探究 實(shí)踐 DNA的粗提取和鑒定 教學(xué)課件

DNA的粗提取與鑒定

思考：如何將DNA提取出來，并進(jìn)行鑒定呢?（一）基礎(chǔ)知識(shí)基本思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。（二）DNA粗提取的原理---DNA的溶解性和耐受性1、DNA不溶于酒精溶液

DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可初步分離DNA與蛋白質(zhì)。2、DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同3、DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性①蛋白酶—水解蛋白質(zhì)，對(duì)DNA沒有影響。②高溫—大多數(shù)

在60～80℃時(shí)變性沉淀,而

在

80℃以上才會(huì)變性。③洗滌劑—溶解細(xì)胞膜，

去除

;

但對(duì)DNA沒有影響。蛋白質(zhì)DNA脂質(zhì)、蛋白質(zhì)4、DNA的鑒定在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，因此用二苯胺試劑鑒定DNA分子。DNA+二苯胺沸水浴藍(lán)色（三）目的要求1、了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)；理解DNA粗提取

和鑒定的原理2、學(xué)會(huì)DNA粗提取的方法以及利用二苯胺試劑

對(duì)DNA進(jìn)行鑒定（四）材料用具

不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時(shí)，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認(rèn)為如下提供的材料中哪些不適合提取DNA？為什么？供選材料：（括號(hào)內(nèi)為染色體條數(shù)）新鮮洋蔥（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、獼猴桃（58）；豬肝（38）、魚卵、雞血（78）、哺乳動(dòng)物的成熟紅細(xì)胞；在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌（1）原則上，凡是含有DNA的生物材料都可以考慮選用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大。1、實(shí)驗(yàn)材料的選取2、實(shí)驗(yàn)用具燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。（五）方法步驟：1.研磨洋蔥2.過濾獲取含DNA的上清液3.冷卻酒精析出DNA4.DNA的鑒定稱取約30g洋蔥切碎，放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨。1.研磨洋蔥在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。也可直接將研磨液倒入塑料離心管中，1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液放入燒杯中。2.過濾獲取含DNA的上清液研磨洋蔥或?qū)⑷芤旱谷胨芰想x心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。3.冷卻酒精析出DNA在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。4.DNA的鑒定取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCI溶液中。4.DNA的鑒定1號(hào)試管2號(hào)試管加入2mol/LNaCl溶液5mL5mL絲狀物(DNA)不加加入用玻璃棒攪拌無絲狀物溶解加入二苯胺試劑4mL4mL沸水浴5min5min觀察現(xiàn)象不變藍(lán)變藍(lán)鑒定結(jié)果操作提示①獲取材料時(shí)，選取DNA含量多的，不同實(shí)驗(yàn)材料提取DNA的方法可能稍有不同。②粗提取DNA時(shí)，用玻璃棒攪拌含有懸浮物的溶液時(shí)，不要直插燒杯底部，攪拌要輕緩、并沿一個(gè)方向，以便獲得較完整的DNA分子。③二苯胺試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定結(jié)果。④查閱資料了解實(shí)驗(yàn)室提取純度高的DNA的方法。1、DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它們都是有機(jī)物但都溶于酒精。（）2、做DNA粗提取實(shí)驗(yàn)時(shí)，可用新鮮豬血材料。（）3、在沸水浴的條件下，DNA被甲基綠染成藍(lán)色。（）4、DNA能夠耐受蛋白酶是因?yàn)槊妇哂袑Ｒ恍浴＃ǎ?