《大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（報(bào)批稿）》編制說(shuō)明

PAGE3《大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》編制說(shuō)明目的意義大球蓋菇(Strophariarugosoannulata)，又名皺環(huán)球蓋菇，商品名赤松茸。該菇含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)和多糖等營(yíng)養(yǎng)成分，是國(guó)際菇類交易市場(chǎng)上的十大菇類之一，也是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）向發(fā)展中國(guó)家推薦栽培的蕈菌之一。近年來(lái)，大球蓋菇在全國(guó)發(fā)展勢(shì)頭強(qiáng)勁，多省區(qū)已初步形成一定的生產(chǎn)規(guī)模，并形成“菇稻輪作”、“林下種植”和“設(shè)施化栽培”三種主要生產(chǎn)模式。2021年，全國(guó)農(nóng)技中心下發(fā)《長(zhǎng)江中下游地區(qū)大球蓋菇冬季稻田生態(tài)栽培技術(shù)集成與示范推廣方案》印發(fā)工作的通知，旨在利用長(zhǎng)江中下游稻區(qū)冬季閑田開(kāi)展大球蓋菇生態(tài)栽培工作，不僅可以就地轉(zhuǎn)化利用稻秸稈，提高稻田綜合種養(yǎng)經(jīng)濟(jì)效益，還可以將腐熟轉(zhuǎn)化后的菌渣就地還田，增加稻田土壤有機(jī)質(zhì)含量、提升稻區(qū)耕地質(zhì)量，助力糧食穩(wěn)產(chǎn)豐產(chǎn)。江蘇省目前大球蓋菇種植規(guī)模和技術(shù)水平逐年提高，與其他省份相比，具有設(shè)施化程度高，產(chǎn)品質(zhì)量好，發(fā)展?jié)摿Υ蟮葍?yōu)勢(shì)。食用菌菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，菌種質(zhì)量的好壞直接影響栽培的成敗和產(chǎn)量的高低,只有優(yōu)良的菌種才能獲得高產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,因此生產(chǎn)優(yōu)良的菌種是食用菌栽培的一個(gè)極其重要的環(huán)節(jié)。為更好地規(guī)范大球蓋菇菌種生產(chǎn)，保證菌種供應(yīng)和質(zhì)量，穩(wěn)定提升大球蓋菇產(chǎn)業(yè)效益，現(xiàn)根據(jù)我省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀和大球蓋菇生長(zhǎng)特性，提出本標(biāo)準(zhǔn)的制定是十分必要的。大球蓋菇菌種生產(chǎn)需要?dú)v經(jīng)母種、原種、栽培種三個(gè)階段，周期長(zhǎng)、成本高。本標(biāo)準(zhǔn)的制定和推廣，將原種階段采用先進(jìn)的液體菌種生產(chǎn)工藝，能將整個(gè)菌種生產(chǎn)周期縮短1/4，菌齡一致、活力強(qiáng)，為種植戶提供更價(jià)廉物美的大球蓋菇菌種，確保大球蓋菇生產(chǎn)的安全、優(yōu)質(zhì)，使生產(chǎn)者的效益得到保障和提升。這對(duì)促進(jìn)江蘇省乃至全國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，實(shí)現(xiàn)鄉(xiāng)村振興具有重要的意義。任務(wù)來(lái)源根據(jù)江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局《省市場(chǎng)監(jiān)管局關(guān)于組織申報(bào)2022年度江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的通知》（蘇市監(jiān)標(biāo)函〔2021〕356號(hào)）的文件要求，由江蘇江南生物科技有限公司、江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、丹陽(yáng)市園藝推廣站、鎮(zhèn)江市標(biāo)準(zhǔn)化研究中心等單位共同提出了標(biāo)準(zhǔn)編制申請(qǐng)，并獲得立項(xiàng)。編制過(guò)程3.1前期工作江蘇江南生物科技有限公司從2020年10月開(kāi)始在公司基地進(jìn)行大球蓋菇冬季稻田生態(tài)栽培生產(chǎn)示范，同時(shí)結(jié)合公司現(xiàn)有的全套草菇、鹿茸菇菌種生產(chǎn)線，開(kāi)展大球蓋菇菌種的自繁自產(chǎn)自用，積累了大量生產(chǎn)一手?jǐn)?shù)據(jù)。并在2022年1月提交了標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)申請(qǐng)。3.2標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)2022年5月，江蘇江南生物科技有限公司收到江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局《省市場(chǎng)監(jiān)管關(guān)于下達(dá)2022年度江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（蘇市監(jiān)標(biāo)[2022]192號(hào)），聯(lián)合江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、丹陽(yáng)市園藝推廣站、鎮(zhèn)江市標(biāo)準(zhǔn)化研究中心等單位成立了標(biāo)準(zhǔn)起草小組，啟動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)編制工作，開(kāi)展多方調(diào)研，召開(kāi)相關(guān)會(huì)議。編制小組確定了主要編制原則、編制大綱、人員分工和進(jìn)度計(jì)劃。3.3初稿起草標(biāo)準(zhǔn)起草小組通過(guò)認(rèn)真學(xué)習(xí)《中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化法》和《中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化法釋義》、《地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》以及《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于做好地方標(biāo)準(zhǔn)管理有關(guān)工作的通知》等法律法規(guī)有關(guān)規(guī)定，查閱了大量相關(guān)的文獻(xiàn)資料，認(rèn)真收集食用菌菌種、大球蓋菇菌種生產(chǎn)相關(guān)的國(guó)家及省、市法律法規(guī)、政策文件、國(guó)家和地方標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)各條款進(jìn)行研究并修訂，標(biāo)準(zhǔn)編制小組人員經(jīng)過(guò)多次討論和研究，形成標(biāo)準(zhǔn)初稿。3.4征求意見(jiàn)為廣泛征求各方意見(jiàn)，江蘇江南生物科技有限公司通過(guò)函件和發(fā)放調(diào)查表等方式征求了上海市農(nóng)科院、安徽省農(nóng)科院、江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院等10家相關(guān)單位意見(jiàn)和建議，截至2023年7月20日，共收到22條反饋建議，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)起草小組研究與討論，對(duì)22條反饋意見(jiàn)全部采納，根據(jù)處理意見(jiàn)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行修改和完善，最終形成了送審稿。3.5審查報(bào)批2024年6月29日，省市場(chǎng)管理局組織召開(kāi)了標(biāo)準(zhǔn)終審會(huì)，會(huì)議邀請(qǐng)五名專家對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容進(jìn)行了再次審查，編制單位根據(jù)終審會(huì)意見(jiàn)修改，形成報(bào)批稿。四、主要內(nèi)容技術(shù)指標(biāo)確定為規(guī)范大球蓋菇菌種生產(chǎn)硬件設(shè)施要求和生產(chǎn)操作程序，提升菌種質(zhì)量，本標(biāo)準(zhǔn)主要包括大球蓋菇菌種生產(chǎn)的內(nèi)容和要求，標(biāo)準(zhǔn)具體結(jié)構(gòu)框架如下：4.1第一章規(guī)定了標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍。本文件規(guī)定了大球蓋菇菌種生產(chǎn)的基本要求，母種，原種，栽培種，記錄與留樣的要求。本文件適用于大球蓋菇菌種生產(chǎn)。4.2第二章列出了規(guī)范引用文件，主要包括《GB4806.7食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸用塑料材料及制品》、《GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》、《NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》等。4.3第三章對(duì)本文件中出現(xiàn)的重要術(shù)語(yǔ)給出了準(zhǔn)確定義。本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4.4第四章提出了大球蓋菇菌種生產(chǎn)的技術(shù)人員、場(chǎng)地選擇、廠房設(shè)置和布局、設(shè)備設(shè)施、使用品種和種源等應(yīng)符合NY/T528規(guī)定的基本要求。4.5第五章詳細(xì)規(guī)定了大球蓋菇母種生產(chǎn)技術(shù)要求。在母種生產(chǎn)階段，其容器、培養(yǎng)基、配制滅菌、冷卻、接種培養(yǎng)等環(huán)節(jié)技術(shù)指標(biāo)可以參考NY/T528種母種的規(guī)定。4.6第六章詳細(xì)規(guī)定了大球蓋菇原種的生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程，又分為固體原種和液體原種兩種形式。4.6.1固體原種固體原種生產(chǎn)要求分容器、培養(yǎng)料、配置滅菌、接種培養(yǎng)、質(zhì)量檢驗(yàn)五個(gè)小節(jié)。其容器應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。固體原種培養(yǎng)料配方參考了《DB36/T1742-2023大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》和《DB61/T1674-2023大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》中原種的培養(yǎng)料配方，經(jīng)公司實(shí)際使用驗(yàn)證，推薦了兩個(gè)配方：1） 谷粒98%，碳酸鈣2%，含水量60%～62%。2） 木屑78%，麩皮20%，碳酸鈣2%，含水量60%～62%。固體原種的配制和滅菌過(guò)程，按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入原種瓶（袋），121℃～123℃滅菌2h。固體原種接種培養(yǎng)，培養(yǎng)料料溫冷卻至26℃以下，按NY/T528的規(guī)定接種，做好標(biāo)記。接種后置于培養(yǎng)室，23℃～25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55％～65％，二氧化碳濃度低于0.5%，當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿瓶（袋）時(shí)結(jié)束培養(yǎng)。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。質(zhì)量檢驗(yàn)對(duì)下步栽培種生產(chǎn)尤為重要，培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢查要求放在規(guī)范性附錄A。4.6.2液體原種液體原種生產(chǎn)又分搖瓶液體菌種和發(fā)酵罐液體菌種。這兩種液體菌種生產(chǎn)要求又分培養(yǎng)基、配置滅菌、接種培養(yǎng)、質(zhì)量檢驗(yàn)四個(gè)小節(jié)。因?yàn)楣腆w原種可以直接銷售，需要對(duì)其容器進(jìn)行規(guī)定。而液體原種一般不直接銷售，只是作為固體栽培種的過(guò)渡性生產(chǎn)資料存在，所以對(duì)其容器不作規(guī)定。搖瓶液體菌種生產(chǎn)的培養(yǎng)基在傳統(tǒng)PDA培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，增加了稻殼浸出液，能夠顯著提高菌絲的生物量，具體為：馬鈴薯200g（浸出液）、稻殼100g（浸出液）、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g、加水至1000mL，pH自然。配制滅菌過(guò)程參考了PDA培養(yǎng)基配制滅菌過(guò)程，是微生物學(xué)常規(guī)操作，具體為：馬鈴薯和稻殼煮汁過(guò)濾后，加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，加水至1000mL攪拌均勻，裝入搖瓶，裝液量為搖甁容量的2/5，塞子封口并用硫酸紙或牛皮紙包扎。裝好的搖瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，設(shè)置溫度121℃，滅菌30min。接種培養(yǎng)步驟借鑒微生物無(wú)菌接種操作流程：培養(yǎng)基冷卻后置于消毒后的超凈工作臺(tái)上，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作程序，將母種塊切割成3～5mm顆粒，迅速轉(zhuǎn)接與待接種搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，每100mL液體培養(yǎng)基接種10粒。接種后在25℃環(huán)境下靜置培養(yǎng)2～3d，待接入的菌種塊萌發(fā)出白色菌絲體后，置于振蕩培養(yǎng)箱，150rpm振蕩培養(yǎng)10～14d，培養(yǎng)出搖瓶液體菌種。發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)技術(shù)指標(biāo)來(lái)源于工業(yè)微生物發(fā)酵常用技術(shù)參數(shù)和江南生物公司實(shí)際數(shù)據(jù)。原料攪拌均勻，不應(yīng)有結(jié)塊，轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)，裝液量不超過(guò)罐體容量的70%，加入0.03%消泡劑。121℃滅菌90min。生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。培養(yǎng)基溫度降至26℃以下，維持罐體壓力在0.03MPa，快速接入搖瓶菌種。接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總體積的0.1%～0.2%。維持罐體壓力在0.03Mpa，溫度25℃，攪拌狀態(tài)下培養(yǎng)7d～10d。質(zhì)量檢驗(yàn)對(duì)下步栽培種生產(chǎn)尤為重要，培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，液體與固體菌種質(zhì)量檢驗(yàn)要求略有差異，檢查要求放在規(guī)范性附錄B。4.7第七章詳細(xì)規(guī)定了大球蓋菇栽培種的容器、培養(yǎng)料、配置滅菌、接種培養(yǎng)、質(zhì)量檢驗(yàn)和儲(chǔ)藏等生產(chǎn)技術(shù)要求。容器按照GB/T528的規(guī)定。宜使用17cm×35cm×0.005cm規(guī)格的聚丙烯塑料袋，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。培養(yǎng)料的確定參考《DB36/T1742-2023大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》和《DB61/T1674-2023大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》和根據(jù)公司實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用推薦了兩個(gè)配方:1)雜木屑43%，稻殼30%，玉米芯20%，麩皮或米糠5%，石膏1%，石灰1%，含水量63%～65%。2)雜木屑76%，稻殼20%，黃豆粉2%，石灰1%，石膏1%，含水量63%～65%。配制滅菌過(guò)程按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入菌種袋，121℃～123℃滅菌2h。接種培養(yǎng)過(guò)程按照微生物無(wú)菌操作，滅菌結(jié)束后在冷卻室冷卻至25℃以下。固體原種接種按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行。發(fā)酵罐液體原種用液體菌種接種器接種，每袋接種量20mL～30mL，封口并貼好標(biāo)簽。接種后置于培養(yǎng)室，23℃～25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55％～65％，二氧化碳濃度低于0.5%，待菌絲長(zhǎng)滿菌袋。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求見(jiàn)附錄A。菌種儲(chǔ)藏，完成培養(yǎng)后，菌種應(yīng)在4℃冷庫(kù)內(nèi)儲(chǔ)藏，室溫或高溫存放容易照成菌種的老化。存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30d，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)同樣容易照成菌種老化。4.8第八章對(duì)菌種記錄與留樣要求做了規(guī)定，按照各級(jí)菌種按NY/T528的規(guī)定建立生產(chǎn)記錄并留樣，檔案保留2年以上。4.9附錄部分主要針對(duì)菌種的質(zhì)量做了要求，按照固體和液體菌種的差異分成了附錄A和附錄B，其內(nèi)容指標(biāo)來(lái)源于微生物學(xué)檢驗(yàn)和NY/T528的規(guī)定。五、與相關(guān)法律法規(guī)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本文件與現(xiàn)行有關(guān)法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)相協(xié)調(diào)一致。本文件制定中未采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，在第四、五、六、七、八章中引用了部分國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，具體如下：4基本要求技術(shù)人員、場(chǎng)地選擇、廠房設(shè)置和布局、設(shè)備設(shè)施、使用品種和種源應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。5.4冷卻斜面凝固后，按NY/T528的規(guī)定進(jìn)行試管滅菌效果檢驗(yàn)。5.5接種培養(yǎng)按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行，做好標(biāo)記。6.1.1容器符合NY/T528的規(guī)定，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。6.1.3配制滅菌按NY/T528的規(guī)定配制。6.1.4接種培養(yǎng)按NY/T528的規(guī)定接種。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。6.2.2.2配制滅菌生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。7.3配制滅菌按NY/T528的規(guī)定配制。7.4接種培養(yǎng)固體原種接種按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。8記錄與留樣各級(jí)菌種按NY/T528的規(guī)定建立生產(chǎn)記錄并留樣。六、重大分歧意見(jiàn)的處理過(guò)程和依據(jù)本文件編制過(guò)程中無(wú)重大分歧意見(jiàn)。標(biāo)準(zhǔn)編制組與行業(yè)專家經(jīng)過(guò)多次研討，積極采納了所提出的修改建議，最終形成報(bào)批稿。七、實(shí)施推廣建議本標(biāo)準(zhǔn)主要針對(duì)當(dāng)前省內(nèi)傳統(tǒng)大球蓋菇固體菌種培養(yǎng)周期長(zhǎng)、生長(zhǎng)緩慢、菌絲容易老化等問(wèn)題，充分發(fā)揮工廠化菌種生產(chǎn)的技術(shù)和平臺(tái)優(yōu)勢(shì)，使菌種生產(chǎn)規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，為廣大菇農(nóng)提高優(yōu)質(zhì)的大球蓋菇菌種，降低菇農(nóng)生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，提高生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益。為了能使本標(biāo)準(zhǔn)盡快得到相關(guān)部門與生產(chǎn)單位的認(rèn)可，首先要注重標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容宣貫，通過(guò)報(bào)紙、網(wǎng)絡(luò)等媒介，提升標(biāo)準(zhǔn)工作在社會(huì)中的影響力，確保標(biāo)準(zhǔn)得到推廣和應(yīng)用，使菌種生產(chǎn)單位與個(gè)人盡快掌握大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)，推動(dòng)我國(guó)大球蓋菇食用菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，為農(nóng)民增收致富發(fā)揮積極作用。八、起草人員信息及分工本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇江南生物科技有限公司、江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、丹陽(yáng)市園藝推廣站、鎮(zhèn)江市標(biāo)準(zhǔn)化研究中心協(xié)作完成。起草小組人員和信息如下：姓名工作單位職稱/職務(wù)分工李輝平江蘇江南生物科技有限公司（掛職）江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院副研