【化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在HBV檢驗中的對比探析4700字（論文）】

III化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在HBV檢驗中的對比分析TOC\o"1-3"\h\u摘要 I前言 11材料與方法 11.1基礎(chǔ)材料 11.1.1納入標準 11.1.2排除標準 11.2方法 11.2.1觀察指標 21.2.2統(tǒng)計學(xué)方法 22結(jié)果 22.1兩類方法乙肝五項檢測結(jié)果比較 22.2兩類方法檢驗HBV陽性的一致性分析 23討論 3參考文獻 4摘要目的：化學(xué)發(fā)光和ELISA檢測HBV的臨床意義。方法：選擇2021年1月至2021年6月住院治療的疑似乙肝病毒感染患者100例，進行研究，在確認所有患者病例資料完整后抽取其空腹血，用化學(xué)發(fā)光法和ELISA法測定5個病人的五個項目，比較兩種方法在五個項目中的陽性檢出率的比較，并以實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）對HBV感染的檢測結(jié)果作為金標準，采用Kappa檢驗分別對化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測HBV陽性水平的靈敏度、特異度和準確率進行比較，并將兩類檢測方法與金標準的一致性Kappa值進行對比。結(jié)果：化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HbeAb陽性檢出率與對照組比較顯示出更高水平（P＜0.05），兩類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽性檢出率上未顯示明顯差異（P＞0.05）。經(jīng)一致性檢驗顯示，酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、結(jié)果顯示，Kappa值為0.801，而ELISA與CR檢測結(jié)果的一致性為88.24%；化學(xué)發(fā)光檢測HBV陽性率96.92%，特異性88.57%,94.00%,94.00%,94.03%，陰性93.94%，與PCR檢驗的一致性檢驗Kappa值為0.866，與酶聯(lián)免疫法比較顯示出明顯更高水平。結(jié)論：化學(xué)發(fā)光法在對乙肝病毒五項血清檢測中表現(xiàn)出更高的價值。關(guān)鍵詞化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫法；乙肝病毒；乙肝五項前言乙肝是一種慢性乙型肝炎病毒（HBV）的持續(xù)感染所致的一種慢性疾病。乙肝在發(fā)展中國家人群中較為常見，也是全世界十大死亡原因之一，其主要傳播途徑為血液、體液及性傳播，因而也被列為性傳播疾病[1]。大多數(shù)情況下，HBV病毒的潛伏期是無癥狀的，通常是在體檢中發(fā)現(xiàn)的，當前臨床主要可通過乙肝五項對患者HBV感染情況進行分析，而對乙肝五項的檢測主要包括化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法，酶聯(lián)免疫法是一種更廣泛使用的臨床檢測方法，主要的醫(yī)療設(shè)備具備試驗條件，價格便宜，并且適用于公共測試；但是，它在定量分析中有一些弊端，特別是當血清樣品濃度太高時，假陰性的因素影響疾病的診斷[2]。化學(xué)發(fā)光免疫測定法是一種新型的免疫測定技術(shù)，可以高精度地進行定量分析[3]。本研究旨在比較化學(xué)發(fā)光與ELISA在乙肝病毒檢測中的差別，以便為目前的臨床試驗技術(shù)提供參考。1材料與方法1.1基礎(chǔ)材料選取2021年1月-2021年6月確診的HBV疑似病例，其中52名男性，48名女性，44~53歲，平均年齡48.53±4.51歲；全部病人都有全部的病歷，并在住院期間被抽取空腹靜脈血，進行乙肝五項檢查。本研究在將研究的目的和意義報告給倫理委員會并在獲取批準后開展相應(yīng)病例的收集工作。1.1.1納入標準（1）有HBV感染者接觸史，且伴有肝痛、乏力等肝病癥狀；（2）44~53歲；（3）患者對于研究相關(guān)信息已掌握，并且愿意簽字配合相關(guān)研究。1.1.2排除標準（1）近期已使用相應(yīng)的抗病毒治療藥物；（2）免疫疾病患者；（3）全身或局部急慢性感染患者；（4）既往乙肝或其他類型病毒感染史；（5）血液系統(tǒng)疾病。1.2方法血樣采集：所有疑似患者，均開展化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢測。在檢測前，為了保持檢測結(jié)果的準確性，需要患者在檢驗前一天，晚8時開展禁食。于第二天清晨，開展乙肝病毒血液檢測，即收集清晨空腹靜脈血5mL，對血清實施分離，保持分離頻率達到3000r，離心處理10分鐘，血清分離后，開展相應(yīng)的檢測。分成三份，分別采取化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、熒光定量PCR（qPCR）檢測、對乙肝五項進行檢測，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）等指標[4]?；瘜W(xué)發(fā)光法：按照試劑盒（天津博奧賽斯生物科技有限公司）說明書操作，依次加入各類試劑和樣品，37℃孵育30min，吸出反應(yīng)液后，加入洗滌液洗5次吸干，加入發(fā)光劑，于發(fā)光儀（天津博奧賽斯生物，400T）下測定發(fā)光強度，計算獲得相應(yīng)濃度。酶聯(lián)免疫吸附法：按照試劑盒（上海榮盛生物藥業(yè)有限公司）說明書操作，分別用雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、競爭抑制法，各試劑室溫放置30min平衡至室溫，分別設(shè)置空白對照1孔，陰、陽性對照各2孔，加入標準液和特異酶各50μL。加待測樣品，每孔50μL，空白對照孔不加，充分混合均勻后蓋上專用膜，37℃孵育30min。洗板5次，拍干。加入顯色劑AB各0.05mL，充分混合均勻，37℃覆膜避光反應(yīng)15~30min，加入終止液終止反應(yīng)，于酶標儀讀取OD值。熒光定量PCR：使用熒光定量測定儀（西安天隆熒光定量PCR儀）對血清樣本進行測定，使用配套試劑盒按說明書進行操作。1.2.1觀察指標（1）兩種方法的正確性檢驗，化學(xué)發(fā)光法：HBsAg檢測值大于0.33

IU/mL，HBsAb檢測值高于12IU/mL,HBeAg的相對光強/臨界相對光強度不低于1,HBeAb和HBcAb的相對光強/臨界相對光強水平不超過1，則被認為是陽性；ELISA:HBeAb和HBcAb的相對光強/臨界相對光強度不大于1；HBsAg、HBsAb、HBeAg均不小于1時，可被認為是陽性；通過測定的結(jié)果，將HBV血清標記的陽性檢出率進行對比，并從正確率上分析兩者的差異。（2）以PCR檢測作為金標準，采用Kappa檢驗分別對化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測HBV陽性水平的靈敏度、特異度和準確率進行比較，并將兩類檢測方法與金標準的一致性Kappa值進行對比，PCR檢測HBV定量測量值＞5.0×102cps/mL為陽性，比較兩種檢測方法敏感度、特異性、準確性。1.2.2統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，用例或百分比（n，%）表述計數(shù)資料，以x2檢驗，一致性分析采用Kappa檢驗，Kappa＜0.4、0.4-0.7、＞0.7分別表示一致性差、中等、良好，當Ｐ＜0.05時，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1兩類方法乙肝五項檢測結(jié)果比較化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HbeAb陽性檢出率與對照組比較顯示出更高水平（P＜0.05），兩類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽性檢出率上未顯示明顯差異（P＞0.05）。見表1。表1兩類方法乙肝五項檢測結(jié)果比較（n,%）檢測方法例數(shù)HBsAgHBsAbHBeAgHbeAbHBcAb總陽性率化學(xué)發(fā)光法10065（65.00）58（58.00）34（34.00）28（28.00）44（44.00）67（67.00）酶聯(lián)免疫法10051（51.00）52（52.00）36（36.00）16（16.00）39（39.00）66（66.00）x24.0230.7270.0885.0070.5150.022P0.0450.3940.7670.0250.4730.8812.2兩類方法檢驗HBV陽性的一致性分析100例研究對象經(jīng)PCR檢驗顯示HBV陽性為65例，經(jīng)一致性檢驗顯示，酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、陰性預(yù)測值為88.24%，CR檢測和ELISA的一致性檢驗Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光檢測HBV陽性率96.92%，特異性88.57%,94.00%,94.00%,94.03%，陰性93.94%，與PCR檢驗的一致性檢驗Kappa值為0.866，與酶聯(lián)免疫法比較顯示出明顯更高水平。見表2、表3。表2兩類方法檢驗HBV陽性情況比較HBV陽性n化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)免疫法陽性陰性陽性陰性是6563（63.00）2（4.00）61（61.00）4（4.00）否354（4.00）31（31.00）5（5.00）30（30.00）合計10067（67.00）33（33.00）66（66.00）34（34.00）表3兩類方法檢驗HBV陽性的一致性分析檢查方式靈敏度（%）特異度（%）準確率（%）陽性預(yù)測值（%）陰性預(yù)測值（%）Kappa值化學(xué)發(fā)光法96.9288.5794.0094.0393.940.866酶聯(lián)免疫法93.8585.7191.0092.4288.240.8013討論在中國乙肝的發(fā)生率非常高，傳染方式主要是血液感染、性傳染、母嬰感染等，嚴重阻礙了人們的生活和健康[5]。中國與其他國家相比，潛在感染的人很多，所以特別是對肝炎患者進行治療和診斷時，有效且科學(xué)的診斷和評價很重要。乙型肝炎最早期的臨床診斷始于1980年乙肝現(xiàn)有5種檢測技術(shù)的應(yīng)用，在一定范圍內(nèi)促進了乙肝的臨床預(yù)防和診斷，但其應(yīng)用僅限于單一的定性檢測，難以判斷疾病的狀態(tài)和走向的定量動態(tài)分析，嚴重影響了疾病預(yù)防和診斷的精度[6]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乙肝五項及HBV-DNA檢驗技術(shù)的提高，使得該病的發(fā)生及動態(tài)定量分析準確性被大大提高，目前，主要有乙肝單一五項檢查、與HBV前s抗原組合的乙肝五項檢查、與HBV-DNA檢測組合的乙肝五項檢查等臨床檢測方法，使得乙肝臨床檢測的失誤率被較大程度的降低，對于更早發(fā)現(xiàn)疾病或幫助醫(yī)師制定臨床治療方案存在一定意義[7]。本研究結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HbeAb陽性檢出率與對照組比較顯示出更高水平，兩類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽性檢出率上未顯示明顯差異，提示化學(xué)發(fā)光法在可通過HBsAg、HbeAb陽性異常檢出來提高對患者乙肝檢測的準確性?；瘜W(xué)發(fā)光法是根據(jù)被測物質(zhì)與相應(yīng)的檢測試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)光強度來判斷被測物質(zhì)的濃度。由于檢測發(fā)光強度與被測物質(zhì)存在線性定量關(guān)系，因此，化學(xué)發(fā)光是非常敏感的。與ELISA相比，化學(xué)發(fā)光法具有更高的靈敏度，對于被測標志物的含量檢測準確率高，誤診率低，隨著化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的發(fā)展，其在乙型肝炎五項標志物檢測中具有重要的應(yīng)用價值。HBsAg主要屬于HBV的外殼蛋白成分，其水平可在HBV感染后1~2周內(nèi)出現(xiàn)異常，并因為病情進展而持續(xù)變化；HbeAb則主要受到HBsAg刺激而產(chǎn)生抗體，對于HBV復(fù)制過程的反應(yīng)也有一定效果，而化學(xué)發(fā)光法對其更靈敏的檢測使得該類方法對HBV陽性的檢出更具價值[9]。經(jīng)一致性檢驗顯示，酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、陰性預(yù)測值為88.24%，和酶聯(lián)免疫法與CR檢驗的一致性檢驗Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光法檢驗HBV陽性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準確率為94.00%、陽性預(yù)測值為94.03%、陰性預(yù)測值為93.94%，與PCR檢驗的一致性檢驗Kappa值為0.866，與酶聯(lián)免疫法比較顯示出明顯更高水平。酶聯(lián)免疫吸附法根據(jù)抗原與抗體的特異性結(jié)合現(xiàn)象，可以利用酶與基質(zhì)之間的催化作用和對待測物的定量測定，來同時測定抗原和抗體。盡管在臨床應(yīng)用廣泛，但該方法對抗原抗體結(jié)合位點較為看重，本方法對不適宜的抗原進行標記，能維持原抗體的最大免疫，但易產(chǎn)生交叉反應(yīng)。試驗物質(zhì)的濃度越高，酶標抗原或抗體越少，用儀器測定的吸光度值越低[10]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析主要由抗原抗體檢測系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)構(gòu)成，免疫反應(yīng)特異性強，化學(xué)發(fā)光靈敏度高。通過與發(fā)光試劑標記的抗原和抗體組合的免疫反應(yīng)產(chǎn)生免疫現(xiàn)象，加入化學(xué)基質(zhì)，在聚乙烯醇的催化反應(yīng)下發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，氧化成刺激的中間體?？梢杂没瘜W(xué)發(fā)光檢測器檢測一定程度的光信號強度，從而實現(xiàn)對被測對象定性定量的檢測?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)包括化學(xué)發(fā)光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫、電化學(xué)發(fā)光免疫三大類，各類方法標志物有所不同。其中化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)反應(yīng)機理為氧化還原反應(yīng)，不會對人體產(chǎn)生明顯損害；化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)結(jié)合的底物與前者有所區(qū)別，在與結(jié)合抗原抗體分離后可發(fā)生能量躍遷，因此，產(chǎn)生對應(yīng)強度的光線，由此進行量化；電化學(xué)發(fā)光免疫法結(jié)合了前兩種方法的高特異性和高靈敏度，電化學(xué)發(fā)光試劑主要用于抗體和抗原的標記，磁珠作為將檢測對象及其相應(yīng)的抗體固定在磁微球上的固體載體，免疫結(jié)合后，抗體免疫組合物在磁珠上生成，磁場施加到反應(yīng)介質(zhì)的外側(cè)，復(fù)合體被磁性機架吸附凝聚，彈跳物質(zhì)通過洗滌被去除，磁珠結(jié)合物的發(fā)光強度被測量，未知濃度的抗原被準確的測量[11]。綜上，電化學(xué)發(fā)光法在檢測患者血清乙肝五項的應(yīng)用價值相較于酶聯(lián)免疫法來說更高，有著更良好的靈敏度、準確率及特異度，值得臨床推廣和應(yīng)用。參考文獻[1]沈國強,王曉明,唐森龍.兩種不同方法檢測乙肝病毒感染的臨床效果比較[J].現(xiàn)代診斷與治療,2015,26(20):4709-4710.[2]萬獎.探討不同免疫檢驗方法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果差異性[J].中國醫(yī)藥指南,2020,18(3):4