿含量分別在0.1~15.6mg/kg和0.3~26.2mg/kg范圍內(nèi),土豆皮中-茄堿和-卡茄堿含量分別在22.7~128.5mg/kg和39.3~404.0mg/kg范圍內(nèi),提示土豆皮中龍葵素含量顯著高于土豆莖塊,在食用時(shí)應(yīng)去皮以免發(fā)生中毒。

3結(jié)論本次建立的是測定土豆、加工食品、嘔吐物、血清和尿液樣品中-茄堿、-卡茄堿的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。

樣品采用5%乙酸水溶液提取其中的-茄堿和-卡茄堿,提取液加入乙腈沉淀蛋白后,用5%乙酸水稀釋降低乙腈含量比例后,采用MCX固相萃取小柱凈化,在優(yōu)化的液相色譜條件與質(zhì)譜儀器條件下對樣品進(jìn)行檢測,取得較好的效果,該分析方法快速,準(zhǔn)確,選擇性好,可作為公共衛(wèi)生突發(fā)事件土豆中毒的快速確證檢測,為公共衛(wèi)生突發(fā)事件的應(yīng)急檢測和臨床中毒病人的診斷確認(rèn)提供了有效的技術(shù)手段。

表5實(shí)際樣品中-茄堿和-卡茄堿的測定結(jié)果(mg/kg)下載原表參考文獻(xiàn)[1]GrunenfelderLA,KnowlesLO,HillerLK,etal.Glycoalkaloiddevelopmentduringgreeningoffreshmarketpotatoes(SolanumtuberosumL.)[J].JAgricFoodChem,2006,54(16):5847-5852.[2]楊亮,高榮,陳朗,等.儲藏條件對馬鈴薯塊莖肉質(zhì)部分-茄堿含量的影響[J].作物研究,2012,26(5):487.[3]FriedmanM,DAOL.Distributionofglycoalkaloidsinpotatoplantsandcommercialpotatoproducts[J].JAgricFoodChem,1992,40(3):419-423.[4]JadhavSJ,SharmaRP,SalunkheDK.Naturallyoccurringtoxicalkaloidsinfoods[J].CritRevToxicol,1981,9(1):21-104.[5]鞏江,倪士峰,丘莉惠,等.龍葵素的藥理毒理及藥用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(9):4108-4109.[6]任志遠(yuǎn).一起馬鈴薯龍葵素引起的食物中毒[J].疾病監(jiān)測,2008,23(5):267.[7]周興,林黨柒,楊